HPLC法测定丹芪血宁胶囊中丹参素的含量

肖建华

（河南省罗山县食品药品检验所，罗山464200）

HPLC法测定丹芪血宁胶囊中丹参素的含量

肖建华

（河南省罗山县食品药品检验所，罗山464200）

目的建立HPLC法测定丹芪血宁胶囊中丹参素含量的方法。方法采用高效液相色谱法，使用WondaSil C18-WR Analytical（5 μm，4.6 mm×250 mm）色谱柱，以甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）为流动相，流速1.0 ml·min-1，检测波长281 nm。结果丹参素在10.0～200.0μg·ml-1范围内线性关系良好，其线性方程为y=14197x-2566（r=0.9999）。丹参素的平均回收率为99.08%，RSD＝0.16%（n＝6）。结论该方法简便、可靠、准确，可作为该制剂的质量控制方法。

丹芪血宁胶囊；丹参素；HPLC；含量测定

丹芪血宁胶囊是河南省信阳市中医院配制的口服医院制剂，由丹参、黄芪、三七、川芎、生地黄等十九味中药组成。具有益气养血，活血止痛之功效，临床用于血瘀阻滞所致头痛、头晕、耳鸣、胸闷、心悸气短、失眠多梦、健忘怔忡、面黄乏力及脑梗塞、心肌梗塞、脑动脉硬化、冠心病、中风后遗症。该制剂原定标准中没有含量测定项，本文以丹参素为指标，参考有关文献［1-5］，建立了HPLC法测定丹芪血宁胶囊中丹参素含量的方法。该法简便、准确、重复性好，处方中其他成分对测定没有干扰，分离效果较好，能有效地考察控制产品质量。

1 仪器与材料

1.1 仪器日本岛津LC-2010C高效液相色谱仪；sartorius CPA224S电子天平；日本岛津UV-2550紫外分光光度计；KQ-300型超声波清洗器；TG16-WS型台式高速离心机；1850D型超纯水机。

1.2 材料丹参素钠对照品（批号：110855-201311，中国食品药品检定研究院），丹芪血宁胶囊（河南省信阳市中医院制剂室，批号：20140408，20140802，20141020），SIGMA-ALDRICH色谱纯甲醇（批号：TDCH0008），冰醋酸为分析纯，水为自制纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件采用高效液相色谱法，以甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）为流动相，WondaSil C18-WR Analytical（5 μm，4.6 mm×250 mm）色谱柱，流速1.0 ml·min-1，检测波长为281 nm，柱温25℃，进样体积10μl，理论板数按丹参素钠峰计应不低于4000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液取置五氧化二磷减压干燥器中干燥12h的丹参素钠对照品，精密称取11.11 mg置25 ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液；量取贮备液5 ml置50 ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成约相当于含丹参素40 μg·ml-1的对照品溶液。

2.2.2 样品溶液取本品20粒，将其内容物混匀、研细，称取适量（约1.2 g）置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入25 ml 50%甲醇，密塞，称定重量；超声处理30 min（功率300 W，频率50 kHz），放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，滤过，取续滤液，备用。

2.2.3 阴性对照溶液用相同工艺及处方比例制备空白制剂样品（不含丹参），按2.2.2项下同法制备阴性对照溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验按2.1项下色谱条件，取对照品溶液、样品溶液和阴性对照溶液进行试验。记录的色谱图显示，样品溶液与对照品溶液在约17 min处有丹参素峰出现，阴性对照溶液在此位置处未见吸收峰出现，说明该方法测定丹参素不产生假阳性干扰。色谱图见图1。

图1 丹芪血宁胶囊HPLC色谱图

2.3.2 线性关系取2.2.1项下对照品贮备液，用50%甲醇分别制成10.0、20.0、40.0、80.0、200.0μg·ml-1浓度的系列溶液（取对照品贮备液5 ml，分别置200、100、50、25、10ml量瓶中），按2.1项下色谱条件测定，以进样浓度（μg·ml-1）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，方程为：y=14197x-2566（r=0.9999）。表明在10.0～200.0μg·ml-1的浓度范围内丹参素线性关系良好。

2.3.3 精密度试验取2.2.1项下的对照品溶液，重复进样5次，测得丹参素峰面积的平均值为567832，RSD= 0.47%（n=5），表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验取同一批样品溶液（批号20140802），分别在0、2、4、8、12 h进样测定，测得峰面积的RSD=0.87%（n=5），表明样品溶液在12 h内丹参素含量稳定。

2.3.5 重复性试验取同一批样品（批号20140802），按2.2.2项下方法制备6份供试品溶液，依2.1项下色谱条件分别试验，测得该批样品中丹参素含量的平均值为0.7815 mg·g-1，RSD=1.41%（n=6），表明所用方法重复性好。

2.3.6 加样回收率试验取已知准确含量的样品（批号20140802），精密称取其研细内容物约0.6 g，置100 ml具塞锥形瓶中，同时精密加入对照品贮备液1 ml（相当丹参素0.4000 mg），按2.2.2项下方法平行制备6份供试液，依2.1项下色谱条件测定，计算加样回收率（%），结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

结果表明，所采用的丹参素含量测定法准确度高。

2.4 样品含量测定取丹芪血宁胶囊3批，按2.2.2项下方法分别制备样品溶液，每批平行做3份，依2.1项下方法测定，计算出每粒胶囊中丹参素的平均含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 检测波长的确定以50%甲醇为空白，取丹参素对照品溶液，在波长200 nm～350 nm的波长范围内进行紫外光谱扫描，结果在波长281 nm处有最大吸收，故选用该波长为检测波长。

3.2 样品溶液的制备采用超声提取再离心分离的方法制备测定用供试品溶液。超声提取技术利用高频电磁波穿透提取介质，到达物料内部维管束和细胞，产生的电磁场可加速被提取成分向提取溶剂界面扩散，最大限度保证提取的质量［6］；离心处理可去除不溶于50%甲醇的物质和机械杂质，使供试液澄清，便于滤过。参考有关文献［7］，溶剂选用50%甲醇，超声提取时间为30 min，即可有效提取所含丹参素；该方法提高了工作效率，避免采用回流提取、柱洗脱分离或乙酸乙酯萃取分离的繁杂流程，节省了人力物力。

3.3 流动相的选择比较使用甲醇-0.05%磷酸-水（5∶1∶94）、甲醇-0.1%磷酸-水（5∶1∶94）、甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）、乙腈-冰醋酸-水（5∶1∶94）等流动相条件，实验结果显示选用甲醇-冰醋酸-水（5∶1∶94）保留时间适当，峰形对称，重复性好，丹参素峰和杂质峰能有效分离。

3.4 含量限度的确定该制剂组方中君药为丹参，丹参素为丹参中主要有效成分，所以选用丹参素作为质控指标是可行的；根据处方中丹参用量和实验测得数据，将1 g内容物中丹参素含有量换算成平均每粒含有量，最终拟定本品每粒含丹参以丹参素（C9H10O5）计，不得少于0.18 mg。

［1］李静.HPLC法测定养心通脉胶囊中丹参酮ⅡA的含量［J］.中国药师，2011，14（10）：1550-1551.

［2］张大军，王兆华.高效液相色谱法测定肾康宁胶囊中丹参素的含量［J］.中国中医药信息杂志，2010，17（10）：49-50.

［3］费超，孟蕾，刘子沐，等.HPLC法测定丹夏乳癖片中丹参素的含量［J］.中国药房，2011，22（23）：2132-2163

［4］江庆洋，周修森.RP-HPLC法测定麦味地黄胶囊中马钱苷的含量［J］.中国中医药现代远程教育，2015，13（1）：140-141.

［5］周修森，方永凯.HPLC法测定柴丹疏利胶囊中丹参素的含量［J］.西部中医药，2012，25（10）：25-27.

［6］李莉，谭蔚，马雪松.微波辅助提取黄芪甲苷的研究［J］.中药材，2007，30（2）：234-236.

［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药出版社，2010：549.

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2015年2月10日

Content Determination of Danshensu in Danqi Xuening Capsule by HPLC

XIAOJianhua
（Luoshan Institute for Food and Drug Control，Henanprovince，Luoshan464200，China）

Objective To establish the method for the content determination of Danshensu in Danqi Xuening capsule.Methods HPLC method was adopted.WondaSil C18-WR Analytical column（5 μm，4.6 mm×250 mm）was used with mobile phase consisted of methanol-glacial acetic acid-water（5∶1∶94）at flow rate of 1.0 ml·min-1.The detection wave length was set at 281 nm.Results There was a good linear relationship in the concent ration range of 10.0～200.0 μg·ml-1，the linear equation was y=14197x-2556（r= 0.9999）.The average recovery was 99.08%，with RSD=0.16%（n=6）.Conclusion The method was simple，reliable and accurate，and can be applied to the quality control of the preparation.

Danqi Xuening capsule；Danshensu；HPLC；content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.10.072

1672-2779（2015）-10-0140-03

：杨杰本文校对：周修森

2015-04-27）