贵南县牛羊口蹄疫免疫抗体监测与分析

旦正措 （青海省贵南县畜牧兽医工作站 813199）

贵南县牛羊口蹄疫免疫抗体监测与分析

旦正措 （青海省贵南县畜牧兽医工作站 813199）

为了全面掌握贵南县牛羊注射口蹄疫疫苗后所产生的免疫抗体效价情况，于2014年3、6、、9、12月份，对贵南县塔秀乡和过马营镇的散养户、县城屠宰场屠宰的90头牛和90只羊用正向间接血凝实验进行了监测，免疫抗体效价第一、二、三、四季度分别为牛78.7%、85.6%、85.7%、86.05%；羊48.75%、84.15%、71%、79.65%。说明该县牛、羊口蹄疫免疫接种工作扎实有效。

牛羊；口蹄疫；抗体；检测分析；散养户；屠宰场；贵南县

1 基本情况

贵南县位于青海省东南部，地处西倾山与黄河之间。地理坐标为东经 100°33′～101°33′， 北纬 35°09′～36°08′， 总面积6649.7平方公里，草场总面积为756.6万亩，耕地面积为43.79万亩，林地面积为25.26万亩。隶属海南藏族自治州，约占海南藏族自治州面积的14.45%。属于共和盆地，境内南部高山连绵，挺拔高耸，为西倾山褶曲高原的一部分，直亥主峰为第一高峰，海拔5011m，中部为高原滩地，地势开阔。黄河沿岸为河谷地带，地势平坦。拉西瓦黄河沿岸海拔2222m为境内海拔最低点。大部分地区海拔在3000～3500m之间。全县共有草食畜89.26万头只，其中牛11.85万头，羊77.04万只。口蹄疫 （FMD）是猪、牛、羊等主要家畜和70多种野生偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病。该病传播途径多、速度快，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大政治、经济损失，鉴于此，世界动物卫生组织 （OIE）将其列为通报疫病，我国政府将其排在15个一类动物传染病的第一位。贵南县2006年、2008因引进家畜引发了2次大的口蹄疫疫情流行，造成了巨大的经济损失，鉴此，该县非常重视家畜口蹄疫苗的免疫接种工作，该监测的目的是为了进一步掌握口蹄疫免疫效果。

2 材料和方法

2.1 实验材料

被检血清、96孔反应板、水浴锅、50～100μl移液器、移液嘴、加样槽、中国农业科学院兰州兽医研究所生产的口蹄疫O型间接血凝抗体检测试剂盒。试剂批号2014022084、2014071706、规格5ml、有效期3个月、保存温度2～8℃.

2.2 方法

正向间接血凝实验。

2.3 实验步骤

2.3.1 加稀释液

在血凝板上1～7排的1～10孔、第8排的1～4孔和第5～7孔，加稀释液50μl/孔。

2.3.2 稀释待检血清

待检血清使用前，需经过56℃水浴灭活30min，取待检灭活血清样品50μl，分别加入反应板1～6排的第1孔中，与稀释液混匀后，吸取50μl，加于第2孔中，依次作2倍系列稀释至第10孔，第10孔混匀后取出50μl弃去。

2.3.3 稀释阳性对照血清

在血清板的第7排第1孔加阳性血清50μl，2倍系列稀释至第10孔，混匀后从该孔取出50μl丢弃。此时被检血清和阳性血清的稀释倍数依次为1.2～1：1024。

在血凝板的第8排第1孔加阴性血清50μl，对倍稀释至第4孔，混匀后从该孔取出50μl丢弃。此时阴性血清的稀释倍数依次为 1： 2、 1： 4、 1： 8、 1： 16。 第 5～7孔为稀释液对照，每孔仅加入50μl稀释液。

2.3.4 加血凝抗原

血清稀释孔和稀释对照孔加血凝抗原 （充分摇匀，瓶底应无血球沉淀）25μl/孔。将反应板置微型震荡器上震荡2～3min或用手依次四边轻拍，直至血球分布均匀。封板膜封板，室温下静置2～3h判定结果。

2.4 判定标准

以呈现 “++”血凝反应的血清最高稀释度作为该血清的间接血凝抗体效价。血凝反应强度表示如下：

“++++”红细胞全部凝集，形成一层均匀膜，布满整个孔底。

“+++” 红细胞在孔底形成一层薄膜，面积比前者略小。

“++” 红细胞在孔底形成薄膜凝集，边缘松散或呈锯齿状。

“+” 红细胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圆点。

“±” 红细胞沉于孔底，但周围不光滑或中心有空斑。

“-” 红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点。

当阳性血清抗体效价≥1：256、阴性血清抗体效价≤1：16、稀释液对照孔无自凝现象时，实验成立。接种口蹄疫O型疫苗的猪免疫抗体效价≥1：128为免疫合格，牛羊免疫抗体效价≥1：256为免疫合格。

3 结果与分析

（1）2014年每季度采集贵南县塔秀乡、过马营镇的牧户饲养的牦牛和绵羊以及县城屠宰场屠宰的牛、羊血清各90份进行了监测，通过监测发现第一季度散养户饲养的牛、羊抗体合格率分别为82.5%和57.5%；屠宰场屠宰的牛羊抗体合格率分别为75%和40%。第二季度散养户饲养的牛、羊抗体合格率分别为85.6%和88.3%；屠宰场屠宰的牛羊抗体合格率分别为78%和80%。第三季度散养户饲养的牛、羊抗体合格率分别为91.4%和77%；屠宰场屠宰的牛羊抗体合格率分别为80%和65%。第四季度散养户饲养的牛、羊抗体合格率分别为77.1%和74.3%；屠宰场屠宰的牛羊抗体合格率分别为95%和85%，详见附表。

附表 O型口蹄疫免疫抗体合格率统计表

（2）通过实验发现贵南县饲养的牛 “O型”口蹄疫免疫合格率较高，且6、9月份比3、12月份高。这与该县免疫接种时间有关，该县牛口蹄疫苗免疫时间为4月底和9月初，这两个季度的抗体效价高于其他季度。

（3）羊口蹄疫免疫合格率较高，且6、12月份比3、9月份高。这与该县绵羊免疫接种时间有关，该县春季羊口蹄疫苗免疫时间为5月份，秋季羊免疫接种时间为10月份，这两个季度的抗体效价高于其他季度。

（4）通过检测说明，该县的口蹄疫免疫接种工作扎实有效，确保了免疫密度和质量。

旦正措 （1979-），女，藏，本科，助理兽医师，主要从事动物疫病实验室检测工作。