梅毒患者血清IL－33和IL－35与梅毒细胞免疫的相关性

张胜佳田洪青李中伟郑荣涛侯建玲李富容

·论著·

梅毒患者血清IL－33和IL－35与梅毒细胞免疫的相关性

张胜佳1田洪青2∗李中伟2郑荣涛2侯建玲2李富容2

目的: 检测梅毒患者血清IL－33和IL－35的表达。方法: 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测梅毒患者和正常对照血清IL－33和IL－35的表达。结果: 梅毒患者血清IL－33和IL－35的表达与对照比较，差异均无统计学意义(P＝0.638和P＝0.122)。一期梅毒、二期梅毒、潜伏梅毒间IL－33和IL－35比较差异亦无统计学意义(P＝0.116，P＝0.132)。结论: 梅毒患者外周血清IL－33和IL－35可能与梅毒的细胞免疫无相关性。

梅毒； 细胞免疫； 白介素33； 白介素35

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum，TP)引起的一种慢性性传播疾病，几乎可侵犯全身各个器官，产生多种多样的症状或体征、功能障碍、组织破坏乃至死亡。梅毒患者的细胞免疫抑制－Th1/Th2反应的失衡(Th1反应向Th2反应漂移)和CD4CD25调节性T细胞(Treg)高度表达是造成机体不能有效清除梅毒螺旋体和病情迁延发展的原因之一。1－3IL－33是IL－1超家族的成员，其特异性受体是ST2。IL－33/ ST2通路是Th2反应的活化因子，诱导Th2型细胞因子的产生，参与Th2型细胞因子介导的炎症反应。4IL－35是IL－12家族成员，由CD4CD25调节性T细胞(Treg)产生，是Treg细胞发挥免疫抑制作用所必需的细胞因子。5IL－35还可以抑制Th17的分化和IL－17的合成而Th17以及它的细胞因子IL－17在梅毒的发病机制中发挥着重要作用。6，7因此我们想通过检测梅毒患者和正常对照组外周血中IL－33和IL－35表达水平，来探讨IL－33、IL－35是否参与梅毒的细胞免疫抑制。

1 资料与方法

1.1 研究对象 研究对象均为2013年4月至2014年3月就诊于我院性病门诊的梅毒初诊患者。梅毒入选标准:未经驱梅治疗；TRUST和TPPA试验均阳性，或TP－PCR阳性。对照入选标准:无梅毒相关临床表现；未经驱梅治疗；TRUST和TPPA试验均阴性；可疑患者如果行TP－PCR检测，结果为阴性。梅毒和对照的排除标准:①HIV抗体检测阳性；②患有自身免疫性疾病或其他感染性疾病者；③妊娠、哺乳期妇女。

入选患者180例，但由于标本试验中蛋白质降解问题，纳入统计的患者数:IL－33为153例、IL－35为133例。IL－33病例组:男71例，女82例；年龄16～86岁(平均32.4岁)；一期梅毒15例，二期梅毒32例，早期潜伏梅毒(病期在2年以内)64例，晚期潜伏梅毒(病期大于2年)42例；有症状梅毒组包括一期和二期梅毒，无症状梅毒组包括早期和晚期潜伏梅毒。IL－35病例组:男65例，女68例；年龄15～86岁(平均32.7岁)；一期梅毒12例，二期梅毒26例，早

期潜伏梅毒59例，晚期潜伏梅毒36例。对照组入选180例，由于蛋白质降解的问题最终纳入统计的例数:IL－33为162例、IL－35为156例。对照组IL－33:男93例、女69例，年龄17～69岁(平均33.2岁)；对照组IL－35:男85例，女71例，年龄18～69岁(平均33.7岁)。

1.2 实验方法

1.2.1 主要仪器和试剂 IL－33、IL－35 ELISA试剂盒(上海严谨生物科技有限公司)；酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司)；微孔振荡器；电热恒温培养箱；TRUST和TPPA试剂盒。

1.2.2 标本采集 抽取患者和对照组静脉血2 mL，收集于无菌干燥试剂管中，静置、分离血清后置于－80℃保存备用。

1.2.3 TRUST、TPPA、HIV检测，操作均严格按照操作规则进行。

1.2.4 IL－33、IL－35水平检测 采用双抗体夹心ELISA方法，严格按照说明书步骤进行操作(标准品的稀释、加样、温育、配液、洗涤、加酶、温育、洗涤、显色、终止、测定)。在450 nm波长按顺序测量出各标本的吸光度(OD值)。用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计描述和分析。非正态分布的计量资料采用中位数(P50)、百分位数(P25，P75)描述；两组独立非正态分布资料比较采用Mann－Whitney检验，3组及以上非正态分布资料比较采用Kruskal－Wallis检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IL－33和IL－35在对照组和病例组的检测结果(表1)，Mann－Whitney检验结果显示 IL－33对照组(162例)和病例组(153例)的浓度差异无统计学意义(P＞0.05)，IL－35对照组(156例)和病例组(133例)的浓度差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 IL－33、IL－35在对照组、一期梅毒组、二期梅毒组、早期潜伏梅毒组、晚期潜伏梅毒组的检测结果(表2)，Kruskal－Wallis检验显示5组间差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.3 IL－33、IL－35在对照组、有症状梅毒组和无症状梅毒组的检测结果(表3)，Kruskal－Wallis检验结果显示，差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 IL－33和IL－35在对照组与病例组的检测结果

表2 IL－33和IL－35在各期梅毒的检测结果

表3 IL－33和IL－35在有/无症状梅毒的检测结果

3 讨论

IL－33是2005年发现的白介素1的家族新成员，其基因序列和结构同IL－1β、IL－18相似。人IL－33的基因定位于9号染色体(9p24.1)，IL－33以前体蛋白的形式分泌，经一系列加工剪切形成具有活性的成熟蛋白，IL－33发挥作用主要是通过特异性受体－ST2，ST2在1989年被发现，其基因定位于人2号染色体(2q12)，Th2细胞表面稳定表达。IL－33是Th2细胞的活化因子，参与炎症和免疫反应的发生。IL－33/ST2通路在炎症性疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病中有着重要作用。8－11随着人们对IL－33研究的深入，人们对IL－33/ST2通路在感染性疾病中发挥的作用也越来越感兴趣。梅毒的发病机制错综复杂，细胞免疫机制一直是研究的热点，细胞免疫异常是梅毒发病和病程迁延的主要原因之一。Th1/Th2反应的失衡、抑制性T细胞、树突状细胞、CD4＋和CD8＋T细胞、Th17和Th22细胞亚群、细胞因子是最近几年梅毒发病机制研究的主要领域。尤其是1992年Fitzger

ard学者提出了梅毒发病机制中Th1/Th2反应的失衡学说:随着梅毒病程的迁延，梅毒的发病以Th1型反应介导为主逐渐向Th2型反应介导为主的反应迁移转变，理论上梅毒螺旋体的清除应以Th1细胞免疫为主，而向Th2方向的漂移则抑制了机体的细胞免疫，造成梅毒病程的迁延。1

IL－33/ST2通路可诱导Th2型细胞因子的产生，参与Th2介导的反应。鉴于梅毒细胞免疫机制和IL－33、Th2型反应有着密切的关联，我们检测了梅毒患者和正常对照的血清IL－33的表达水平，探索IL－33是否与梅毒的细胞内免疫机制有关，尽管研究结果显示梅毒患者IL－33、IL－35的血清浓度低于对照组，但无统计学差异，各期梅毒之间、有症状组与无症状组之间也无统计学差异。

IL－35是新近发现的一种新型抑制性细胞因子，属于IL－12家族成员，是由 EB病毒诱导基因(EBI13)和IL－12的p35亚基组成的异二聚体，定位于人第17号染色体，IL－35由Treg细胞特异性产生，是Treg细胞发挥抑制作用所必须的细胞因子，能有效地抑制效应性T细胞的增值、Th17的分化以及IL－17的合成，有望成为调节Treg细胞活性的新型靶分子。IL－35在自身免疫性疾病、调节病原微生物引起的免疫应答、肿瘤抑制、诱导机体免疫耐受形成等方面发挥着重要作用。13－15梅毒患者Treg细胞明显增高，抑制细胞免疫功能，削弱了机体对梅毒螺旋体的清除和杀伤。16IL－35是Treg细胞发挥免疫抑制作用的关键因子。此外，IL－35还可以抑制Th17反应和IL－17的合成，而Th17以及IL－17在梅毒外周血中的高度表达，在梅毒发病过程中发挥着重要作用。7因此我们检测了梅毒与对照组的血清IL－35的表达，但是同样无统计学差异，各期梅毒之间、有症状组与无症状组之间也无统计学差异。

出现以上结果可能的原因如下:1.研究例数少，进一步扩大样本或者进一步分层研究，可能会出现不同的结果。由于病例所限，本研究未纳入晚期有症状梅毒，可能也对结果造成一定影响；2.IL－33和IL－35未参与梅毒的细胞免疫抑制。IL－33未参与Th1/Th2失衡过程，向Th2方向的漂移存在其他的机制。IL－35作为Treg细胞发挥抑制作用的关键性细胞因子未参与梅毒细胞免疫功能抑制过程，高度表达的Treg细胞造成的梅毒细胞免疫抑制并未通过IL－35产生作用，可能通过其他细胞因子或机制产生作用。

1 Fitzgerald TJ.The Thl/Th2－like switch in syphilitic infection:is itdetrimental.Infect Immun，1992，60(9):3475－3479.

2 Fan YM，Zou XH，Wu ZH，et al.Analysis of Th1/Th2 and Tc1/Tc2 balance from peripheral blood in patients with secondary early syphilis.Chin J Sex Transm Infect，2004，4(2):72－77.

3孙澍彬，欧健梅，庄慈妹，等.CD4＋CD25＋调节性T细胞与IL－17在梅毒血清固定患者外周血中的表达及意义.皮肤性病诊疗学杂志，2012，19(1):1674－8486.

4 Komai－Koma M，Xu D，Li Y，et al.IL－33 is a chemoattractant for human Th2 cells.Eur J Immunol，2007，37(10):2779－2786.

5 Niedbala W，Wei XQ，Cai B，et al.IL－35 is a novel cytokine with therapeutic effects againstcollagen－induced arthritis through the expansion of regulatory T cells and suppression of Th17 cells. Eur J Immunol，2007，37(11):3021－3029.

6 Weaver CT，Harrington LE，Mangan PR，et al.Th17:an effector CD4 T cell lineage with regulatory T cell ties.Immunity，2006，24(6):677－688.

7 Zhu A，Han H，Zhao H，et al.Increased frequencies of Th17 and Th22 cells in the peripheral blood of patients with secondary syphilis.FEMS Immunol Med Microbiol，2012，66(3):299－306.

8 Palmer G，Talabot－Ayer D，Lamacchia C，et al.Inhibition of interleukin－33 signaling attenuates the severity of experimental arthritis.Arthritis Rheum，2009，60(3):738－749.

9 Carrriere V，Roussel L，Ortega N，et al.IL－33，the IL－1－like cytokine ligand for ST2 receptor，is a chromatin－associated nuclear factor in vivo.Proc Natl ACad Sci USA，2007，104(1):282－287.

10 Schmitz J，Owyang A，Oldham E，et al.IL－33，an interleukin 1－like cytokine that signals via the IL－1 receptor－related protein ST2 and induces T helper type 2－associated cytokines.Immunity，2005，23(5):479－490.11 Milovanovic M，Volarevic V，Radosavljevic G，et al.IL－33/ ST2 axis in inflammation and immnnopathology.Immnnol Res，2012，52(1－2):89－99.

12 Chaturvedi V，Collison LW，Guy CS，et al.Cutting edge:Human regulatory T cell require IL－35 to mediate suppression and infectious tolerance.J Immunol，2011，186(12):6661－6666.

13 Yang J，Yang M，Htut TM，et al.Epstein－Barr virus－induced gene 3 negatively regulates IL－17，IL－22 and ROR gammat. Eur J Immunol，2008，38(5):1204－1214.

14 Ning－Wei Z.Interleukin(IL)－35 is rasing our expectations. Rev Med Chil，2010，138(6):758－766.

15 Taylor AL，Llewelyn MJ.Superantigen－induced proliferationof human CD4＋CD25－T cells is followed by a switch to a functional regulatory phenotype.J Immunol，2010，185(11):6591－6598.

(收稿:2014－12－29 修回:2015－01－25)

The relevance of serum levels of IL－33 and IL－35 with profeta’s immunity in the patients with syphilis

ZHANG Sheng-jia，TIAN Hong-qing，LI Zhong-wei，et al.School of Medical and Life Science，Ji’nan University，250062

Objective:To detect the levels of IL－33 and IL－35 in the patients with syphilis.Methods: The levels of IL－33 and IL－35 in the patients and healthy controls were detected with ELISA.Results:There was no significant difference in the levels of IL－33 and IL－35 between the patients and controls(P＝0.63 and P＝0.122).There were no significant difference in the levels of IL－33 and IL－35 among primary syphilis，secondary syphilis and latent syphilis.Conclusion:IL－33 and IL－35 may not correlate with the cellular immunity in the patients with syphylis.

syphilis；cellular immunity interleukin；IL－33；IL－35

山东省自然科学基金(编号:ZR2013HM076)

1济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院2山东省皮肤病性病防治研究所，济南，250022

∗通信作者