痤疮丙酸杆菌对米诺环素的敏感性研究

梅 嬛沈永年吕桂霞蔡 晴刘维达∗

·论著·

痤疮丙酸杆菌对米诺环素的敏感性研究

梅 嬛1沈永年1吕桂霞1蔡 晴2刘维达1∗

目的: 明确痤疮丙酸杆菌对米诺环素的敏感性。方法: 收集236例寻常性痤疮患者并给予米诺环素口服。治疗前采用需氧培养和厌氧培养的方法，对患者皮损进行病原菌分离。治疗前后利用抗菌药敏纸片对痤疮丙酸杆菌进行药物(米诺环素、四环素、罗红霉素和替硝唑)耐药性检测。肉汤稀释法测定米诺环素的最低抑菌浓度。结果: 病原菌分离结果示:前3位病原菌分别为痤疮丙酸杆菌(32.45%)、金黄色葡萄球菌(19.95%)和表皮葡萄球菌(13.83%)；治疗前痤疮丙酸杆菌对米诺环素、四环素、罗红霉素和替硝唑的耐药率分别为0、20.93%、83.72%和98.8%，治疗后为0、47.22%、86.11%和100%。米诺环素对痤疮丙酸杆菌的MIC50和MIC90分别为0.125 μg/mL和0.25 μg/mL。结论: 痤疮丙酸杆菌对米诺环素仍然敏感。

痤疮丙酸杆菌； 米诺环素； 寻常性痤疮； 体外药物敏感试验

寻常性痤疮是一种常见的累及毛囊皮脂腺的慢性炎症性疾病，1其发病机制较为复杂，目前研究表明主要与皮脂分泌过多、毛囊皮脂腺导管开口处角化过度、痤疮丙酸杆菌的繁殖以及炎症反应等因素有关。2研究表明，痤疮丙酸杆菌(P.acnes)在痤疮的多种致病机制中起核心作用。P.acnes可以诱导机体免疫反应和局部炎症的发生，促进P.acnes和其他革兰氏阳性细菌的繁殖，同时也参与了毛囊导管上皮的角化过度。3本研究拟分离236例面部寻常性痤疮患者的致病菌，并针对检出的致病菌进行体外药敏分析，尤其是米诺环素(MNO)在治疗前后对临床分离的P.acnes的抑制作用，进而为临床上治疗寻常性痤疮的抗生素选择提供一定的参考依据。

1 实验材料

1.1 病例来源 收集2012年1月至2013年1月中国医学科学院皮肤病医院、四川大学华西医院、四川省人民医院、第三军医大学西南医院、重庆市第一人民医院、上海长海医院、山东省皮肤病医院和广西医科大学第一附属医院的寻常性痤疮患者共236例。

1.2 标准菌株 痤疮丙酸杆菌ATCC6919，购自广东省微生物菌种保藏中心。

1.3 试验药物 抗菌药敏纸片米诺环素(minocycline，MNO)、四环素(tetracycline，TCY)、罗红霉素(roxithromycin，ROX)和替硝唑(tinidazole，TIN)均购自北京天坛药物生物技术开发公司。

2 实验方法

2.1 病原菌的分离和鉴定 参考相关文献，对分离细菌进行形态学和生理生化鉴定，具体操作流程，见图1。4

2.2 药物敏感试验 采用琼脂扩散法对检出的P.acnes及其标准菌株进行药物敏感试验，结果判定参照2008年美国临床实验室标准化协会(Clinical and Labortatory Standards Institute，CLSI)文件规定的标准折点进行判定。

2.3 MNO体外抗菌活性检测 采用肉汤稀释法对MNO进行最低抑菌浓度(MIC，minimum inhibitory concentration)测定，其操作与判断方法按照文献要求进行。5将新鲜菌落在无菌生理盐水中调至0.5个麦氏浊度，接种在按梯度稀释的含药(MNO)液体培养基中，设置MNO药物浓度为4 μg/mL、2 μg/mL、1 μg/mL、0.5 μg/mL、0.25 μg/mL、0.125 μg/mL、0.06 μg/mL、0.03 μg/mL。并设置溶媒对照(1%DMSO)和空白对照。

图1 病原菌的分离和鉴定操作流程

3 结果

3.1 病原菌分离鉴定结果 服用盐酸MNO缓释片前(V0期)检测236例面部寻常性痤疮患者样本，其中服药后(V1期)140例(96例失访)。V0期检出P. acnes 86株，V1期36株，见表1。检出的病原菌见图2。结果显示，P.acnes V0期的检出率大于V1期的检出率，总检出率为32.4%。在面部寻常性痤疮患者中，检出排在前3位的病原菌分别是P.acnes、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌，占总体检出病原菌的66.1%，除P.acnes外，病原细菌中革兰氏阳性球菌感染率远高于革兰氏阴性杆菌检出率(44.1%，8.2%)。

3.2 药物敏感试验结果 痤疮丙酸杆菌对MNO最为敏感，无耐药现象；对TCY次之，其中有87株为敏感，35株表现为耐药；对TIN最为耐药，122株中仅有1株敏感，其他均为耐药；对ROX的耐药率相对较高，122株中有103株耐药。药敏试验结果详见表2。由表2见，除MNO外其他3种药物在受试后，P.acnes的耐药性都有所提高，其中以TCY最为明显，耐药率由20.93%提高至47.22%。而MNO在受试前后均未有耐药情况出现。

表1 痤疮丙酸杆菌检出率

图2 面部寻常性痤疮检出病原菌种类及数量

表2 122株痤疮丙酸杆菌对4种抗菌药物耐药率

3.3 MNO的体外抗菌活性检测结果 根据药物敏感试验结果显示，P.acnes对MNO的最低抑菌浓度检测(MIC)范围在0.06 μg/mL～4 μg/mL之间，见表3。根据表3可见 MIC50为0.125 μg/mL，MIC90为0.25 μg/mL。

表3 MNO对122株痤疮丙酸杆菌的MIC值范围

4 讨论

针对痤疮病原菌的抗菌药物的使用已成为痤疮治疗的重要手段，6因此关于痤疮患者进行表皮病原菌的分离和药敏检测具有重要的临床参考价值。本次试验对236例面部寻常性痤疮患者进行了感染病原菌的检测，其中P.acnes检出占比最高为32.4%，可见P.acnes是寻常性痤疮的主要病原菌；同时革兰氏阳性球菌的分离检出率远高于革兰氏阴性杆菌，其中葡萄球菌属中的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌等仍然是仅次于P.acnes的病原菌，而大肠埃希菌是革兰氏阴性杆菌中检出率最高的细菌，这与以往文献基本一致。7，8这些条件致病菌或共生细菌在表皮微生态环境被改变的条件下，会过量繁殖从而造成感染，导致疾病的发生。通过横向比较发现，在所选的4种药物当中，TIN和ROX的耐药率较高，而四环素类药物的抑菌效果相对较好，其中MNO敏感性最佳，达到100%；纵向对比显示，经过盐酸MNO缓释片治疗后，P.acnes的检出率有所降低，说明MNO对寻常性痤疮具有一定的抑菌杀菌作用；同时经药敏试验分析，尽管使用了盐酸MNO缓释片治疗，但除MNO之外，用药后相比用药前检出的P.acnes对TCY、ROX以及TIN的耐药性都有所升高，反而MNO未因其为受试药而有耐药现象的发生，由此可见，MNO为一种相对安全的抗生素；在耐药率升高方面，TCY的变化最为显著，推测可能是由于TCY和MNO同属于四环素类药物，而ROX和TIN因不同类而未产生明显升高。另外，结合本次试验的体外抗菌活性检测显示MIC50和MIC90分别为0.125 μg/mL和0.25 μg/mL，与之前文献报道的针对P.acnes的其他多种抗菌药物比较有较好的体外抗菌活性。9

1张学军.皮肤性病学.5版.北京:人民卫生出版社，2001.144.

2 Layton AM.Optinal management of acne to prevent scarring and psychological sequelae.Am J Clin Dematol，2001，2(3):135.

3 Jappe U.Pathological mechanisms of acne with special enphasis on Prolonib－acterlumacnes and related therapy.Acta Derm Venereol，2003，83(4):241.

4陈东科，孙长贵.实用临床微生物学检验与图谱.北京:人民卫生出版社，2011.514.

5叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.3版.南京:东南大学出版社，2006.896.

6庞勤，涂颖，何黎.含青刺果油及马齿苋提取物护肤品辅助治疗寻常型痤疮临床观察.临床皮肤科杂志，2012，41(6):380.

7 Duckney P，Wong HK，Serrano J，et al.The role of the skin barrier in modulating the effects of common skin microbial species on the inflammation，differentiation and proliferation status of epidermal keratinocytes.BMC Research Notes，2013，6:474.

8 Christensen GJ，Brüggemann H.Bacterial skin commensals and their role as host guardians.Beneficial Microbes，2014，5(2): 201.

9徐修礼，刘家云，高天文，等.痤疮丙酸杆菌对抗菌药物的体外抗菌活性分析.解放军医学杂志，2010，35(7):881.

(收稿:2014－11－14 修回:2014－11－25)

Sensitivity of Propionibacterium acnes to minocycline

MEI Huan，SHEN Yong-nian，LV Gui-xia，et al.Institute of Dermatology，Chinese Academy of Medical Sciences，Nanjing，210042

Objective:To determine the sensitivity of Propionibacterium acnes(P.acnes)to minocycline (MNO).Methods:Two hundred and thirty－six patients with acne vulgaris were treated with MNO.Pathogens from the patients were isolated and identified through the method of aerobic and anaerobic cultivation before the treatment.The drug－resistance of P.acnes to minocycline(MNO)，tetracycline(TCY)，roxithromycin (ROX)and tinidazole(TIN)was tested by disk agar diffusion method before and after the treatment.The minimum inhibiting concentration(MIC)of MNO to P.acnes was detected by broth dilution method.Results: The main pathogens were P.acnes(32.45%)，Staphylococcus aureus(19.95%)and Staphylococcus epidermidis(13.83%).The drug－resistance of P.acnes to MNO，TCY，ROX and TIN before the treatment was 0，20.93%，83.72%and 98.8%and after the treatment was 0，47.22%，86.11%and 100%.The MIC50and MIC90of MNO to P.acnes were 0.125 μg/mL and 0.25 μg/mL.Conclusion:P.acnes still remain sensitivity to MNO.

Propionibacterium acnes；minocycline；acne vulgaris；drug sensitive test in vitro

1中国医学科学院皮肤病医院，南京，210042 2上海市皮肤病医院，200050

∗通信作者