三阴与非三阴乳腺癌的临床病理特征及Ki-67表达的对比研究

张莹，任占平，张芫

三阴与非三阴乳腺癌的临床病理特征及Ki-67表达的对比研究

张莹，任占平，张芫

目的探讨三阴与非三阴乳腺癌的临床病理特征及Ki-67表达的差异。方法采用免疫组化Envision二步法检测226例乳腺癌患者雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（HER2）的表达，根据三者表达情况分为三阴组（n=41）和非三阴组（n=185），并采用免疫组化方法检测并比较2组组织中Ki-67阳性指数差异，以及2组不同临床病理特征分层Ki-67阳性指数差异。结果三阴组肿瘤大小及淋巴结转移率、Ki-67阳性指数均高于非三阴组（P＜0.05），2组不同的年龄、肿瘤大小、淋巴结状况及组织学分级的Ki-67表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论与非三阴乳腺癌比较，三阴乳腺癌的肿瘤体积更大、瘤细胞增殖活性更高、更易发生淋巴结转移，预后更差。

乳腺肿瘤；受体，雌激素；受体，表皮生长因子；孕激素受体；Ki67

乳腺癌发病率呈逐年上升趋势，2012年约有52万患者死于乳腺癌［1］。三阴性乳腺癌（TNBC）是雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2（HER2）均为阴性的乳腺癌亚型，内分泌和靶向治疗效果不明显［2］。Ki-67是细胞增殖的重要标记，常可作为预测恶性肿瘤发展及预后的指标。本研究旨在探讨三阴乳腺癌的临床病理特征及其与非三阴癌Ki-67表达的差异。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2011年5月—2013年11月于我院行手术切除的乳腺癌组织标本226例，年龄26～77岁，中位年龄50岁，组织学分级Ⅰ级16例，Ⅱ级163例，Ⅲ级47例。所有患者均经病理学证实为浸润性导管癌，行免疫组化检测时均未经放化疗。其中41例肿瘤组织ER、PR、HER2表达均为阴性（三阴组）。

1.2 方法鼠抗人ER、PR、HER2、Ki-67单克隆抗体购自福州迈新公司。所有患者标本均经10%福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋，连续4 μm切片，采用EnvisionTM二步法，参照试剂盒说明书用已知阳性片组织作阳性对照，阴性对照采用PBS代替一抗。

1.3 结果判定（1）ER、PR及HER2阳性判断标准。ER、PR阳性部位定位于细胞核，每张切片按着色细胞数＜1%为（-），≥1%为（+）。HER2阳性判断标准参照美国临床肿瘤学会/美国病理医师学院（ASCO/CAP）2013年公布的HER2检测指南：无细胞染色或≤10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色为（0）；＞10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜染色为（+）；＞10%的浸润癌细胞呈现不完整和（或）弱至中等强度的细胞膜染色，或≤10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色为（++）；＞10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜染色为（+++）。HER2免疫组化染色0或（+）被判定为阴性，（+++）被判定为阳性，（++）者用荧光原位杂交（FISH）进行验证，FISH结果阳性判定为阳性，相反则判定为阴性。（2）Ki-67阳性判断标准。阳性染色定位于细胞核，以任意5个高倍镜视野中所有肿瘤细胞的阳性细胞所占比例的平均值定义为Ki-67阳性指数。比较2组年龄、肿瘤大小、淋巴结转移及组织学分级上的差异，并比较2组组织中Ki-67阳性指数差异，以及2组不同临床病理特征中Ki-67阳性指数差异。

1.4 统计学方法采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析。不符合正态分布的计量资料以M（P25，P75）表示，组间比较用秩和检验。计数资料组间比较用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.12 组临床特征的比较2组肿瘤大小及淋巴结转移构成差异有统计学意义（P＜0.05），而年龄和组织学分级差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

Tab.1Comparion of clinical characteristics between two groups表1 2组临床特征比较（例）

2.22 组Ki-67表达病理情况比较Ki-67在2组中均有表达，三阴组Ki-67阳性指数高于非三阴组［40%（18%，60%）vs 10%（5%，30%），Z=4.340，P＜0.01］，见图1。

Fig.1Expression of Ki-67 in two groups（Immunohistochemistry Envision，×100）图1 2组Ki-67阳性表达情况（免疫组化Envision染色，×100）

2.32 组Ki-67阳性指数与年龄、肿瘤大小、淋巴结情况及组织学分级关系2组患者不同的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况及组织学分级的Ki-67表达差异均无统计学意义（P＞0.05），见表2。

Tab.2Comparison of Ki-67 expression between TNBC and NTNBC in two groups表2 2组不同临床参数中Ki-67表达的比较［%，M（P25，P75）］

3 讨论

Perou等［3］应用基因表达谱芯片技术对浸润性乳腺癌进行分析时提出了三阴乳腺癌的概念。三阴乳腺癌较其他类型乳腺癌具有发病年龄早［4］、侵袭能力强、高级别肿瘤为主、易局部复发和转移至其他器官、预后较差等特点，常见BRCA-1基因突变［5］，缺乏有效的治疗方案。三阴乳腺癌占全部乳腺癌比例不高。Stevens等［6］报道三阴乳腺癌所占比例大约为12%～24%。本研究226例乳腺癌患者中三阴乳腺癌占18.1%（41/226）。

肿瘤大小及淋巴结转移情况是三阴乳腺癌非常重要的临床病理参数，目前研究结果不尽相同。Wasuthit等［7］认为，随着乳腺癌肿瘤直径的增大，腋窝淋巴结转移率升高，肿瘤的大小是预测乳腺癌腋窝淋巴结转移独立、重要的影响因素。Iwase等［8］研究表明，三阴乳腺癌淋巴结转移率高于其他亚型。然而也有研究显示，三阴性乳腺癌患者肿瘤大小以及淋巴结转移的数量与非三阴乳腺癌患者无明显差别［9］。本研究结果显示，三阴组肿瘤直径＞2 cm、出现淋巴结转移比例均高于非三阴组，表明与非三阴乳腺癌相比，三阴乳腺癌患者具有肿瘤体积较大、淋巴结转移率高的特点。马吉光等［10］研究表明，发病年龄和组织学分级在三阴乳腺癌与非三阴癌2组间比较差异均无统计学意义。本研究与文献报道结果一致。但Liedtke等［4］研究认为，三阴乳腺癌发病年龄较早，考虑可能与地域、样本量及免疫组织化学结果判定标准不同有关，有待加大样本量进一步研究。

Ki-67是增殖细胞核抗原，与细胞增殖密切相关，处于各细胞周期的细胞均有Ki-67的表达，为一个较为真实反映细胞增殖的指标［11］。通常情况下，肿瘤细胞增殖状况可作为预测恶性肿瘤发展及预后的指标，同时Ki-67在乳腺癌组织中的表达也与临床病理特点及预后有一定的相关性。本研究结果显示，Ki-67在三阴组中的阳性指数高于非三阴组，提示三阴乳腺癌较非三阴者有更高的增殖活性，Ki-67的高表达可能是一个不良预后因素。本研究还发现，三阴组与非三阴组中Ki-67的表达与患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况及组织学分级均无关，这与周晓聪等［9］的报道相一致，提示Ki-67阳性指数主要与肿瘤局部的增殖相关，不能反映区域淋巴结的状态。

综上所述，三阴乳腺癌作为一个独特的乳腺癌亚型，与其他乳腺癌相比肿瘤体积更大、瘤细胞增殖活性高、易发生淋巴结转移，预后更差，目前尚无标准的治疗方案。但Daniel等［12］发现对三阴乳腺癌患者采用以铂类为主的新辅助化疗可获得相对于非三阴乳腺癌患者更高的完全缓解率。因此，笔者认为对乳腺癌组织进行ER、PR、HER2及Ki-67的检测，对其临床治疗方案的制定及预后判断有一定的参考价值。

［1］Colditz GA，Bohlke K.Priorities for the primary prevention of breast cancer［J］.CA Cancer J Clin，2014，64（3）：186-194.doi：10.3322/ caac.21225.

［2］Tian Y，Wang Y，Zhu KY，et al.Research progress on the relation⁃ship between metabolic syndrome and triple-negative breast cancer［J］.Tianjin Med J，2014，42（9）：953-956.［田垚，王毅，朱科云，等.代谢综合征与三阴性乳腺癌关系的研究进展［J］.天津医药，2014，42（9）：953-956］.doi：10.3969/j.issn.0253-9896.2014.09.030.

［3］Perou CM，Sorlie T，Eisen Mb，et al.Molecular portraits of human breast tumours［J］.Nature，2000，406（6797）：747-752.

［4］Liedtke C，Hess KR，Karn T，et al.The prognostic impact of age in patients with triple-negative breast cancer［J］.Breast Cancer Res Treat，2013，138（2）：591-599.doi：10.1007/s10549-013-2461-x.

［5］Carey L，Winer E，Viale G，et al.Triple-negative breast cancer：Dis⁃ease entity or title of convenience［J］？Nat Rev Clin Oncol，2010，7（12）：683-692.doi：10.1038/nrclinonc.2010.154.

［6］Stevens KN，Vachon CM，Couch FJ.Genetic susceptibility to triplenegative breast cancer［J］.Cancer Res，2013，73（7）：2025-2030.doi：10.1158/0008-5472.CAN-12-1699.

［7］Wasuthit Y，Kongdan Y，Suvikapakornkul R，et al.Predictive fac⁃tors of axillary lymph node metastasis in breast cancer［J］.J Med As⁃soc Thai，2011，94（1）：65-70.

［8］Iwase H，Kurebayashi J，Tsuda H，et al.Clinicopathological analyses of triple negative breast cancer using surveillance data from the Regis⁃tration Committee of the Japanese Breast Cancer Society［J］.Breast Cancer，2010，17（2）：118-124.doi：10.1007/s12282-009-0113-0.

［9］Zhou XC，Zhang YH，Wang OC，et al.Ki-67 expression in triple-neg⁃ative breast cancer［J］.Chinese Journal of General Surgery，2012，27（10）：848-849.［周晓聪，张筱骅，王瓯晨，等.Ki-67在三阴性乳腺癌组织中的表达［J］.中华普通外科杂志，2012，27（10）：848-849］. doi：10.3760/cma.j.issn.1007_631X.2012.10.02.

［10］Ma JG，Wang NJ，Yu WJ.Comparison of biological behavior be⁃tween triple-negative breast cancer and non-triple-negative breast cancer［J］.J South Med Univ，2011，31（10）：1729-1732.［马吉光，王宁菊，于文洁.“三阴”型与非“三阴”型乳腺癌患者的生物学行为差异性分析［J］.南方医科大学学报，2011，31（10）：1729-1732］. doi：CNKI：44-1627/R.20111003.1008.005.

［11］Liu H，Kong ZY，Zhang CH，et al.Significance of AgNOR analysis and the expression of Ki-67 in the precursor lesions of the breast carcinoma［J］.Chin J Exp Surg，2011，28（9）：1462-1463.［刘晖，孔昭燕，张长淮，等.核仁组成区嗜银蛋白及Ki-67在乳腺癌前驱病变中的意义［J］.中华实验外科杂志，2011，28（9）：1462-1463］. doi：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2011.09.022.

［12］Daniel PS，Andres L，Richardson AC，et al.Efficacy of neoadjuvant cisplatin in triple-negative breast cancer［J］.Clin Oncol，2010，28（7）：1145-1153.doi：10.1200/JCO.2009.22.4725.

（2014-12-28收稿2015-03-19修回）

（本文编辑陆荣展）

Comparison of clinical-pathological features and Ki-67 expression profile between triple-negative breast cancer（TNBC）and non-triple-negative cancer

ZHANG Ying，REN Zhanping，ZHANG Yuan
Department of Pathology，Liuzhou People′s Hospital，Guangxi Province，Liuzhou 545006，China

ObjectiveTo compare clinical-pathological features and Ki-67 expression profile between TNBC and Non-triple-negative cancer（NTNBC）.MethodsThe expressions of ER，PR and HER2 were examined by immunohisto⁃chemical Envision double staining in 226 cases of breast cancer.All cases were divided into triple-negative and non-triplenegative group according to expressions of these three episodes.And Ki-67 expressions in two groups were assessed by im⁃munohistochemical method.The difference of Ki-67 positive index between these two groups and the difference of Ki-67 positive index between different clinical-pathological features were both analyzed by comparative analysis.ResultsIn pa⁃tients with TNBC，tumor size，lymph node metastasis rate and Ki-67 index were all significantly higher than that in NTNBC. No significant difference in age and histological grade were detected between these two groups.The expression of Ki-67 was not significant correlated with age，tumor size，lymph node status and histological grade in these two groups.Conclusion Patients with triple-negative breast cancer were with larger tumor size，higher proliferation，more lymph node metastasis and poorer prognosis.

breast neoplasms；receptors，estrogen；receptor，epidermal growth factor；progesterone，receptor；Ki67

R737.9

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.08.018

广西柳州市人民医院病理科（邮编545006）

张莹（1979），女，主治医师、硕士，主要从事乳腺肿瘤病理相关研究