乙型肝炎病毒DNA与血清标志物的检测结果分析

武晓敏

(濮阳市人民医院 检验科 河南 濮阳 457000)

慢性乙型病毒性肝炎临床表现为乏力、恶心、腹胀、肝区疼痛、畏食等症状。病情呈进展性，若未取得及时准确治疗，极易诱发全身各个系统疾病，如肝源性糖尿病、脂肪肝、肝硬化等。乙肝属于传染性强的慢性疾病，HBV DNA 阳性是HBV 感染、复制和传染最为直接有力的参考依据［1］。目前常用ELISA 检测HBV 血清中HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBc 等。近年来，医院在临床诊断时不再局限于一种方法，常联合FQ－PCR检测HBV DNA，灵敏度高，检出率高。现笔者以340份乙肝病毒血清作为研究对象，分析其关系。

1 材料与方法

1.1 研究材料 340 份乙肝病毒血清来源于2012年4月至2014年7月于濮阳市人民医院就诊的乙肝患者，均符合病毒性肝炎相关诊断标准;其中男性217例，女性123例;年龄20～60 岁，平均年龄(45.6±3.7)岁，病程2～11 a，平均病程(7.8±3.1)a。其中300例为慢性乙型肝炎患者，40例为乙型肝炎肝硬化患者;所有患者接受FQ－PCR 检测及ELISA 检测前均未服用任何抗病毒药物治疗。

1.2 纳入标准 未合并严重肝脏疾病，无肝脏恶性肿瘤;精神正常，依从性良好，无人格障碍;无肾功能异常、心、脑等器质性疾病;排除妊娠期、哺乳期患者。均并签署了研究知情同意书。

1.3 研究方法 采用实时荧光定量－聚合酶链反应(FQ－ PCR)检测HBV DNA，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV 血清标志物(HBVM)，并根据HBVM 测定分为A、B、C、D 5 组，A 组44例，HBsAg、HBeAg 均(+);B 组75例，HBsAg、HBeAg、HBcAb 均(+);C 组68例，HBsAg、HBcAb 均(+);D 组115例，HBsAg、HBeAb、HBcAb 均(+);E 组38例，全阴或HBsAb 单项(+)。ELISA 检测试剂盒以及配套试剂由上海科华生物技术有限公司生产，酶标仪为博赛1210 酶标仪，FQ－ PCR定量检测仪器为美国ABI7000，由深圳匹基生物工程股份有限公司提供试剂。HBV DNA 和HNVM 检测均按照仪器和试剂盒操作说明书进行检测。HBV DNA 通过电脑计算出初始拷贝数定量结果判定，阳性:≥1 ×103拷贝/ml;阴性:＜1 ×103拷贝/ml［2］。

1.4 统计学方法 采用SPSS 17.0 统计学软件进行数据处理分析，定性资料的组间比较采用χ2检验，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同HBVM 间HBV DNA 阳性率对比 A、B、C组检测HBV DNA 阳性率分别为97.7%、88.0%、51.5%显著高于D 组的39.1%(P ＜0.05)，A、B 组检测阳性率分别为97.7%、88.0%高于C 组的51.5%，差异均有统计学意义(P ＜0.05)，A 组阳性率为97.7%稍高于B 组的88.0%，但差异无统计学意义(P ＞0.05)，E 组未检测到HBV DNA 阳性。见表1。

表1 不同HBVM 间HBV DNA 阳性率对比(n，%)

2.2 HBV DNA 阳性和阴性血清中HBsAg 检出率189 份HBV DNA 阳性中，HBsAg 阳性率100.0%(189/189);151 份HBV DNA 阴性标本中HBsAg 阳性率87.4%(132/151)，差异有统计学意义(P ＜0.05)。

2.3 HBV DNA 与HBVM 相关性研究 HBV DNA与HBsAg 相关系数r =0.221，P ＞0.05，无明显相关性;HBV DNA 与HBeAg 相关系数为r = 0.59，P ＜0.05，HBV DNA 与HBeAg 呈正相关;与抗HBs、抗HBC、抗HBe 无相关性。

3 讨论

对乙肝患者HBV 血清标志物(HBVM)实施ELISA 检测，该检测方式可将人体对HBV 的免疫反应状态进行体现，并能够提供HBV 存在的间接证据［3］。另外HBV DNA 阳性是HBV 感染、复制及传染性最为直接和可靠的证据，通过对血清HBV DNA 实施FQ－PCR 检测，可反映出HBV 感染后活动复制的情况。

此次研究中对收集的340例乙肝病毒患者的血清标本分别进行ELISA 检测与FQ－PCR 检测两种方式的测定，结果显示A 组对HBV DNA 检出阳性率明显高于其他4 组(P ＜0.05)，而且在189 份HBV DNA 阳性中标本中HBsAg 的阳性率是100.0%，而其余为HBsAb 样本或为半全阴标本中，HHBV DNA 均为阴性，由此可见，在HBVM 检测中，HBsAg 是HBV 感染灵敏的血清标志物，若HBsAg 为阴性，基本可以判断HBV 未感染。当HBV 感染后，HBsAg 标本中HBc 阳性率较高，则说明抗HBc 是HBV 感染敏感物，但无法区分是目前感染或是既往感染。

HBV DNA 是HBV 感染的分子生物学标记，可反映出机体病毒复制，是HBV 活动性感染特异性标志。而此次研究中，C 组和D 组HBV DNA 阳性率检出率较低，或许是与HBV 低水平复制相关，同时也说明HBV DNA 无法反映病程进展和感染情况。在此次研究中，HBV DNA 与HBsAg、HBeAg 相关性明显，与抗HBs、抗HBC、抗HBe 无相关性。血清标志物能够反映病毒表达水平，也可以间接反映病毒复制情况，在判断乙肝病因、病情进展及预后上起到无法替代的作用。但血清标志物无法判断机体是否现在存在传染性病毒颗粒，而对HBV DNA 的检测即可反应出病毒传染性的强弱［4］。总的来说，HBV DNA 可以反映HBV 复制状况和传染性，但不同患者、不同发病时间及不同类型表现也不相同;血清学指标在判断和分析乙肝病因、进展及预后方面起到的显著作用明显优于HBV DNA［5］。然而无法确定是否存在传染性病毒颗粒，而HBV DNA在此方面的作用则是血清学指标无法比拟的。因此，HBVM 检测是临床诊断HBV 不可或缺的检测方法，HBV DNA 有完整病毒颗粒复制，具有传染性，通过联合HBV DNA 和HBVM 检测，可明显提高其检出率。

在HBV DNA 及HBVM 检测中临床采用FQ－PCR 定量技术检测，即融合荧光技术、探针杂交技术，通过闭管检测方法和检测荧光信号［6］，对HBV DNA定量检测，可避免常规PCR 法产生的交叉污染及无法定量的缺点。通常以FQ－PCR 定量技术检测作为补充血清学检测的方法，可早期诊断乙型肝炎，并有效判断疾病传染性。

综上所述，HBsAg 对HBV 感染的灵敏度较高;采用FQ－PCR 定量方式进行HBV DNA 检测可作为血清学方法的补充，对乙肝诊断有重要价值;可判断和分析乙肝病因、进展及预后，检测患者机体内是否存在传染性病毒颗粒，临床应用价值高。

［1］ 郭辉，闵娟，叶健忠.乙型肝炎病毒DNA 与血清免疫标志物的关系分析［J］.华中医学杂志，2007，31(3):207－209.

［2］ 王智华，张乐之，吴淑梅，等.HBV DNA 与HBV 血清学指标及pre－S1 抗原相关性［J］.临床检验杂志，2005，23(5):386.

［3］ 唐芳玫.乙型肝炎病毒DNA 与血清标志物的关系［J］.检验医学与临床，2010，7(1):28－29.

［4］ 梅小平，李健，曾跃，等.乙型肝炎病毒HBV DNA 与临床分析［J］.中华肝病杂志，2004，22(5):313.

［5］ 何萍，胡如华，杨莉琼，等.乙型肝炎网对模式与乙型肝炎核酸检测结的相关性分析［J］.中国医疗前沿，2008，3(12):45.

［6］ 罗德生.荧光定量PCR 技术及其临床应用［J］.中国误诊学杂志，2004，4(3):365.