肠杆菌科细菌ESBLs和AmpC酶检测及耐药性分析

武晓敏

(濮阳市人民医院 检验科 河南 濮阳 457000)

随着临床用药技术水平的不断进步发展，以及人们对健康重视程度的不断提高，临床治疗中，为了满足患者的健康需求，抗菌药物的使用越来越多，这也导致细菌耐药性不断增加，其中最具代表的是肠杆菌科细菌ESBLs 和AmpC 酶菌耐药性情况明显增加，增加临床控制以及治疗难度［1－2］。本次研究重点对肠杆菌进行检测并分析耐药性，指导临床用药。

1 资料与方法

1.1 临床资料 统计濮阳市人民医院2012年4月至2014年6月收治的40 例患者标本培养的120 株肠杆菌，菌种类型:克雷伯菌32 株，耶尔森菌7 株，沙雷菌12 株，变形菌6 株，大肠埃希菌58 株，其他5 株。所有菌种均经微生物鉴定仪器以及相应配套身鉴定卡确认。

1.2 检测方法 所抽取菌株的ESBLs 菌表型由双纸片确诊试验检测，AmpC 酶菌则由双纸片氯唑西林增效试验检测，统计检出率，并实施药敏试验，对比分析产酶菌以及非产酶菌的试验结果。

ESBLs 菌检测方法:双纸片确诊试验检测，首先根据纸片扩散法表型筛选，之后经确证试验进行检测，筛选时若发现头孢他啶抑菌环直径小于22 mm，头孢噻肟抑菌环直径小于27 mm，则表明菌株中有可能产ESBLs。确证试验即在上述药物基础上增加克拉维酸，与未放入克拉维酸的抑菌环进行对比，若增加值大于5 mm，则表明产ESBLs。

AmpC 酶菌检测:由双纸片氯唑西林增效试验检测抽取菌株，先根据纸片扩散法表型筛选，并采用改良后的Hodge 试验确证。初次进行筛选时，统计头孢西丁抑菌环直径小于18 mm，则表明菌株中有可能产AmpC 酶菌，再次经确证试验后，头孢西丁抑菌环变化值大于2 mm，则可明确产AmpC 酶菌。

氯唑西林增效试验检测AmpC 酶，采用灭菌蒸馏水分别将氯唑西林制成4、6、8、12 μg/μl 的溶液，采用微量加样器，从中取出20 μl 的氯唑西林溶液，分别将其加在标准ATM、CRO、CTX、CAZ 药敏纸片中心，分别制成240、200、160、120、80 μg 氯唑西林的复合纸片中，放于超净台中晾干后，－20°C 冰箱中留作保存。尽量将标准药敏纸片放在接种好的同一M2H 平皿上，尽量保证复合纸与相应标准药敏纸片对同一受试菌株抑菌环等具有可比性。若含有氯唑西林复合纸片的抑菌环直径大于相应的标准纸片抑菌环直径5 mm，判定为阳性，相反则判定为阴性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 13.0 统计学软件进行数据处理分析，定量资料以(±s)表示，组间比较采用t 检验，定性资料的组间比较采用χ2检验，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AmpC 酶与ESBLs 酶的检出率 120 株肠杆菌中，ESBLs 菌60 株，检出率为50.0%，AmpC 酶菌54株，检出率为45.0%。单产ESBLs 菌38 株，所占比例为31.7%，单产AmpC 酶菌32 株，所占比例为26.7%;产ESBLs 菌与AmpC 酶菌23 株，所占比例为19.2%;不产ESBLs 菌与AmpC 酶菌28 株，所占比例为23.3%。见表1。

表1 120 株肠杆菌科细菌AmpC 酶与ESBLs酶的检出率(%)

2.2 药敏试验结果 单产ESBLs 菌、单产AmpC 酶菌，产ESBLs +AmpC 酶菌对阿米卡星、氨曲南、头孢噻肟、氨苄西林耐药率与非产酶菌的耐药性相比，差异有统计学意义(P ＜0.05)。见表2。

2.3 分析受检菌的多重耐药性 120 株受检菌的4重耐药率为57.1%，8 重耐药率为47.5%，单产AmpC酶菌多重耐药率与非产酶菌率对比，差异有统计学意义(P ＜0.05)。见表3。

表2 不同菌株药敏试验结果［n(%)］

表3 单产AmpC 酶菌多重耐药率与非产酶菌率对比

3 讨论

当前临床关于细菌耐药性的研究中，重点内容之一为β－内酰胺酶所产生的耐药性。β－内酰胺酶类为临床常用的抗菌药物，对其有最大威胁性的是C 类头孢菌素酶超广谱β－内酰胺酶(可简称为ESBLs)、AmpC β－内酰胺酶(可简称为AmpC 酶)［3］。AmpC酶主要是由不动杆菌、肠杆菌、铜绿假单胞菌等革兰阴性杆菌所产生的一类β－内酰胺酶，是对β－内酰胺酶抗生素产生耐药性的主要原因［4］。ESBLs 为β－内旋氨酶，可对单环内酰胺类抗生素、头孢霉素类抗生素等进行水解，且经由不同菌株进行转移以及传播。本次研究中，120 株受检菌ESBLs 菌检出率为50.0%，AmpC 酶菌检出率为45.0%。同时产ESBLs 菌与AmpC 酶菌所占比例为19.2%。肠杆菌属细菌AmpC酶检出率最高，为54.1%，之后依次为克雷伯菌属、大肠埃希菌属，分别为43.1%、41.0%。由药敏结果可见，受检菌对从一代到三代的头孢菌素存在不同程度的耐药，其中产AmpC 酶与ESBLs 菌的耐药率明显高于非产酶菌，分析AmpC 酶与ESBLs 菌产生的原因是导致受检菌出现耐药性的主要原因。临床研究表明，一些长期住院、恶性肿瘤以及病情严重患者常会存在生产酶的酶株，这些酶株常在有免疫缺陷或常使用免疫抑制剂患者中被检出［5］。本次研究表明，单产ESBLs 菌、单产AmpC 酶菌，产ESBLs +AmpC 酶菌对阿米卡星、氨曲南、头孢噻肟、氨苄西林耐药率明显高于非产酶菌的耐药性(P ＜0.05)。单产AmpC 酶与ESBLs 的4 重耐药性率与8 重耐药率明显高于非产酶菌(P ＜0.05)。分析细菌产生多重耐药性原因可能是因为生成AmpC 酶。因此临床建议采用碳青霉烯类抗菌药物，同时产AmpC 酶与ESBLs 细菌而导致的感染，也可根据药敏结果选择采用阿米卡星、头孢噻肟/氨曲南等抗菌药物对患者进行治疗。

综上所述，临床在应用抗生素防治感染时，应注意规范用药，以降低耐药性，提高临床治疗效果。

［1］卢文波，何立忠，汪一萍.肠杆菌科细菌ESBLs 和AmpC 酶检测及耐药性分析［J］.中国卫生检验杂志，2010，11(2):361－361.

［2］邵海枫，王锦娜，严亚惠，等.增加头孢吡肟、头孢吡肟－克拉维酸的双纸片试验在肠杆菌科细菌中检测ESBLs 的探讨［J］.中国感染与化疗杂志，2006，6(6):402－406.

［3］周华，李光辉，陈佰义，等.中国产超广谱β－内酰胺酶肠杆菌科细菌感染应对策略专家共识［J］.中华医学杂志，2014，22(24):1847－1848.

［4］吴多荣，卓超，黄会，等.海南地区多重耐药肠杆菌科细菌产NDM－1 酶现状调查［J］.临床检验杂志，2014，32(7):553－554.

［5］黄丽，高晓坤，张宏.肠杆菌科细菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测［J］.中国感染与化疗杂志，2014，14(4):286－290.