Bmi-1和hTERT在结直癌组织中的表达和相关性

胡占锋，李淑全，严 鹏，徐瑞云，郑纪宁△（.承德医学院，河北承德 067000；.承德市第三医院）

Bmi-1和hTERT在结直癌组织中的表达和相关性

胡占锋1，李淑全2，严 鹏1，徐瑞云1，郑纪宁1△
（1.承德医学院，河北承德 067000；2.承德市第三医院）

目的：探讨Bmi-1和hTERT在结直肠癌发生发展中的作用。方法：采用免疫组织化学染色法检测Bmi-1蛋白和hTERT表达水平。结果：结直肠癌组织Bmi-1和hTERT的阳性表达率明显高于癌旁正常黏膜（P ＜0.05）。Bmi-1、hTERT阳性表达与病理分期、浸润深度和有无淋巴结转移有关（P＜0.05），与性别和分化程度无关（P＞0.05）。结直肠癌组织Bmi-1和hTERT的表达呈正相关关系（P＜0.05）。结论：Bmi-1和hTERT与结直肠癌的发生发展密切相关，且二者在结直肠癌发生发展中具有协同作用。

结直肠癌；Bmi-1；hTERT；免疫组织化学染色

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病毒插入位点1（Bmi-1）是一个转录抑制因子，隶属PcG蛋白家族，在细胞增殖和多种肿瘤干细胞自我更新、分化调节中发挥重要作用［1］。已有研究表明，Bmi-1在多种肿瘤细胞中过表达［2-5］。hTERT是端粒酶活性亚单位，其表达与端粒酶活性一致，且是端粒酶的限速剂［6］。85%-90%的肿瘤细胞可以检测到端粒酶活性，而与肿瘤相邻的良性病变或正常组织仅有4%左右或几乎没有端粒酶活性。但目前Bmi-1和hTERT在结直肠癌中的作用及相关性尚无报道。本研究采用免疫组化法检测结直肠癌组织Bmi-1和hTERT的表达，探讨二者与结直肠癌生物学行为的关系，并分析二者的相关性。

1 材料与方法

1.1 临床资料 承德医学院第二附属医院2013年7月至2014年3月手术切除并经病理证实的结直肠癌石蜡标本68例（术前未行放、化疗），且有完整的临床病理资料。其中男43例，女25例；年龄45-82岁，平均62岁。68例中，中高分化27例，低分化41例；有淋巴结转移47例，无淋巴结转移21例；2010年TNM临床分期Ⅰ-Ⅱ期28例，Ⅲ-Ⅳ期40例；癌组织浸润至黏膜层8例，浸润至肌层20例，浸润至浆膜层及以下40例。同时，收集手术切除的癌周正常肠黏膜（距癌组织＞8cm）标本15例作为对照。

1.2 免疫组化染色 所有标本连续4μm切片，采用免疫组化SABC法分别检测Bmi-1蛋白和hTERT的表达，一抗均为兔抗，稀释度1：100（一抗购于武汉博士德生物科技有限公司），DAB显色，苏木素复染。以PBS替代一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定标准 切片采用盲法由两位病理医师单独阅片，采用双积分半定量法量化［7］。随机采集4个不同高倍（×400）视野，计数总细胞数和阳性细胞数，根据阳性细胞率打分：1分，≤10%；2分，＞10%且≤50%；3分＞50%且≤75%；4分＞75%。同时，对染色程度进行评分：1分，与背景色完全一致；2分，淡黄色；3分，棕黄色；4分，棕褐色。两种计分结果相乘后判定结果：≤8为阴性，＞8为阳性。

1.4 统计分析 采用SPSS 17.0统计软件进行数据处理，计数资数行卡方检验，相关性分析行Spearman相关分析，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 结直肠癌组织Bmi-1和hTERT的表达 Bmi-1蛋白和hTERT主要表达于癌细胞核，少部分细胞质也有染色；Bmi-1阳性细胞内可见棕黄色或棕褐色颗粒，hTERT阳性细胞均匀着色，呈棕黄色。结直肠癌组织Bmi-1和hTERT的阳性表达率明显高于癌旁正常黏膜（P＜0.05）。见表1：

表1 结直肠组织和癌旁正常黏膜Bmi-1和hTERT的表达情况

2.2 Bmi-1和hTERT表达与结直癌生物学行为的关系

Bmi-1、hTERT阳性表达与TNM分期、浸润深度和有无淋巴结转移有关（P＜0.05），与性别和分化程度无关（P＞0.05）。见表2：

表2 Bmi-1和hTERT表达与结直癌生物学行为的关系

2.3 结直肠癌组织Bmi-1和hTERT表达的相关性 结直肠癌组织Bmi-1和hTERT的表达呈正相关关系（rs=0.503，P＜0.05）。见表3：

表3 结直肠癌组织Bmi-1和hTERT表达的相关性

3 讨论

端粒在大多数正常细胞中随着细胞周期缩短，当缩短到一定长度时染色体畸变，失去稳定性，最终导致细胞衰亡。但在造血干细胞、生殖细胞和肿瘤细胞，端粒酶激活维持端粒长度，从而使细胞获得无限分裂和增殖能力。hTERT是端粒酶的主要催化亚单位，在正常细胞中其表达受到抑制。因此，hTERT高表达是端粒酶激活的标志，与恶性肿瘤的发生发展密切相关。Bmi-1基因于1991年由荷兰癌症中心在鼠淋巴瘤中发现，可通过抑制Ink4a位点、诱导端粒酶逆转录酶表达、维持肿瘤干细胞的自我更新等多种途径促进肿瘤的恶性进展，也是肿瘤术后复发的根源之一［8-10］。

本研究显示，结直肠癌组织Bmi-1和hTERT蛋白表达的阳性率显著高于癌旁正常黏膜，且二者阳性表达与浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关。因此提示，Bmi-1和hTERT在结直肠癌的发生发展中起着重要作用。相关分析显示，结直肠癌组织Bmi-1和hTERT表达在翻译水平呈正相关。与Dimri等［9］的研究结果一致。

总之，Bmi-1和hTERT与结直肠癌的发生发展密切相关，且二者在结直肠癌发生发展中具有协同作用。本研究推测，联合检测Bmi-1和hTERT可能有助于结直肠癌的诊断，以及为结直肠癌的临床治疗提供新策略。

［1］Rossi DJ， Jammieson CH， Weissman IL. Stem cells and the pathways to aging and cancer［J］. Cell， 2008， 132（4）： 681-696.

［2］Silva J， Garcia V， Garcia J M， et al. Circulation Bmi-1 mRNA as a possible prognostic factor for advanced breast cancer patients［J］. Breast Cancer Res， 2007， 9（4）： R55.

［3］Liu JH， Song LB， Zhang X， et al. Bmi-1 expression predicts prognosis for patients with gastric carcinoma［J］. Surg Oncol，2008， 97（3）： 267-272.

［4］刘蓓，王琼，范军，等.Bmi-1在宫颈癌组织中的表达及意义［J］.微循环学杂志，2010，20（3）：20-22，26.

［5］冯艳，宋藏兵，郭宝红，等.Bmi-l在乳腺癌组织中的表达及意义［J］.癌症，2007，26（2）：154-157.

［6］Chang JT， Chen YL， Yang HT， et al. Differential regulation of telomerase activity by six telomerase subunits ［J］. Eur J Biochem，2002， 269（14）： 3442-3450.

［7］战怀兵，蔡曦光，吴凤铭，等.Bmi-1和hTERT在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究［J］.临床肿瘤学杂志，2009，14（1）：10-14.

［8］Kim JH， Yoon SY， Kim CN， et al. The Bmi-1 oncoprotein is overexpressed in human colorectal cancer and correlates with the reduced p16INK4a/p14ARF proteins［J］. Cancer Letters， 2004，203（2）： 217-224.

［9］Dimri GP， Martinez JL， Jacobs JJ， et al. The Bmi-1 oncogene induces telomerase activity and immortalizes human mammary epithelial cells ［J］. Cancer Research， 2002， 62（16）： 4736-4745.

［10］Jiang L， Li J， Song L. Bmi-1， stem cells and cancer［J］. Acta Biochim Biophys Sin， 2009， 41（7）： 527-534.

EXPRESSIONS AND CORRELATIONS OF BMI-1 AND HTERT IN COLORECTAL CARCINOMA

HU Zhan-feng， LI Shu-quan， YAN Peng， et al

（Chengde Medical College， Hebei Chengde 067000， China）

Objective： To investigate the actions of Bmi-1 and hTERT in development of colorectal carcinoma. Methods： Immunohistochemical stain was used to detect the expression of Bmi-1 and hTERT. Results：The positive expression rate of Bmi-1 and hTERT in colorectal carcinoma were obviously higher than that in para-carcinoma normal mucosa （P＜0.05）. The positive expression of Bmi-1 and hTERT in colorectal carcinoma were associated with pathological stage， infi ltration depth and lymph node metastasis （P＜0.05）； but not associated with age and differentiated degree （P ＜0.05）. In colorectal carcinoma， the expression of Bmi-1 was positively related to hTERT （P＜0.05）.Conclusions：Bmi-1 and hTERT are closely related to development of colorectal carcinoma； Moreover， they also have synergistic effects in development of colorectal carcinoma.

Colorectal carcinoma； Bmi-1； hTERT； Immunohistochemical stain

R735.3

A

1004-6879（2015）02-0093-03

2014-08-29）