湖北广水萝卜病毒病的分子鉴定与防治

袁伟玲 ，袁尚勇 ，甘彩霞 ，崔磊 ，邓晓辉

（1.湖北省农科院经济作物研究所，武汉，430064；2.湖北省蔬菜办）

病毒病是萝卜（Raphanus sativusL.）生产上的主要病害之一。萝卜病毒病日趋严重，特别是夏秋季节为害更大，主要症状是轻重不等的花叶、黄点花叶、扭曲皱缩、矮化和坏死，最严重的全株死亡。据Ahlawat等[1]报道，萝卜病毒病使肉质根减产30.3%～100%，种子减产37.2%～95.8%。2014年10月湖北广水市长岭镇近133 hm2萝卜发生花叶病毒病，调查发现该主产区白玉春、美侬、天鸿春、汉白玉、雪单1号等8个主栽品种均发病，病情指数21～65（表1）。但在播种期和栽培条件基本相同的情况下，不同品种间的发病率有明显差异，四月白、汉白玉、春不老发病率高，病情指数高；雪单1号、天鸿春发病较轻。

萝卜病毒病的传毒介体主要是蚜虫。2014年10月以来，由于湖北广水地区的长期高温干旱，蚜虫繁殖快，产生大量有翅蚜，有翅蚜在田间往返迁飞，进行试探性取食，将病毒在萝卜植株间相互传播，引发该地区萝卜病毒病的大面积发生。

1 病毒种类分子鉴定

1.1 试验材料

田间随机选择生长基本正常、无虫害、具典型花叶症状的萝卜植株30份，每份50～300 g。采集的萝卜植株病害症状为黄绿相间不规则的嵌纹和条斑，长短大小不同，布满整个叶片，发病程度为严重、一般、轻微和隐症。同时对病样采集地点无症状表现的植株也进行叶片样品采集。

1.2 试验方法

去除样品表面的尘土和生物污染，放入保鲜袋运回实验室，-80℃冰箱保存。根据相关文献和基因库中病毒的基因组序列，以 CP、MP、Nib、ORFI、ORFII核苷酸序列作为靶标，设计了鉴定病毒的多对特异引物，包括8种RNA病毒、3种DNA病毒以马铃薯Y病毒科（Potyviridae）的通用引物[2～4]。DNA、RNA提取参照王洪星等[5]的方法。根据引物说明，设置不同退火温度和PCR反应程序，对疑似萝卜病毒病样品进行PCR/RT-PCR检测。

表1 2014年湖北广水各萝卜品种病毒病发生情况

2 结果与分析

以提取的DNA为模板，分别采取3对DNA病毒引物进行PCR扩增，结果显示，均没有扩增条带；以设计的RNA病毒引物进行RT-PCR扩增，结果表明，所检测的萝卜样品中，黄瓜花叶病毒（CMV）所扩出的CP基因长度为764 bp，芜菁花叶病毒（TuMV）所扩出的CP基因长度为333 bp，蚕豆萎蔫病毒（BBWV）所扩出的多聚蛋白基因长度为1 656 bp（图1）。试验结果表明，蚕豆萎蔫病毒是为害萝卜的主要病毒；约有1/4的样本是由2种或2种以上的病毒复合侵染，复合侵染病株中的病毒主要是蚕豆萎蔫病毒、芜菁花叶病毒和黄瓜花叶病毒。

图1 PCR检测电泳图

3 防治建议

①选择抗（耐）病毒病萝卜品种，如武青1号、鲁萝卜2号、春萝l号、京红1号、红丰2号、衡阳半节红、豫萝卜1号等。

②适期晚播，避开高温干旱敏感期。③避免与十字花科蔬菜连作、邻作。

④加强苗期管理，如精细整地、播种，氮、磷、钾肥配合施用，及时浇水，浇、锄结合等，促进幼苗健壮，减轻病害。苗期做好蚜虫、黄曲条跳甲、蓟马、白粉虱防治工作，干旱年份缩短蹲苗期，及时中耕除草，拔除病弱苗。

⑤药剂防治可使用20%吗啉胍·乙铜500倍液、0.5%抗毒剂1号水剂300倍液、1.5%植病灵乳油1 000倍液等药剂喷雾，每隔5～7 d喷1次，连续2～3次。采收前5 d停止用药。

[1]Ahlawat Y S,Chenulu V V.Losses to radish mosaic caused by strain of turnip mosaic virus and its control[J].Indian Phytopathology,1982,35（2）:255-260.

[2]Chen J,Chen J,Adams M J.A universal PCR primer to detect members of the Potyviridae and its use to examine the taxonomic status of several members of the family[J].Archives of Virology,2001,146（4）:757-766.

[3]McQualter P B,Bums P,Smith G R,et al.Molecular analysis of Fiji disease virus genome segments 5,6,8 and 10[J].Archives of Virology,2004（149）:713-721.

[4]Shamloul A M,Abdallah N A,Madkour M A,et al.Sensitive detection of the Egyptian species of sugarcane streak virus by PCR-probe capture hybridization（PCR-ELISA）and its complete nucleotide sequence[J].Journal of Virological Methods,2001（92）:45-54.

[5]王洪星，张雨良，罗志文，等.应用多重RT-PCR检测甘蔗黄叶病毒和高粱花叶病毒[J].广东农业科学，2011，38（10）：128-131.