藤黄健骨片对肾虚证和血瘀证动物模型的影响及其镇痛作用

朱克俭 黄 敏 郭喜庚

（1湖南省中医药研究院附属医院临床药理室，长沙410006；2湖南方盛制药股份有限公司医学部，长沙410205）

藤黄健骨片对肾虚证和血瘀证动物模型的影响及其镇痛作用

朱克俭1黄 敏2*郭喜庚2

（1湖南省中医药研究院附属医院临床药理室，长沙410006；2湖南方盛制药股份有限公司医学部，长沙410205）

目的观察藤黄健骨片对肾虚证和血瘀证动物模型的影响及其镇痛作用。方法小鼠腹腔注射氢化可的松制成肾虚证模型，随机分为5组（模型组、仙灵骨葆胶囊组、藤黄健骨片低、中、高剂量组），连续给药14天，观察小鼠性腺和免疫功能的变化。大鼠皮下注射肾上腺素制成血瘀证模型，随机分为6组（空白对照组、模型对照组、仙灵骨葆胶囊组、藤黄健骨片低、中、高剂量组），连续给药7天，观察大鼠血液流变学的变化。采用醋酸扭体和福尔马林致痛两种实验方法评价藤黄健骨片的镇痛作用。结果藤黄健骨片能显著提高氢化可的松所致肾虚证动物模型的胸腺系数、睾丸重量、小鼠碳粒廓清K及校正指数α，改善血瘀证动物模型的血液流变学并降低其全血粘度和血浆粘度，明显抑制由醋酸引起的小鼠扭体反应，对福尔马林致小鼠疼痛的I相和II相反应均有较好的镇痛作用（与模型组或空白组比较，均有显著性差异，P＜0.05）。结论以“补肾、活血、止痛”立法组方用药的藤黄健骨片对肾虚证和血瘀证动物模型具有显著的改善作用，同时也具有较强的镇痛作用，这从药理效应的角度为药物的功能主治提供了佐证，也为其临床定位和合理应用提供了较好的现代药理学依据。

藤黄健骨片；肾虚证；血瘀证；镇痛作用；药理学实验；刘柏龄；骨痹

藤黄健骨片是国医大师刘柏龄教授多年临床经验总结研发而成的中药复方制剂。本品用药精炼，配伍得当，处方共由7味药组成，重用熟地黄为君，滋阴补血，益精填髓；臣药用肉苁蓉、淫羊藿、骨碎补、鹿衔草，分别取其补肾阳、益精血、入肾生髓以治其本，祛风湿、通经络、强筋止痛以治其标，佐以鸡血藤，补血、活血、通经络、强筋骨；使药为莱菔子，消食、理气，以防补而滋腻之弊。全方共奏补肾、活血、止痛之功。

藤黄健骨片临床主要用于治疗骨关节炎（Osteoarthritis，OA）证属肾虚血瘀证者，症见病变部位的疼痛、僵硬、肿胀、无力、挛缩和功能障碍，严重影响患者的工作和生活质量。在肯定本品临床疗效的基础上，为探讨该药的药理作用，基于其“补肾、活血、止痛”的治则定位，分别采用两种证候动物模型（肾虚证、血瘀证）和两种镇痛实验方法（醋酸扭体、福尔马林致痛），系统观察和评价藤黄健骨片对肾虚证和血瘀证的改善作用及其镇痛效应，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 药物藤黄健骨片处方由熟地黄、肉苁蓉、淫羊藿、鹿衔草、骨碎补、鸡血藤、莱菔子（炒）组成，由湖南方盛制药股份有限公司提供，批号：20100303。阳性对照药是仙灵骨葆胶囊，处方由淫羊藿、续断、补骨脂、地黄、丹参、知母组成，贵州同济堂制药股份有限公司生产，批号：100215。

1.2 动物ICR系清洁级小鼠，雌雄各半，体重18～20 g；SD系清洁级大鼠，雌雄各半，体重180～200 g，合格证号：004202、004460、004532；均由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。

1.3 对肾虚证模型小鼠性腺及免疫功能的影响取ICR系清洁级雄性小鼠72只，体重（17.1±2.5）g，按体重随机取12只为空白对照组，每天腹腔注射生理盐水0.04 ml/只，其余小鼠每天腹腔注射5 mg/ml氢化可的松0.04 ml/只，连续7天，制成肾虚证模型。过程中小鼠死亡2只，剩余58只。剩余造模小鼠随机分成5组，分别为模型组、仙灵骨葆胶囊组（阳性药组）、藤黄健骨片低、中、高剂量组（试验药组）。按下表1剂量给小鼠灌胃给药，每天1次，连续14天。于末次给药后30 min，从尾静脉注射一得阁墨汁（稀释5倍）10 ml/kg。注射后1 min、5 min从眶后静脉丛取血20 μl，溶于2 ml0.1%Na2CO3溶液中，摇匀，于680 nm处测定光密度。最后处死小鼠，分别称取胸腺、肝、脾、睾丸重量，按下列公式计算胸腺指数、碳粒廓清指数K及校正指数α。胸腺指数=（胸腺重量（mg）÷体重（g））×10，K=（logOD1-logOD2）/（t2-t1），α=K-1/3×体重÷（肝重+脾重）。

1.4 对血瘀证模型大鼠血液流变学的影响取SD大鼠60只，雌雄各半，体重（204.8±19.8）g，随机分成6组，分别为空白对照组、模型对照组、仙灵骨葆胶囊组（阳性药组）、藤黄健骨片低、中、高剂量组（试验药组）。各组按表2剂量灌胃给予相应药物7天后，除空白对照组动物外，其余动物于皮下注射肾上腺素（Adr）0.08 ml/100 g两次，间隔4 h，在两次注射Adr之间将大鼠浸入冰水内5 min，造成血瘀证模型，停食至次晨，剪开颈动脉采血测定血液流变学指标。

1.5 镇痛作用

1.5.1 对醋酸扭体小鼠疼痛阈值的影响取ICR小鼠50只，雌雄各半，体重（19.1±0.75）g，按体重随机分成5组，分别为空白对照组、吗啡组、藤黄健骨片低、中、高剂量组（试验药组）。小鼠按下表3剂量给药，1h后各小鼠腹腔注射0.7%醋酸0.1 ml/10 g，记录5～15 min内的扭体次数。

1.5.2 对福尔马林小鼠疼痛的影响［1］小鼠足底皮下注射福尔马林引起的疼痛反应可分为两个时相：0～10 min出现者为Ⅰ相（早期相）反应，10～60 min出现的反应为Ⅱ相（迟发相）反应。用微量注射器向动物足底皮下注射3%的福尔马林溶液，30 μl/只，立即置入一悬挂在铁架台上的平底大玻璃容器内，容器下方置一倾斜30度左右的大镜子，从镜面观察动物足部反应。足部反应分为4级：1级是舔、咬或抖足；2级是提足；3级是轻触底面但不负重，行走时跛行；4级是正常负重，走动自如。以1级疼痛的出现时间（即潜伏期）和持续时间（即疼痛期）为疼痛指标进行统计，Ⅰ相反应的潜伏期从注射福尔马林开始至舔、咬或抖足止；Ⅱ相反应的潜伏期从注射福尔马林10 min后开始至舔、咬或抖足止。

分组给药：取ICR小鼠50只，体重（16.5±1.5）g，雌雄各半，随机分成5组，分别为：空白对照组、吗啡组、藤黄健骨片低、中、高剂量组（试验药组），按表4剂量灌胃给药1 h后，各小鼠足底注射3%福尔马林30 μl/kg，记录0～90 min内的疼痛状况。

2 结果

2.1 藤黄健骨片对肾虚证模型的作用研究结果显示，模型组动物在造模后普遍消瘦，毛发无光泽，倦怠少动，治疗期间体重增长缓慢。由表1可见，与空白组比较，模型组小鼠的胸腺系数、睾丸重量、小鼠碳粒廓清K及校正指数α均明显降低。与模型组比较，藤黄健骨片中、高剂量组小鼠的胸腺系数、睾丸重量、碳粒廓清K及校正指数α均显著性升高。

表1 藤黄健骨片对肾虚证模型小鼠性腺及免疫功能的影响（）

表1 藤黄健骨片对肾虚证模型小鼠性腺及免疫功能的影响（）

注：与模型组比较，t检验，*P＜0.05，**P＜0.01

组别动物（只）剂量（g / k g）α空白组1 1 / 8 . 9 7 5 ± 1 . 4 3 8**1 . 4 1 ± 0 . 2 4 1 3 8 ± 2 8 0 . 1 6 9 ± 0 . 0 3 0阳性药组1 0 0 . 8 1 . 7 1 ± 0 . 3 0*1 5 5 ± 2 1*0 . 1 8 8 ± 0 . 0 2 8*8 . 5 0 1 ± 1 . 2 5 0*睾丸重量（m g）K 1 6 9 ± 3 0**0 . 2 1 4 ± 0 . 0 3 5**模型组9 / 7 . 1 5 7 ± 1 . 4 0 9胸腺系数（m g / g）1 . 9 4 ± 0 . 3 8**试验药组1 1 1 . 7 1 . 6 4 ± 0 . 3 6 1 5 4 ± 2 3 0 . 1 8 0 ± 0 . 0 2 3 8 . 1 6 2 ± 1 . 0 0 4 1 0 3 . 4 1 . 7 2 ± 0 . 2 5*1 5 6 ± 3 5 0 . 1 8 2 ± 0 . 0 3 7 8 . 3 0 7 ± 1 . 3 2 6*1 1 6 . 8 1 . 8 5 ± 0 . 2 9**1 6 2 ± 3 7*0 . 1 9 2 ± 0 . 0 3 7*8 . 5 1 6 ± 1 . 5 0 0*

2.2 藤黄健骨片对血瘀证模型的作用实验结果显示，与空白对照组比较，血瘀证模型组动物的全血粘度、血浆粘度、红细胞压积均明显升高。与血瘀证模型组比较，藤黄健骨片中、高剂量组血浆粘度显著性减低，高剂量组全血粘度显著性减低。

表2 藤黄健骨片对血瘀模型大鼠血液流变学的影响（，n=10）

表2 藤黄健骨片对血瘀模型大鼠血液流变学的影响（，n=10）

注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

全血粘度（S H R 1 0 -1）空白对照组/ 2 2 . 1 2 8 ± 2 . 9 2 4红细胞压积（%）4 7 . 7 ± 7 . 4 3 9血瘀模型组/ 2 5 . 1 8 2 ± 2 . 9 1 0*2 . 1 2 4 5 ± 0 . 2 5 8*5 4 . 5 ± 5 . 7 0 1*阳性药组0 . 5 2 3 . 7 5 1 ± 3 . 9 9 7 1 . 8 9 2 7 ± 0 . 1 0 8*5 2 . 1 ± 3 . 7 5 5组别剂量（g / K g）血浆粘度（S H R 1 2 0 s -1）1 . 8 5 6 1 ± 0 . 1 6 2试验药组1 . 2 2 3 . 1 5 6 ± 2 . 2 1 5 1 . 9 2 0 6 ± 0 . 2 2 6 5 3 . 4 ± 5 . 2 5 3 2 . 4 2 2 . 7 0 8 ± 2 . 4 1 4 1 . 8 9 6 4 ± 0 . 1 2*5 1 . 6 ± 6 . 5 5 2 4 . 8 2 2 . 5 0 4 ± 2 . 3 7 0*1 . 8 7 8 4 ± 0 . 2 5*5 1 . 4 ± 2 . 6 7 5

2.3 藤黄健骨片镇痛作用

2.3.1 对醋酸扭体小鼠疼痛阈值的影响实验结果表明，与空白对照组比较，藤黄健骨片高剂量组小鼠扭体次数有显著性差异，能明显抑制由醋酸引起的小鼠扭体反应，表明藤黄健骨具有一定的镇痛作用。

表3 藤黄健骨片对小鼠扭体反应的影响（，n=10）

表3 藤黄健骨片对小鼠扭体反应的影响（，n=10）

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别剂量（g / k g）潜伏期空白对照组/ 1 5 8 . 3 ± 4 6 . 6抑制率（%）/吗啡组0 . 0 0 5 3 1 7 . 5 ± 5 7 . 1**1 1 . 8 ± 5 . 4**5 9 . 6扭体次数2 8 . 9 ± 7 . 7试验药组1 . 7 2 0 2 . 4 ± 4 7 . 4*2 3 . 2 ± 4 . 2 1 9 . 7 3 . 4 2 2 4 . 6 ± 6 8 . 2*2 1 . 6 ± 7 . 9 2 5 . 2 6 . 8 2 4 5 . 8 ± 7 4 . 1**1 8 . 5 ± 9 . 0**3 6 . 0

2.3.2 对福尔马林所致小鼠疼痛的影响研究结果表明，与空白对照组比较，藤黄健骨片高剂量组小鼠I相反应的疼痛期有显著性差异，高剂量组小鼠II相反应的潜伏期和疼痛期均有显著性差异，表明藤黄健骨片对福尔马林致小鼠疼痛的I相反应和II相反应均有一定的镇痛作用，即具有中枢与外周的双重镇痛作用。

表4 藤黄健骨片对小鼠足疼痛反应的影响（，n=10）

表4 藤黄健骨片对小鼠足疼痛反应的影响（，n=10）

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

组别剂量（g / k g）空白对照组/ 3 6 . 9 ± 9 . 0 5 2 6 . 3 ± 1 6 9 . 3Ⅰ相疼痛反应（s）潜伏期疼痛期Ⅱ相疼痛反应（s）潜伏期疼痛期1 8 . 9 ± 2 . 2 1 3 8 . 4 ± 1 7 . 2吗啡组0 . 0 0 5 7 5 . 6 ± 1 8 . 6**1 5 0 . 2 ± 5 5 . 0**2 5 . 8 ± 3 . 5*8 0 . 8 ± 2 0 . 1**试验药组1 . 7 2 0 . 3 ± 4 . 1 1 2 1 . 3 ± 3 7 . 2 3 7 . 2 ± 1 2 . 1 4 9 7 . 6 ± 1 2 1 . 7 3 . 4 2 1 . 0 ± 4 . 5 1 0 9 . 9 ± 4 4 . 0 4 4 . 1 ± 1 3 . 1 4 1 0 . 6 ± 1 2 8 . 4 6 . 8 2 1 . 4 ± 4 . 7 1 0 3 . 7 ± 4 3 . 9*4 9 . 4 ± 1 6 . 9*2 8 2 . 0 ± 7 0 . 3**

3 讨论

骨关节炎（Osteoarthritis，OA）是一种由多因素引起的关节软骨变性、破坏及骨质增生为特点的慢性退行性关节疾病，属于临床常见病、多发病。本病病因尚不明确，其发生与年龄、肥胖、炎症、创伤、遗传因素等有关，发病以中老年人多见，其发病率随年龄增长而增加，据X线普查数据，55岁以上发病率高达88%，女性多于男性［2］。本病最常见的临床表现是疼痛，这也是导致患者就医的主要原因之一；其他症状有关节肿胀、僵硬、挛缩、无力、功能障碍等，严重影响患者的生活质量。

本病属于中医学“骨痹”范畴。《素问·宣明五气》《素问·阴阳应象大论》提出“藏真下于肾，肾藏骨髓之气也”“肾主骨”，“肾主身之骨髓”。本病发病多因肾元亏虚、肝血不足、血脉瘀滞，致骨失所养，筋骨不坚，瘀血内阻或兼有外邪侵袭，经脉痹阻。辨证以本虚标实为主，虚则补益，实则通达，治疗总的组方原则是补肾活血、强筋健骨、舒筋活络。

由于骨关节炎发病机制不清，故尚缺乏特异有效的治疗方法。目前西医临床一线用药多为非甾体抗炎药（NSAIDs）和慢作用药物，其对改善症状具有一定效果。尤其是NSAIDs，是重要的症状性治疗用药，对关节疼痛、肿胀、积液、活动障碍等有较好的治疗效果，但其不良反应也很明显，如消化道溃疡和出血、肾功能损伤、中枢神经症状、抗凝血、转氨酶升高、过敏反应等［3］。在疾病的治疗和药物临床应用过程中，中医药发挥着越来越大的作用。有循证医学Meta分析结果表明［4-6］，中药治疗OA具有较好的认可度，其疗效优于NSAIDs，且安全性远好于NSAIDs。

本研究为探索藤黄健骨片“补肾、活血、止痛”的现代药理学内涵，选用了两种证候模型和镇痛作用实验方法。研究结果表明，藤黄健骨片能显著提高氢化可的松肾虚证模型小鼠的胸腺系数、睾丸重量、小鼠碳粒廓清K及校正指数α，改善肾上腺素血瘀证模型大鼠的血液流变学并降低其全血粘度和血浆粘度。同时，可明显减少小鼠由醋酸引起的扭体次数、抑制扭体反应，对福尔马林致小鼠疼痛的I相和II相反应均有较好的镇痛作用，即具有中枢与外周的双重镇痛效应。藤黄健骨片作为名老中医的临证经验总结，早在20世纪80年代就有大样本的临床观察数据表明其治疗OA疗效显著（1000例），能明显改善临床症状，提高患者的生活质量［7］，近期临床研究数据也佐证了这一点［8］。本项实验研究从探索“补肾、活血、止痛”的药理效应角度出发，验证了藤黄健骨片对肾虚血瘀证的治疗作用。

藤黄健骨片作为中药复方制剂，因其组方配伍和药效物质的复杂性，故通过本项实验，把藤黄健骨片的理法方药与现代药理研究相结合，以表达出藤黄健骨片以“补肾活血”立法的方药及其作用机理对骨关节炎肾虚血瘀证的综合效应，为药物的临床定位和科学合理使用提供确切的实验数据支持。

［1］陈旭，杨勇，刘慧，等.预先鞘内注射氯诺昔康对福尔马林致痛大鼠行为学及脊髓c-Fos蛋白表达的影响［J］.四川大学学报（医学版），2008，39（1）：89-93.

［2］中国中西医结合学会风湿病专业委员会.骨关节炎中西医结合诊疗指南［J］.中药药理与临床，2013，29（6）：150-155.

［3］中华医学会骨科分会.骨关节炎诊治指南（2007年版）［J］.中华骨科杂志，2007，27（10）：793-796.

［4］曹月龙，高宁阳，庞坚，等（节译）.国际骨关节炎研究学会髋与膝骨关节炎治疗指南·第一部分：对现有治疗指南的严格评价及对近期研究依据的系统回顾［J］.国际骨科学杂志，2009，30（3）：138-143.

［5］唐萌芽，翁祝承，邵利芳.中药治疗膝骨关节炎临床疗效和安全性的系统评价［J］.中医正骨，2014，26（1）：43-47.

［6］康杰，李宁，吴滨.膝骨关节炎的治疗措施：随机对照试验及系统评价分析［J］.中国临床康复，2005，30（9）：27-30.

［7］刘柏龄.退行性脊椎炎1000例临床分析［J］.辽宁中医杂志，1982，9（3）：40-41.

［8］张波，卢敏，唐盾.藤黄健骨片、玻璃酸钠联用与单用玻璃酸钠治疗骨性关节疗效比较［J］.药物与临床，2010，17（6）：67-68.

The Effect of Tenghuang Jiangu Tablet on the Animal Model of Kidney Deficiency Syndrome and Blood Stasis Syndrome and Its Analgesic Effect

ZHU Kejian1，HUANGMin2*，GUOXigeng2
（1.Department of ClinicalPharmacology，AffiliatedHospitalof HunanAcademyof ChineseMedicine，Changsha410006，China；2.Medicaldepartment，HunanFangshengPharmaceuticalco.，LTD，Changsha410205，China）

Objective To observe the influence of Tenghuang Jiangu tablet on the animal model of kidney deficiency syndrome and blood stasis syndrome and its analgesic effect.Methods The mouse model of kidney deficiency syndrome was formed by intraperitoneal injection of hydrocortisone.The mice were randomly divided into model group，Xianling Gubao capsule group，groups with low，middle and high dosages of Tenghuang Jiangu tablet，and the perfusion course was 14 days.The gonad and immunologic functions were detected and observed.The rat model of blood stasis syndrome was formed by subcutaneous injection of epinephrine.The rats were randomly divided into blank group，model group，Xianling Gubao capsule group，groups with low，middle and high dosages of Tenghuang jiangu tablet，and the perfusion course was 7 days.The hemorheology indexes were detected and observed.The analgesic effect of Tenghuang Jiangu tablet was evaluated by the experiment methods of acetate torsion body and faure marin.Results The Tenghuang Jiangu tablet can enhance thymus coefficient，testicular weight，carbon clearance K and correction index α of kidney deficiency syndrome model，can improve blood rheology and reduce whole blood viscosity and plasma viscosity of blood stasis syndrome model，can inhibit acetate body torsion reactions，and then can inhibit I phase and II phase pain reaction by faure marin.There were significant differences between in Tenghuang Jiangu tablet group and model group or blank group（P＜0.05）.Conclusion Jinying capsule have the effect on bacteriostatic and uterine inflammation and endometrial adhesion，and can reduce the uterine pathological changes，promote inflammation restoration，and keep uterine cavity unobstructed.

Tenghuang Jiangu tablet；kidney deficiency syndrome；blood stasis syndrome；analgesic effect；pharmacology experiment；Liu Bailing；bone bi-disease

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.15.071

1672-2779（2015）-15-0139-03

：张文娟本文校对：郭喜庚

2015-06-19）

*通讯作者：hminykjie@163.com