液相色谱串联质谱法快速测定油茶籽中9种农药残留量

李玉平， 佘佳荣，2, 谭利娟， 邓红波

(1.湖南省林产品质量检验检测中心， 湖南 长沙 410004； 2.中南林业科技大学， 湖南 长沙 410004 )

液相色谱串联质谱法快速测定油茶籽中9种农药残留量

李玉平1， 佘佳荣1，2, 谭利娟1， 邓红波1

(1.湖南省林产品质量检验检测中心， 湖南 长沙 410004； 2.中南林业科技大学， 湖南 长沙 410004 )

建立了高效液相色谱串联-质谱法同时检测油茶籽中吡虫啉、乐果、甲胺磷、马拉硫磷、三唑酮、对硫磷、毒死蜱、丁草胺、噻嗪酮9种农药的残留量。样品经乙腈提取后，取上清液直接过膜后进行液相色谱串联质谱分析。采用Agilent SB — C18色谱柱分离，用4g/L甲酸铵水溶液-乙腈作为流动相进行梯度洗脱，电喷雾正离子(ESI+)模式电离，多反应监测(MRM)模式检测。结果表明：各物质峰面积与样品浓度在0.001～0.5mg/L范围内呈良好的线性关系，线性回归系数大于0.9990。在添加浓度0.01～1.0mg/kg范围内，9种农药的平均添加回收率在64.2%～114.1%范围内, 变异系数在1.2%～9.4%之间，该方法能满足油茶籽中9种农药残留量分析的要求。

油茶籽； 液相色谱 — 串联质谱法； 农药残留

油茶籽油是从油茶(CamelliaoleiferaAbel．) 种子中提取，不仅营养丰富，还具有重要的药用价值，可增加肠胃吸收功能，增强血管弹性和韧性，促进内分泌腺体激素分泌，提高人体免疫力，具有东方橄榄油的美称[1-7]，油茶主要分布在湖南、江西和广西等省份，产量占全国总产量的60%以上。目前农药残留问题是影响食品质量安全的一个重要因素，在油茶产量日益增加的同时，其农药残留问题也受到广泛的关注，由于传统单一的农药残留检测方法已难以满足食品安全的新要求，因此，建立简便、快速的油茶籽中多农药残留同时检测的分析方法势在必行。本文根据防治油茶树病虫害所需农药[8-18]，建立了一种超高效液相色谱-串联质谱法用于油茶籽中吡虫啉、乐果、甲胺磷、马拉硫磷、三唑酮、对硫磷、毒死蜱、丁草胺、噻嗪酮等9种农药残留的检测方法[19-24]，具有操作简单快速高效，灵敏度高的特点，能够完全满足油茶籽中多种农药残留同时进行定性和定量的检测要求。

1 材料与方法[25-30]

1.1 材料与试剂

9种农药标准品: 纯度96.5 %～99.9 %；乙腈、甲酸铵均为质谱纯； 实验用水为超纯水(Milli-Q超纯水仪制备得到)。

1.2 仪器与设备

Agilent6460三重四级杆串联质谱仪(配有电喷雾离子源(ESI)：美国Agilent公司；Agilent — 1290 高效液相色谱仪：美国Agilent公司。

1.3 标准储备液的配制

1.3.1 标准储备液的配制 分别准确称取9种农药各25.6mg(精确到0.01mg)置于50mL容量瓶中, 用乙腈溶解并定容至50mL, 由此配制成质量浓度均为500mg/L的9种农药的单标准储备液, 4℃冰箱中避光保存。

1.3.2 标准工作液的配制 根据检测要求用乙腈将储备液逐级稀释，配制9种农药质量浓度分别为0.001、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5mg/L混合标准工作溶液,，供作标准曲线。

1.4 样品处理

用组织捣碎机将油茶籽样品捣碎，称取已捣碎油茶籽样品20g至100mL具塞锥形瓶中，加入乙腈40mL，振荡提取60min，静置取上清液，过0.22μm有机相滤膜至进样瓶中，待LC — MS/MS检测。

1.5 仪器分析条件

1.5.1 液相色谱条件 色谱柱: Agilent SB — C18 1.8μm 2.1×50mm; 流动相组成为乙腈-甲酸铵水溶液(4g/L), 梯度洗脱程序见表1；流速：0.40mL/min；柱温35℃；进样量：2μL。

1.5.2 质谱条件 正离子模式电喷雾接口, 离子喷雾电压：4000V；雾化气压力：206.84kPa；干燥气温度：350℃；干燥气流速：10L/min；检测方式为多反应监测(MRM), 各农药的其余具体质谱条件见表2。

表1 流动相洗脱程序Tab.1 Gradientelutionprogram时间(min)流速(mL/min)4g/L甲酸铵水溶液(%)乙腈(%)00.4604050.4307060.4307080.46040100.46040

2 结果与分析

2.1 质谱与色谱条件的选择

分别将含有1mg/L的吡虫啉、乐果、甲胺磷、马拉硫磷、三唑酮、对硫磷、毒死蜱、丁草胺、噻嗪酮等9种农药标准溶液在正离子和负离子状态下进行全扫描, 找到最佳的电离模式。结果表明在正离子模式下9种农药均产生[M+H]+的最强峰, 选择[M+H]+作为母离子，进行下一步锥孔电压、碰撞能量的优化。选择丰度较高、干扰较小的两对子离子进行多反应监测, 其中丰度最高的作为定量离子。质谱条件见表2。梯度洗脱法常用来分析多种农药成分分析，本实验用乙腈和含4g/L的甲酸铵的水溶液作为流动相, 采用梯度洗脱。结果表明, 吡虫啉、乐果、甲胺磷、马拉硫磷、三唑酮、对硫磷、毒死蜱、丁草胺、噻嗪酮等9种农药在10min内能全部流出且分离效果良好。

2.2 方法学验证

2.2.1 线性关系 分别准确移取吡虫啉、乐果、甲胺磷、马拉硫磷、三唑酮、对硫磷、毒死蜱、丁草胺、噻嗪酮等9种农药适量标准物质(精确至0.01mL)，用色谱纯乙腈作为溶剂配置标准工作曲线，以吡虫啉、乐果、甲胺磷、马拉硫磷、三唑酮、对硫磷、毒死蜱、丁草胺、噻嗪酮等9种农药的峰面积为(Y)轴，相对的质量浓度为(X)轴作标准曲线。结果表明，用液相色谱串联质谱检测这9种农药在0.001～0.5mg/L范围内均线性关系R2为0.9990～0.9999，线性关系良好，能够满足定量分析的需要。

表2 9种农药的质谱检测条件Tab.2 Themass-spectrometryconditionsfordeterminationof9pesticides农药相对分子质量定性离子对(m/z)定量离子对(m/z)锥孔电压(V)碰撞能量(V)吡虫啉256256/209, 256/175.1256/209 11012乐果229.9229.9/199, 229.9/179.9229.9/199 60 5甲胺磷142142/125, 142/94 142/94 7014马拉硫磷330.9330.9/126.8,330.9/98.9 330.9/98.9 40,4012,14三唑酮294.1294.1/197.1,294.1/69.1 294.1/69.1 10016对硫磷291.9291.9/263.9,291.9/235.9291.9/235.9 50 9毒死蜱349.8349.8/197.8,349.8/96.8 349.8/197.8 9516丁草胺312.1312.1/238, 312.1/162.1312.1/238 8010噻嗪酮306.2306.2/201, 306.2/115.9306.2/201 9510

2.2.2 回收率、精密度和检测低限 在空白油茶籽样品中添加0.01mg/kg、0.1mg/kg、1mg/kg三个不同水平的混合标准溶液，按照1.4步骤进行回收率实验, 同时每个不同添加浓度做平行实验, 测定精密度。 结果表明，吡虫啉、乐果、甲胺磷、马拉硫磷、三唑酮、对硫磷、毒死蜱、丁草胺、噻嗪酮等9种农药加标回收率均在64.2%～114.1%之间, 变异系数为1.2%～9.4%。平均回收率和变异系数均满足检测要求。

表3 线性关系、相关系数和标准加入回收率Tab.3 Linearequations,correlationcoefficientsandrecoveriesof9pesticides农药相关系数线性范围(mg/L)线性方程添加浓度(mg/kg)平均回收率(%)RSD(%)0.01113.38.4吡虫啉0.99970.001～0.5Y=35719X+80.270.1103.17.81.098.92.50.01114.13.4乐果0.99970.001～0.5Y=282644X+270.570.1111.67.11.093.93.40.01111.02.3甲胺磷0.99990.001～0.5Y=470394X+677.940.197.35.31.078.92.00.0168.43.4马拉硫磷0.99900.001～0.5Y=159274X+1704.90.167.53.81.067.82.30.0183.05.9三唑酮0.99960.001～0.5Y=93139X+505.370.1105.18.31.097.71.20.0174.74.7对硫磷0.99940.001～0.5Y=21562X+163.940.164.25.01.065.62.10.01100.09.4毒死蜱0.99980.001～0.5Y=10166X+34.580.186.03.91.073.95.90.0186.04.9丁草胺0.99970.001～0.5Y=52040X+229.940.196.51.61.087.82.20.01112.24.6噻嗪酮0.99970.001～0.5Y=524821X+1541.20.192.39.21.086.12.3

3 结论

本实验建立了在油茶籽中吡虫啉、乐果、甲胺磷、马拉硫磷、三唑酮、对硫磷、毒死蜱、丁草胺、噻嗪酮等9种农药残留量检测的高效液相色谱-串联质谱联用方法。9种农药均能在10 min内检出。该方法便于操作、灵敏度、重现性良好, 回收率和精密度均符合残留检测要求。

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Fastsimultaneousdeterminationofninekindsofpesticidesincamelliaseedbyliquidchromatography-tandemmassspectrometry

LI Yuping1, SHE Jiarong1，2, TAN Lijuan1, DENG Hongbo1

(1.The Center of Hunan Forestry Administration for Forestry Produce Quality Inspection and Testing Changsha 410004, China; 2.Central South University of Forestry and Technology, Changsha 410004, China)

A method was developed for determining 9 pesticides residues in camellia seed using liquid chromatography tandem mass spectrometry. Samples were extracted with acetonitrile. Then, the upper supernatant was directly analyzed by LC — MS/MS on an Agilent SB — C18 column with a mixture of 4g/L formic acid ammonium solution (A) and acetonitrile (B) as mobile phase under gradient elution conditions. The mass spectrometer operated in multiple reaction monitoring (MRM) mode with the positive mode. There is a good linear correlation (all of the calibration coefficients are above 0.9990) between the peak areas and concentration of sixteen amide fungicides in the range of 0.001～0.5 mg/L. The average recoveries of 9 pesticides in camellia seed were 64.2%～114.1%. The relative standard deviations were between 1.2% and 9.4%. The method is demonstrated to be suitable for the determination of the 9 kinds of pesticides in camellia seed.

camellia seed; liquid chromatography with tandem mass spectrometry; residue

2015-08-11

国家林业公益性行业科研专项(201304705)。

O 657.63; S 565.4

A

1003 — 5710(2015)05 — 0046 — 04

10. 3969/j. issn. 1003 — 5710. 2015. 05. 011

(文字编校：龚玉子)