大黄对雌性幼年大鼠血清GnRH、LH、FSH、P、E2水平的影响*

刘梦杰，佟继铭，宋素英，万慧杰，卢 宁，张树峰△

（1.河北省中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德 067000；2.河北联合大学中医学院）

大黄对雌性幼年大鼠血清GnRH、LH、FSH、P、E2水平的影响*

刘梦杰1，佟继铭1，宋素英2，万慧杰1，卢 宁1，张树峰1△

（1.河北省中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德 067000；2.河北联合大学中医学院）

目的：观察大黄水提物对雌性幼年大鼠血清促性腺激素释放激素（GnRH）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、孕酮（P）、雌二醇（E2）水平的影响。方法：4周龄雌性SD大鼠20只，随机分为正常对照组和大黄水提物2.0g/kg组，每组10只，连续灌胃给药30天。采用ELISA法检测各组大鼠血清GnRH、LH、FSH、P、E2的水平。结果：与正常对照组大鼠比较，大黄水提物2.0g/kg组大鼠GnRH、P、E2激素水平明显降低（P＜0.05），LH、FSH激素水平明显升高（P＜0.05）。结论：大黄水提物可明显影响雌性幼年大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的激素水平。

大黄水提物；雌性幼年大鼠；GnRH；LH；FSH；P；E2

大黄是一种多年生草本植物，自古为临床常用药，又称为黄良、川军、火参、绵纹等［1］。现代医学研究证明，大黄具有抑菌、止血、降血压、凉血解毒、利湿退黄等功效［2］。美国学者诺尔曼・泰勒的《改变世界的植物》一书将大黄列为“有全球影响”的十几种药物之一［3］。随着研究的深入与广泛，研究发现大黄具有严重的胃肠道反应、免疫抑制、生殖系统毒性等毒副作用，进而大黄的毒理学研究引起学者的广泛重视［4］。有报道称，大黄可使金黄地鼠、小鼠生精小管上皮细胞层断裂脱落，大鼠及金黄地鼠性器官萎缩［5-6］。本课题组的前期研究亦发现，长期灌胃大黄提取物，对雌性和雄性大鼠的生殖系统均可造成不同程度的损害［7-8］。另有文献记载，不同周龄大鼠对大黄的耐受性不同，大黄的不良反应与大鼠的周龄有关［9］。本研究在前期研究的基础上，给予4周龄雌性SD大鼠长期灌胃大黄水提取物，检测大鼠血清中促性腺激素释放激素（GnRH）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、孕酮（P）、雌二醇（E2）的变化情况，以期为今后大黄的临床用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 大黄（Rheum palmatum L），安国市长安中药材有限公司，批号：20090902，经承德医学院中药研究所刘翠哲研究员鉴定为掌叶大黄的干燥根茎；大鼠GnRH、LH、FSH、P、E2、ELISA试剂盒，购自上海索宝生物科技有限公司。Multiskan MK3酶标仪，美国Thermo。

1.2 大黄水提取物的制备 大黄药材粉碎为粗粉，10倍水浸泡2h，合并提取液，过滤，40℃减压浓缩至生药量含量为0.4g/ml备用。

1.3 实验动物分组及处理 4周龄雌性SD大鼠20只，SPF级，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号：SCXK（京）2009-0004。大鼠随机分为正常对照组、大黄水提物2.0g/kg组，每组10只，大黄水提物组大鼠连续灌胃给药30d。

1.4 指标检测 各组大鼠于给药结束后第2天腹主动脉采血，3500r/min离心10min取血清，-20℃冰箱保存，采用ELISA法检测大鼠GnRH、LH、FSH、E2、P的水平。

1.5 统计分析 应用SPSS 17.0软件进行统计分析，组间计量资料的比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

与正常对照组大鼠比较，大黄水提物2.0g/kg组大鼠各激素水平都有所变化，其中GnRH、P、E2激素水平明显降低（P＜0.05），LH、FSH激素水平明显升高（P＜0.05）。见附表：

附表 大黄对雌性幼年大鼠血清GnRH、LH、FSH、P、E2水平的影响（±s，n=10）

附表 大黄对雌性幼年大鼠血清GnRH、LH、FSH、P、E2水平的影响（±s，n=10）

指标 　　正常组 　　大黄水提物组（2.0g/kg） 　P GnRH（ng/L） 　19.78±1.08 　18.56±0.20 　　＜0.05 LH（ng/L） 　1254.44±17.57 　1280.83±19.42 　　＜0.05 FSH（IU/L） 　5.67±0.05 　5.78±0.08 　　＜0.05 P（ng/L） 　731.0±30.06 　693.5±12.02 　　＜0.05 E2（ng/L） 　32.49±0.32 　31.31±0.74 　　＜0.05

3 讨论

下丘脑-垂体-卵巢轴（HPO）是一个完整的神经内分泌轴，三个组分相互调节和制约，表现为女性正常的月经周期、生殖器官形态与功能的周期性变化。下丘脑弓状核神经内分泌细胞分泌的GnRH以脉冲式释放到垂体前叶，与垂体前叶的促性腺激素细胞表面的受体结合，刺激FSH和LH的分泌，进而通过血液循环到达卵巢，调节E2与P的分泌水平以及卵子的生成［10］。FSH、LH是由腺垂体分泌的具有调节作用的糖蛋白，可促进卵泡的成熟［11］。卵巢主要分泌雌激素和孕激素，雌激素中以E2的活性最强，可协同FSH促进卵泡的发育并诱导LH峰的出现从而排卵，还可促进子宫的发育使子宫内膜发生周期性变化；孕激素主要为P，具有调节腺垂体激素分泌并在排卵前协同雌激素诱发LH分泌出现高峰，影响生殖器官的生长发育等功能。因此，各激素的正常分泌是生殖功能正常的主要因素，下丘脑分泌的GnRH对垂体分泌的FSH、LH有正反馈调节作用，同时，FSH、LH也受E2、P的负反馈调节。

本研究结果显示，与正常对照组比较，大黄水提物2.0g/kg组大鼠血清GnRH、E2、P激素水平降低，FSH、LH激素水平升高。本课题组的前期研究已经证明，大黄水提物可致卵巢萎缩，各级卵泡数减少等［7］。结合本研究结果，推断大黄水提物致卵巢病变可能是由于其干扰生殖内分泌的激素水平，使激素分泌紊乱所致。而本研究结果显示的大黄致HPO轴内分泌激素的紊乱，考虑是为保持HPO轴激素平衡由反馈调节所致，但具体是否为组织本身病变而导致激素水平的变化，还需进一步对组织进行病理观察。

综上所述，长期应用大黄水提物可影响大鼠HPO轴激素水平，本研究可为今后大黄的临床安全用药提供依据。

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INFLUENCES OF RHUBARB ON GNRH， LH， FSH， P AND E2LEVEL IN SERUM OF YOUNG FEMALE RATS

LIU Meng-jie， TONG Ji-ming， SONG Su-ying， et al

（Hebei Key Laboratory of Research and Exploitation of Traditional Chinese Medicine/ Institute of Chinese Materia Medica，Chengde Medical College， Hebei Chengde 067000， China）

Objective： To observe the infl uences of aqueous extract of Rhubarb on gonadotrophin releasing hormone （GnRH）， luteinizing hormone （LH）， follicle-stimulating hormone （FSH）， progesterone （P） and estradiol （E2） level in serum of young female rats. Methods：20 4-week female SD rats were randomly divided into normal control group and Rhubarb aqueous extract （2.0g/kg） group， with 10 rats in each group. The GnRH， LH， FSH， P and E2level in serum of rats were detected by ELISA after the rats were lavaged with Rhubarb aqueous extract for 30-day. Results： Compared with rats in normal control group， the GnRH， P and E2level in serum of rats in Rhubarb aqueous extract group decreased obviously （P＜0.05）； LH and FSH level increased obviously （P＜0.05）.Conclusions： Rhubarb aqueous extract can infl uence the hormone level of hypothalamic-hypophyscal-ovarian axis of young female rats obviously.

Aqueous extract of Rhubarb； Young female rats ； Gonadotrophin releasing hormone （GnRH）； Luteinizing hormone （LH）； Follicle-stimulating hormone （FSH）； Progesterone （P）； Estradiol （E2）

R285.5

A

1004-6879（2015）02-0102-03

2014-09-26）

* 河北省教育厅重大项目（2009301）