常用杀菌剂对莲藕黑斑病病原菌室内毒力及田间防治效果研究

吕刚 ，魏林 ，梁志怀 ，张屹

（1.中南大学研究生院隆平分院，湖南长沙，410125；2.湖南省植物保护研究所；3.湖南省西瓜甜瓜研究所）

莲藕是我国的一种特色水生蔬菜，在我国已有3 000多a的栽培历史。目前在我国很多地区，莲藕栽培已成为农民增收、农业增效的重要方式。近年在整个莲藕生长过程中，各类叶斑病病害发生日益严重，一定程度上制约了莲藕产业的发展。其中发生最为普遍的就是由半知菌亚门链格孢属（Alternaria）真菌引起的莲藕黑斑病或称莲藕褐纹病[1]。该病典型症状是在莲叶上产生黑褐色病斑，发病后期病斑可连成一片，造成整片叶枯死，给莲藕的产量和品质带来重大影响。

目前，在防治莲藕叶斑病上，登记的药剂仅有丙环唑及多菌灵2种，单一使用某种或某几种药剂，容易使病原菌产生抗药性，更加不利于田间防治。本文通过对分离、纯化获得的目标病原菌进行了室内毒力测定，筛选出毒力较强的药剂，并将获得的药剂在莲藕栽种田进行大田防治试验，以期获得对莲藕链格孢叶斑病具有较好防效的化学药剂。

1 材料与方法

1.1 病叶的采集及目标病原菌的获得

链格孢叶斑病典型病叶采集于湖南长沙县黄兴镇子莲种植区，品种为寸三莲。病原菌的分离采用组织分离法，待分离组织块在PDA培养基上长出菌丝后，挑取菌丝进行纯化培养，然后再对纯化培养菌株进行单孢分离纯化，获得纯培养物[2]。

1.2 病原菌形态观察

将病原菌接种于PDA培养基上，置于25℃培养箱培养。7 d后观察菌落形状、颜色及菌丝疏密程度，并在显微镜下观察其分生孢子形态并拍照保存，同时测量分生孢子的大小。根据分生孢子形态和大小，参照魏景超[4]的方法，初步确定病原属种（关于具体种的确定另文发表）。

1.3 分离物致病性测定及再分离

根据柯赫氏法则，采用活体接种法，先将待接种的健康幼嫩、无斑点和褪绿症状的盆栽莲藕叶片接种部位进行表面消毒，然后将分离纯化的病原菌菌丝块以针刺法接种于该部位，并用蘸水的无菌脱脂棉保湿。每个处理设置3次重复，并以无菌PDA培养基接种作为对照，待接种部位出现叶斑症状后，从症状病健交界处再次进行病原菌分离[3]。

1.4 供试化学药剂对链格孢菌的室内毒力测定

供试的化学药剂及使用浓度见表1。

通过菌丝生长速率测定[5]，比较供试化学杀菌剂药剂对叶斑病病原菌的室内毒力。用无菌水将各药剂配制成10 mg/mL的母液，再根据前期预备试验结果，取定量的母液加入温度40～50℃的无菌PDA三角瓶中，充分混匀后倒入培养皿中，制成含不同供试浓度杀菌剂的平板备用。在平板中央接种一块病原菌的菌饼，置于25℃条件下恒温培养箱中培养，以不含药剂的PDA平板为对照，各供试浓度设4个重复。待对照菌丝长满培养基后，用游标卡尺十字交叉法测定各培养皿内菌落的直径。

抑菌率（I，%）=[（D0-Dt）/D0]×100%，其中：I为菌丝生长抑制率，D0为对照菌落增长直径，Dt为处理菌落增长直径。其中D=D1-D2（D表示菌落增长直径，D1表示菌落直径，D2表示菌饼直径）。

以药剂浓度的对数为自变量X，以抑制率的机率值为因变量Y，运用Excel软件进行统计分析，求出供试药剂对病菌的毒力回归方程Y=aX+b及相关系数（r）值，并由方程计算各供试药剂的抑制中浓度（EC50）。

表1 供试化学药剂及室内毒力测定使用浓度

1.5 大田试验

①施药方法 根据室内毒力测定结果，参照田间实际用药情况，选取田间防治黑斑病的药剂及使用浓度分别为50%多菌灵可湿性粉剂500倍液、40%氟硅唑乳油8 000倍液、25%丙环唑乳油3 000倍液和99%噁霉灵原药4 000倍液。大田防治试验在湖南怀化洪江藕莲种植基地进行，该地藕田土壤肥力中等，各试验药剂小区面积约300 m2。施药时为藕莲生长的立叶期，此时田中黑斑病已普遍发生。施药液量为40 kg/667 m2，以等量清水作为对照。共施药3次，每次间隔7 d。第1次施药前和最后1次施药后7 d调查病情指数，根据病情指数计算各药剂的防治效果。

②调查方法与防效计算 采用对角线五点取样调查法，每点选取20～30片叶调查病情。病害分级标准为：0级：无病斑；1级：病斑面积占整片叶面积的10%及以下；3级：病斑面积占整片叶面积的11%～25%；5级：病斑面积占整片叶面积的26%～50%；7级：病斑面积占整片叶面积的51%～75%；9级：病斑面积占整片叶面积的75%及以上。按下面公式计算病情指数和防治效果[6]，病情指数=∑（各级病叶数×相对级值）/（调查总叶数×9）×100；防治效果（%）=[1-（CK0×Pt1）/（CK1×Pt0）]×100%； 其中 CK0为药前对照组病情指数，CK1药后对照组病情指数，Pt0为药前处理组病情指数，Pt1药后处理组病情指数。

2 结果与分析

2.1 链格孢属病原菌的获得

初始菌株和再分离菌株在PDA上培养7 d后，菌落正面呈颜色均一的黑色，表面呈细茸状，菌落背面略呈褐色，表面光滑（图1、2）。显微观察表明，分生孢子褐色，呈倒棍棒状，顶端延长，多细胞，有壁砖状分隔（图3、4）。

2.2 病原菌毒力测定

从表2中的EC50值可知，各药剂对该病原菌的菌丝生长均有一定的抑制作用，其中40%氟硅唑乳油的抑菌效果最好，其EC50值为0.42 μg/mL，而25%醚菌酯悬浮剂的抑菌效果最低，其EC50值高达500.00 μg/mL。

2.3 大田试验

选用室内对莲藕黑斑病菌菌丝生长抑制力较强的3个化学农药（多菌灵、氟硅唑和噁霉灵）以及在莲藕上已经登记的药剂丙环唑，对黑斑病进行田间防治试验，应用防效见表3。

图1 链格孢属病原菌的获得与孢子形态

试验结果表明，在田间黑斑病普遍发生的情况下，40%氟硅唑乳油和50%多菌灵可湿性粉剂对该病具有较好的防治效果，防效都达70%以上，25%丙环唑乳油的防效为62.67%，低于前两者；而以前在莲藕浮叶期撒施对黑斑病预防效果较好的99%噁霉灵原药对该病的治疗效果仅有46.19%。

表2 供试药剂对黑斑病菌室内毒力生测结果

表3 各药剂大田试验防治效果

3 讨论与结论

交链孢属真菌是一类常见的病原菌，可侵染叶片，引起植物各类叶斑病，如玉米交链孢叶枯病、棉花黑斑病、辣椒黑斑病等[7～9]。本试验利用从藕田分离得到的交链孢病原菌菌株，进行了室内毒力测定和大田试验，筛选得到了对该菌株有较强毒力和良好田间防治效果的化学药剂40%氟硅唑乳油和50%多菌灵可湿性粉剂。氟硅唑是一种三唑类的内吸杀菌剂，具有保护和治疗作用，渗透性强，是当前防治真菌性叶斑病的主要药剂；而多菌灵作为一种广谱高效低毒的内吸性杀菌剂，既是市场上广泛使用的药剂也是莲藕上登记的药剂，2个药剂均容易获得。二者与在莲藕上另一登记药剂——25%丙环唑乳油交替使用，防治莲藕黑斑病，可以避免该病原菌产生抗药性。前期试验表明，99%噁霉灵原药在对藕种浸种处理、浮叶期撒施土壤处理时对黑斑病均具有较好的预防效果，但在黑斑病发生较严重中，用该药剂喷雾处理对黑斑病的治疗效果却并不理想。该试验结果为藕农田间施药防治黑斑病提供更多了选择和指导。

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