食管鳞癌组织中HIF－1α和VEGF－C的表达及意义

刘如 胡晓娜 王雯 刘劲松 吴小源 王建华 贺春语

(1.郑州大学附属肿瘤医院 放疗中心 河南 郑州 450008;2.河南省中医学院三附院 医学影像科 河南 郑州 450008)

缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor－ 1α，HIF－1α)是特异性缺氧状态下发挥活性转录因子，与肿瘤浸润、血管淋巴管再生及放化疗敏感性密切相关［1］。血管内皮生长因子－ C (vascular endothelial growth factor，VEGF－C)是最重要的淋巴管内皮细胞特异性调节因子，能够诱导淋巴管生成和肿瘤细胞的扩散［2］。本文检测HIF－1α 和VEGF－C 在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)组织中表达情况，分析其与病理特征的关系，探讨对ESCC 发生发展及淋巴结转移的作用。

1 资料和方法

1.1 一般资料 收集郑州大学附属肿瘤医院2007年7月至2009年12月行食管癌根治术的ESCC 病例116例，术前均未做抗肿瘤治疗，检测标本为食管癌手术石蜡包埋组织。其中男79例，女37例;年龄30～74 岁，中位年龄61 岁;采用2009年AJCC 食管癌TNM分期标准，T1、T2、T3、T4期分别为6、45、49、16例;N0、N1、N2期分别为58、41、17例;ⅠA 期5例，ⅠB 期24例，ⅡA 期21例，ⅡB 期15例，ⅢA 期34例，ⅢB 期9例，ⅢC 期8例;肿瘤位于胸上、中、下段分别为15、61、40例;高、中、低分化分别为41、49、26例。

1.2 实验方法 所有标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，制成3 μm 厚的切片，采用免疫组化SP 法进行HIF－1α、VEGF－C 染色，染色步骤按SP 试剂盒操作说明进行。兔抗人HIF－1α 多克隆抗体、鼠抗人VEGF－C 单克隆抗体，即用型SP 试剂盒，DAB二氨基联苯胺显色剂试剂盒，均购自福州迈新公司。

1.3 评定标准 HIF－1α、VEGF－C 均以细胞质/胞膜内出现棕黄色细颗粒为阳性细胞。免疫组织化学染色以细胞质内出现特异性染色深浅进行评分:0 分为无色，1 分为淡黄色，2 分为棕黄色，3 分为棕褐色;再依据染色细胞所占百分比评分:阳性细胞数＜10%为0 分，10%～25%为1 分，26%～50%为2 分，51%～75%为3 分，76%～100%为4 分。两项乘积即为该例免疫组化得分:(－)0 分;(+)≥1 分。

1.4 统计学方法 应用SPSS 17.0 统计软件包进行统计分析，不同临床特征间同一指标比较采用χ2检验，指标相关性采用Spearman 等级相关分析，以α =0.05 为检验水准。

2 结果

2.1 HIF－1α、VEGF－C 在ESCC 及癌旁组织中表达 ESCC 组织中HIF－1α、VEGF－C 阳性表达率明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P ＜0.05)。见表1。

表1 HIF－1α、VEGF－C 在ESCC 及其癌旁组织中的表达(n，%)

2.2 HIF－1α、VEGF－C 表达与临床病理特征的关系 HIF－1α 表达仅与ESCC 的浸润深度相关，T 分期越晚表达率越高(P ＜0.05)。VEGF－C 表达与分化程度及淋巴结转移相关，低、中分化或淋巴结转移患者明显高于高分化或淋巴结未转移者(P ＜0.05)，另外发现HIF－1α 和VEGF－C 表达与性别、年龄、分期均无相关(P 均＞0.05)。见表2。

2.3 HIF－1α 与VEGF－C 表达在ESCC 组织中表达的相关性 ESCC 组织中HIF－1α 与VEGF－C 蛋白阳性表达率均为41.4%(48/116)，采用Spearman等级相关分析发现HIF－1α 与VEGF－C 蛋白表达正相关(r=0.214，P= 0.021)，见表3。

表2 HIF－1α、VEGF－C 蛋白表达与ESCC 临床病理特征的关系(n，%)

表3 HIF－1α 和VEGF－C 的表达的相关性

3 讨论

恶性肿瘤细胞快速生长可导致肿瘤内部处于相对缺氧的微环境，在众多参与细胞缺氧状态调控的转录因子中，HIF－1 研究最为广泛。HIF－1 是由α、β 两个亚基构成，缺氧时氧调节亚基HIF－1α 表达增加，与HIF－1β 聚合，调节下游60 余种肿瘤相关基因，产生肿瘤的血管形成、侵袭转移、肿瘤细胞增殖和凋亡等效应［1，3］。赵富周等［4］发现HIF－1α 表达与食管癌分级、浸润深度、淋巴结转移、手术切缘阳性率正相关。赵华锋等［5］报道ESCC 患者中HIF－1α 表达与患者分期、淋巴结转移、分化程度和预后无明显相关。本研究结果表明ESCC 中HIF－1α 阳性表达率63.8%，高于癌旁组织，HIF－1α 蛋白的表达仅与ESCC 的浸润深度相关，T4 患者表达率高达87.5%，而与性别、年龄、分期及淋巴结转移无关，与报道一致［5］。

VEGF－C 是一种分泌型糖蛋白，与不同受体结合后产生相应的生物学效应，VEGF－C 与Flt－4 结合后，可诱导淋巴管形成［6］。杨惠等［7］发现VEGF－ C是高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素，能直接调节内皮细胞分裂增殖，与食管癌淋巴结转移正相关。赵富周等［4］报道VEGF－C 在食管癌组织中表达显著高于癌旁正常组织，与淋巴结转移密切相关。本研究结果显示VEGF－C 蛋白在ESCC 中表达率为56.9%，与分化程度及淋巴结转移相关(P ＜0.05)，提示VEGF－C 蛋白在促进肿瘤新生血管和淋巴管生成中起着重要作用。

HIF－1α 作为转录因子可以调节多个下游基因，以适应相对低氧的环境。Katsuta 等［8］在5 个食管癌细胞株中发现HIF－1α 能够通过介导VEGF－C 的表达促进淋巴管生成。体外研究发现HIF－1α 表达缺陷的肿瘤细胞中，VEGF－C 表达量降低，导致肿瘤组织中血管、淋巴管发展缺陷［9］。本研究初步探索了ESCC 中HIF－1α 与VEGF－C 关系，结果发现HIF－1α 与VEGF－C 表达正相关。

目前分子靶向治疗是恶性肿瘤治疗最有前景的新方向，HIF－1α、VEGF－C 在ESCC 高表达，并在ESCC的发生发展中起重要作用，有助于深入研究ESCC 侵袭转移、放化疗耐受等分子机制，也为HIF－ 1α、VEGF－C 作为ESCC 治疗的新靶点提供理论基础和实验依据。

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［2］ Logan P，Burnier J，Burnier M N.Vascular endothelial growth factor expression and inhibition in uveal melanoma cell lines［J］.Cancer medical science，2013，(7):336－337.

［3］ Carrera S，Senra J，Acosta M I，et al.The role of the HIF－1α transcription factor in increased cell division at physiological oxygen tensions［J］.PLoS One，2014，9(5):979－988.

［4］ 赵富周，杨鲲鹏，庞志刚，等.食管鳞状细胞癌组织中HIF－1α、CCR7 和VEGF－C 蛋白的表达［J］.郑州大学学报(医学版)，2011，46(5):660－662.

［5］ 赵华锋，于振涛，齐大亮，等.缺氧诱导因子在食管鳞癌中的表达研究［J］.天津医科大学学报，2008，14(1):90.

［6］ 刘明阁，于庆凯.肝细胞癌肿瘤血管生成及其临床病理意义［J］.河南医学研究，2014，23(10):4－7.

［7］ 杨惠，许林平，庞雅青，等.食管癌血管形成相关因子的表达及意义［J］.河南医学研究，2010，19(2):129－131.

［8］ Katsuta M，Miyashita M，Makino H，et al.Correlation of hypoxia inducible factor－1 alpha with lymphatic metastasis via vascular endothelial growth factor－ C in human esophageal cancer［J］.Exp Mol Pathol，2005，78(2):123－130.

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