心痛方对急性心肌梗死大鼠血浆ICAM －1、VCAM －1的影响※

●熊 杜 范金茹 陈 彤 廖建萍 周斐然 王美香 肖正文 周 波 陈学娟

ACS是一组冠状动脉粥样硬化、斑块破裂或糜烂、血栓形成或血管痉挛导致的急性或亚急性心肌缺血的临床综合征［1］。ICAM －1、VCAM －1起着转运白细胞粘附转运的功能，在ACS的开始阶段中起重要作用［2］。本研究以疏肝豁痰化瘀之心痛方对急性心肌梗死大鼠进行干预，观察其对给药前后大鼠血浆ICAM－1、VCAM－1水平以及心肌梗死面积的影响，以探讨炎症反应在ACS发病中的意义以及心痛方的疗效机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级SD雄性大鼠40只，体量180～250g，鼠龄8～10W，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司［许可证号SCXK(湘)2013－0003］。

1.2 主要仪器及试剂 酶标仪:芬兰(Labsystems Multiskan MS)，离心机:微量高速离心机(德国heraeus公司)，呼吸机:DH－140动物人工呼吸机(浙江医科大学仪器实验厂)，深低温冰箱:中科美菱，培养箱:隔水式恒温培养箱(德国 heraeus公司)，ICAM－1、VCAM－1抗体:由上海基尔顿生物科技有限公司提供，批号:201402。

1.3 药物 心痛方(组成:柴胡10g、栝蒌10g、川芎10g、桃仁 10g、蒲黄 10g、白芥子 10g、郁金 10g、九香虫5g、甘草5g;由湖南中医药大学第一附属医院中药房提供)中药超微颗粒按成人剂量换算成大鼠用量;单硝酸异山梨酯片(鲁南贝特制药有限公司生产，批号:08131012);水合氯醛(上海国药集团，批号:20130516)。

1.4 分组 将40只大鼠按体重分层，再随机分为假手术组、模型组、心痛方组、欣康组。

1.5 造模 采用冠脉结扎法［3］:大鼠称重后，采用腹腔注射水合氯醛麻醉;麻醉满意后备皮，术区碘酒消毒，行气管插管(深度0.5～1cm)，连接呼吸机，调节呼吸频率75次/min，呼吸时比1∶1，稳定后，在左侧胸部从右下至左上做一斜行切口开胸，在肺动脉圆锥与左心耳交界处下方2mm迅速以6－0线缝扎左前降支近端(进针深度0.5mm，缝扎宽度为2mm左右)，以左心室前壁颜色变白和运动减弱且心电图显示Ⅱ导联ST段弓背向上抬高≥0.1mv或出现病理性Q波为结扎成功的标志，假手术组开胸但不结扎冠脉。

1.6 给药 手术后均采用灌胃法给药，心痛方组采用中药超微颗粒冲调成汤剂按1.08g/kg剂量给药;欣康组按0.87mg/kg分别用配好的药液灌胃;模型组和假手术组分别给予灌服等量生理盐水。连续7d，每天1次，于第7天灌胃30分钟后处死大鼠。

1.7 指标检测 分别于术前、术后30分钟、用药1周以颈动脉取血法采血，留血样至－70℃低温冰箱保存待测，各抗体检测参照Elisa试剂盒说明书进行。

1.8 大鼠梗死面积测定 将摘取的心脏洗净，放入冰箱中冰冻15分钟后切成0.1～0.2cm厚的心肌片，放入NBT染色液，37℃温孵15min，数码相机拍摄心肌切片图像，计算心梗部分占心肌横断面面积的百分比。

1.9 统计学方法 统计分析采用SPSS17.0统计软件进行处理，各组实验数据以均数±标准差()表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 造模 40只大鼠，实验中共有4只大鼠死亡，分别为假手术组1只，模型组2只，心痛方组1只。

2.2 心痛方对急性心肌梗死大鼠血浆ICAM－1表达的影响 术前各组比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后模型组、心痛方组、欣康组ICAM－1表达明显高于假手术组(P＜0.01)，表明黏附分子ICAM－1参与到ACS的炎症反应过程;心痛方组和欣康组给药后与模型组相比均能显著降低ICAM－1(P＜0.01)，心痛方较欣康组更加明显(P＜0.01)。见表1。

表1 心痛方对急性心肌梗死大鼠血浆中ICAM－1表达的影响(x± s，ng/l)

2.2 心痛方对急性心肌梗死大鼠血浆VCAM－1表达的影响 术前各组比较差异无统计学意义(P＞0.05);术后模型组、心痛方组、欣康组ICAM－1表达明显高于假手术组(P＜0.01)，表明黏附分子VCAM－1参与到ACS的炎症反应过程;心痛方组和欣康组与模型组给药后相比均能显著降低VCAM－1(P＜0.01)，二者VCAM－1的疗效差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2 心痛方对急性心肌梗死大鼠血浆中VCAM－1表达的影响(x± s，ng/l)

2.3 大鼠心肌梗死面积 心痛方组及欣康组心梗面积均见缩小(P＜0.01)，心痛方组在缩小心肌梗死面积上较欣康组更加明显(P＜0.01)。说明心痛方与欣康均对心肌缺血有治疗作用，且心痛方较欣康更有优势。见表3。

表3 各组间心梗面积的比较()

表3 各组间心梗面积的比较()

注:与模型组比较，#P＜0.01;与欣康组比较，*P＜0.01。

34.60±0.72心痛方组 9 1.08 22.51±0.90#*欣康组 10 8.7×10－4 26.86±0.78心梗面积模型组组别 n 药物剂量g/kg 8－#

2.4 急性心肌梗死大鼠血浆中ICAM－1、VCAM－1表达与心肌梗死面积行多重线性回归并建立二重线性回归方程 心肌梗死大鼠血浆中ICAM、VCAM－1与心肌梗死面积回归分析有统计学意义(P＜0.01)，表明血浆ICAM－1、VCAM－1浓度与心肌梗死面积有直接关系。ICAM－1、VCAM－1标准回归系数为0.614、0.419，表明ICAM－1对心肌梗死面积的重要性相对 VCAM－1更高。共线性诊断:ICAM－1、VCAM－1的容忍度均为0.918;方差膨胀因子都为1.064可认为不存在共线性问题。建立二重线性回归方程:心肌梗死面积=0.679×(ICAM－1)+0.062×(VCAM－1)－13.901。见表4。

表4 急性心肌梗死大鼠血浆中ICAM－1、VCAM－1表达与心肌梗死面积多重线性回归

3 讨论

ICAM－1、VCAM－1主要表达于细胞表面。正常情况下，ICAM－1及VCAM－1在血管内皮细胞和其它非造血细胞表达水平很低。血浆中ICAM－1与VCAM－1的浓度升高被认为是内皮细胞活化和炎症的标志［4］。在ACS的反应过程中，内皮细胞、白细胞等细胞ICAM－1和VCAM－1表达明显增加，然后使单核细胞向内膜移行致内皮损伤，并促使单核细胞进入内皮下成为巨噬细胞，进而转变为泡沫细胞［5］，在这一过程中粘附分子可能还介导了内皮细胞与白细胞、血小板间的起始黏附［6－7］，从多方面引起血管功能障碍。研究表明［8］:黏附分子在AS患者脂纹和斑块中大量表达，与ACS的发生发展有密切关系。黏附分子介导白细胞黏附增加，可促进斑块的不稳定性，削弱斑块处的纤维帽，加速其破裂，血栓形成，导致不稳定型心绞痛和心肌梗死的发生。当内皮细胞粘附分子的表达受到抑制时，能阻止巨噬细胞向粥样硬化斑块处的聚集，并减少炎症细胞释放各类炎症因子，达到抑制炎症反应及延缓 ACS 进展的目的［9］。

张仲景以“阳微阴弦”对胸痹心痛病因病机进行了高度概括，阳微正虚是发病的根本，阴邪(痰饮、淤血等阴寒之邪)干犯是发病的重要条件。心痛方由柴胡、川芎、桃仁、蒲黄、栝蒌、白芥子、郁金、九香虫、甘草等组成。柴胡为君，主入肝经，长于疏肝解郁;栝蒌、白芥子、川芎、桃仁为臣，豁痰化瘀、通络止痛;蒲黄、郁金为佐，辅助君药及臣药疏肝豁痰祛瘀;《本草纲目》言九香虫“治脾肾亏损，壮元阳”故其能扶“阳微”;甘草调和诸药。本方是取“急则治其标”之意，重以疏肝解郁、豁痰化瘀，选药重在标实，而又兼顾正虚。

本研究结果推测心痛方可能是通过抑制ICAM－1、VCAM－1的表达从而抑制白细胞向内皮的粘附、血小板活化及聚集，起到保护血管、心脏的作用。从这一方面印证中医疏肝解郁、豁痰化瘀法治疗胸痹心痛确有疗效，为中医治疗ACS提供新的方向。

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