新风胶囊对类风湿关节炎患者抗环瓜氨酸肽抗体表达的干预研究

葛 瑶，刘 健，张皖东，汪 元，黄传兵，曹云祥，孙 玥

(1.安徽中医药大学第一附属医院风湿病科，安徽 合肥 230031;2.安徽中医药大学，安徽合肥 230012)

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种常见的自身免疫性疾病，若不及时治疗，用药不规范，可导致不可逆的关节软骨破坏，造成永久性的关节畸形，致残率相当高。因此，早期诊断、早期治疗对控制病情非常重要。抗环瓜氨酸肽抗体(anticyclic cirullinated peptide antibodies，抗 CCP 抗体)对RA具有高特异性、高敏感性，在疾病早期即出现，与疾病活动度、关节结构损伤密切相关，是骨侵蚀破坏的独立风险预测因子，临床现已作为RA早期检测的首选［1］。通过药物调节，可以有效降低抗CCP抗体滴度，从而减缓RA的关节损伤，降低致残率。中药新风胶囊(XFC)是基于新安医学理论为指导的中医健脾单元疗法组方而成，应用于RA的临床治疗多年，已取得了良好疗效，不仅改善关节症状，还能提高患者生活质量，且未发现明显毒副作用［2］。本文主要通过观察类风湿关节炎患者抗CCP抗体表达的变化探讨抗CCP抗体在RA发病中的作用，并探讨XFC治疗类风湿关节炎的作用机制。

1 资料和方法

1.1 临床资料

1.1.1 诊断标准 参照2010年中华医学会风湿病学分会《风湿病学诊断和治疗指南》和2010年美国风湿病学会(ACR)和欧洲抗风湿病联盟(EULAR)修订的RA分类标准和评分系统［3］。

1.1.2 纳入标准 (1)符合上述诊断标准;(2)自愿参加临床试验，同意本药物治疗并签署知情同意书，愿意按医嘱服用药物，依从性好。

1.1.3 排除标准 (1)不符合上述诊断标准的患者。(2)合并有心血管、肝脏、肾脏、造血系统等严重疾病以及严重关节外表现，如高热不退、多发类风湿结节、肾脏淀粉样病变、缩窄性心包炎、中枢神经系统血管炎等需要使用糖皮质激素的患者。(3)长期服用有关治疗RA的药物，且在本研究前至少1周内未停用糖皮质激素、柳氮磺胺吡啶、环磷酰胺、青霉胺和金制剂等免疫抑制药或抗癌药如MTX等的患者。(4)年龄在18岁以下，70岁以上的患者。(5)孕妇或哺乳期女性的患者。(6)精神病患者。(7)晚期患者，关节严重畸形，完全丧失关节功能者。(8)研究者认为不宜进行此项临床试验者。

1.1.4 病例分组 所选100例患者均来自2013年1月—2013年12月安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科RA住院病人;其中男11例，女89例，年龄18～69岁，平均(51±14)岁，病程最短者为5个月，最长为36年，平均病程为(7.5 ±6.5)年。随机分组为XFC组(研究组)50例和来氟米特(LEF，对照组)50例，临床资料(年龄、性别、病程、病情)分布无明显差异。

1.2 治疗方案 研究组:选用新安医药学特色疗法——益气健脾化湿通络中药XFC(安徽中医药大学第一附属医院制剂中心生产，批准文号:Z20050062，批号:20120625)，每次3 粒，每日3 次，4周为1疗程。XFC组方:黄芪、薏苡仁、蜈蚣、雷公藤等，每粒胶囊含生药浸出物0.4 g。

对照组:选用LEF(福建汇天生物药业有限公司，批准文号:H20050175，批号:120503，每次1粒(每片10 mg)，每日1次，服用天数及疗程同治疗组。两组患者在治疗期间可根据病情需要服用非甾体消炎止痛药，不加服其他免疫抑制剂及其他治疗本病的其他中成药。

1.3 伦理学要求 本试验方案经研究负责单位安徽中医药大学第一附属医院伦理委员会批准后实施，每位受试者入选前均签署知情同意书。

1.4 疗效评定标准 参照中医临床疗效评定标准［4］:(1)治愈:症状全部消失，关节功能恢复正常，理化检查主要指标正常;(2)显效:全部症状或主要症状消除，关节功能基本恢复，能参加正常功能或劳动，理化检查指标基本正常;(3)有效:主要症状基本消除，主要关节功能基本恢复或明显进步，生活不能自理转为能够自理，或者失去工作和劳动能力转为工作和劳动能力有所恢复，主要理化检查指标有所改善;(4)无效:症状、关节功能、理化检查与治疗前均无明显改善。

1.5 试剂和仪器

1.5.1 主要试剂 抗CCP抗体、葡糖糖6-磷酸异构酶(GPI)、括抗角蛋白抗体(AKA)选用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒(美国R∝D公司)。

1.5.2 主要仪器 HERMLE－Z383K型离心机(德国HERMLE公司)。Sysmex XT－2000i型全自动血液分析仪进行测定(日本希斯美康公司);日立7060型全自动生化分析仪进行测定。

1.6 观察指标 需收集治疗组及对照组的以下资料:临床指标:包括年龄、性别、病程、关节疼痛积分、关节肿胀积分、关节压痛积分、晨僵时间等。

实验室指标:包括抗CCP抗体、GPI、AKA的表达和红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、免疫球蛋白(Ig)G、IgA 、IgM、补体3(C3)、补体(C4)、RF、α1 酸性糖蛋白(α1-AGP)、超敏 C反应蛋白(hs-CRP)、血沉(ESR)等。

1.7 不良反应观察 试验期间如实填写不良反应记录表，记录不良事件的发生时间、严重程度、持续时间、采取的有效措施和转归，处理后无法消失者应退出本实验，并按就诊顺序依次替补。

1.8 统计学处理 采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学处理，为连续性变量的实验数据用均数±标准差(±s)表示，样本均采用 Kolmogorov-Smirnov正态性检验;计量资料采用t检验;计数资料采用χ2检验;采用Spearman软件进行相关性分析。当P＜0.05或P＜0.01时，具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者临床疗效比较 两组患者在总有效率方面无明显差异，但研究组显效率方面显著高于对照组(P＜0.05)。见表1。

表1 两组临床疗效的比较/例(%)

2.2 两组RA患者治疗前后外周血抗CCP抗体、GPI、AKA的表达变化 所选RA患者中有86%的患者外周血抗CCP抗体升高。治疗前，两组RA患者抗CCP抗体、GPI无明显差异(P＞0.05)。治疗后，研究组与对照组抗CCP抗体、GPI明显降低 (P＜0.05或 P＜0.01)。与对照组治疗后比较，研究组治疗后GPI降低明显(P＜0.05)。从AKA阳性数比较可知，与治疗前比较，研究组AKA阳性数明显减低(治疗前n=32，治疗后n=25)，对照组AKA阳性数也明显降低(治疗前n=34，治疗后n=23)(P＜0.05);治疗后，研究组和对照AKA阳性数组间比较无显著差异。见表2。

表2 两组RA患者治疗前后抗CCP抗体、GPI变化情况(±s)

表2 两组RA患者治疗前后抗CCP抗体、GPI变化情况(±s)

注:与本组治疗前相比，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01;与对照组治疗后相比，△P ＜0.05。

指标 研究组(n=50)治疗前 治疗后对照组(n=50)治疗前 治疗后抗 CCP 抗体/IU·mL－1 268.36 ±37.07 193.36 ±3.42＊＊ 270.23 ±42.62 242.74 ±2.63＊＊GPI/mg·L－1 6.64 ±1.36 4.21 ±1.39＊＊△ 6.73 ±1.54 5.02 ±1.53*

2.3 两组RA病例治疗前后相关实验室指标变化情况 治疗前，两组RA患者实验室指标无明显差异(P＞0.05)。治疗后，研究组RBC、HGB均明显升高(P ＜0.05 或 P ＜0.01)，PLT、RF、α1-AGP、ESR 均明显降低(P＜0.05或P＜0.01);对照组HGB明显升高(P ＜0.05 或 P ＜0.01)，IgG、RF、ESR 明显降低(P＜0.05或P ＜0.01)。其中，HGB 研究组较对照组升高明显(P ＜0.05或 P ＜0.01)。见表3。

表3 两组RA治疗前后实验室指标变化情况(±s)

表3 两组RA治疗前后实验室指标变化情况(±s)

注:与本组治疗前相比，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;与对照组治疗后相比，△△P ＜0.01。

指标 研究组(n=50)治疗前 治疗后对照组(n=50)治疗前 治疗后WBC/×109·L－1 8.74 ±2.53 7.84 ±3.42*7.98 ±2.54 8.06 ±2.63 RBC/×1012·L－1 3.07 ±1.01 4.94 ±1.29* 3.37 ±1.61 3.75 ±0.34 HGB/g·L－1 98.75 ±14.73 127.43 ±6.46＊＊△△ 99.46 ±23.6 117.53 ±12.63*PLT/×109·L－1 236.84 ±66.64 196.62 ±43.8* 228.44 ±63.7 217.89 ±52.33 IgG/g·L －1 16.62 ±4.53 18.43 ±4.12 17.69 ±4.57 11.81 ±3.48＊＊IgA/g·L －1 2.53 ±1.02 2.61 ±1.07 2.95 ±1.73 2.64 ±1.73 IgM/g·L －1 1.31 ±0.64 1.18 ±0.37 1.53 ±0.65 1.48 ±0.73 C3/mg·dL －1 127.46 ±35.48 129.29 ±28.43 126.16 ±31.92 127.95 ±26.75 C4/mg·dL －1 34.37 ±5.63 36.75 ±7.63 34.58 ±9.55 33.43 ±6.21 RF/IU·mL－1 62.0 ±48.75 48.23 ±11.45* 74.74 ±46.23 41.8 ±31.64*α1-AGP/mg·dL－1 129.4 ±26.38 91.9 ±17.53* 118.59 ±36.42 98.77 ±39.73*CRP/mg·L－1 14.47 ±2.67 7.91 ±2.56＊＊ 8.96 ±3.74 6.98 ±3.64 ESR/mm·h－1 62.53 ±12.49 30.73 ±8.59＊＊ 59.8 ±49.53 36.7 ±20.75*

3 讨论

RA是以对称性多关节炎为主要临床表现的慢性自身免疫性疾病，主要侵犯关节的滑膜，造成关节骨破坏，导致关节畸形、功能受限。寻找早期诊断RA的血清标志物一直是风湿病学界的研究热点之一。抗CCP抗体因其对RA具有较高的敏感性和特异性，早期、易检测，并且能够预测骨损伤，判定疾病预后等特点，已成为诊断RA新的血清学标志物，引起了学术界的广泛关注［5］。迄今为止，RA确切的发病机制仍未明确，但在发病过程中，抗CCP抗体起到了重要的作用。

抗CCP抗体可以帮助判断新近起病且不符合ACR分类标准的多关节炎病人是否有发展为RA的趋势，并可以帮助判断该关节炎的转归(自我限制性关节炎，持续性炎性关节炎，持续破坏性关节炎)。并且，抗CCP抗体还可预测RA患者放射学进展。抗CCP抗体还有助于RA与其他炎性关节病及伴随有关节症状的自身免疫性疾病及各种感染的鉴别诊断［6］。

高滴度抗CCP抗体可以作为利妥昔单抗治疗的重要指征［7］。生物制剂及慢作用抗风湿药都对抗CCP抗体均有明显改善，通过药物调节，可以通过有效降低抗CCP抗体滴度，从而减缓RA的关节损伤，降低致残率［8－12］。

本次研究结果同样显示86%的RA患者外周血抗CCP抗体升高;经过治疗，研究组、对照组抗CCP抗体、GPI滴度以及AKA阳性例数均明显降低(P＜0.05或P＜0.01)。外周血抗 CCP抗体水平与其他实验室指标具有相关性。与LEF对照组治疗后比较，XFC研究组治疗后GPI降低显著(P＜0.05)。对抗CCP抗体滴度和AKA阳性例数的改善方面，两组无显著差异。

同时，与LEF对照组相比，XFC研究组在改善RA患者实验室指标上无明显差异(P ＞0.05)。其中，研究组在提高HGB方面明显优于对照组 (P＜0.05或P＜0.01)，可以有效改善RA患者的贫血状况。

RA属中医“痹证”范畴，我们在既往文献研究、临床研究及实验研究基础上，提出“脾虚致痹”的病因病机理论及“从脾治痹”的治疗原则，并逐渐形成了以新安医学理论为指导的中医健脾单元疗法，从而制成了中药XFC。XFC主要成分包括黄芪、薏苡仁、雷公藤、蜈蚣。方中薏苡仁健脾化湿，舒筋除痹，可以缓解关节肌肉的挛缩疼痛;雷公藤具有免疫抑制作用，可抑制RA患者体内异常免疫反应;蜈蚣通络止痛、祛风止痉、攻毒散结，可以通过改善微循环，促进病变部位的新陈代谢而起到良好的镇痛作用;黄芪能增强免疫功能，调节糖代谢，加速受损组织修复。黄芪、薏苡仁与雷公藤相配即可调节免疫，又可防止雷公藤免疫抑制作用大而造成机体免疫功能过于低下。

综上，XFC能够有效改善RA患者的临床症状，在改善患者贫血、降低急性炎症期指标方面疗效优于LEF。其机制可能与XFC抑制免疫细胞活化，提高抗氧化能力等相关，XFC同时还能影响疾病活动指标，降低机体内异常免疫炎症反应和氧化应激损伤，从而有效降低抗CCP抗体水平，对延缓或抑制关节软骨病变，减轻RA患者关节僵痛症状，提高RA患者的生活质量有显著作用。

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