葛根螺旋藻复合片氨基酸组成与营养分析及解酒作用研究

杨生辉，罗光宏，祖廷勋，王丹霞，陈天仁

（河西学院凯源生物中心，甘肃省微藻工程技术研究中心，甘肃张掖734000）

葛根螺旋藻复合片氨基酸组成与营养分析及解酒作用研究

杨生辉，罗光宏*，祖廷勋，王丹霞，陈天仁

（河西学院凯源生物中心，甘肃省微藻工程技术研究中心，甘肃张掖734000）

利用氨基酸自动分析仪，对葛根螺旋藻复合片氨基酸组成进行了测定；采用氨基酸比值系数法、模糊识别法以鸡蛋蛋白质为标准蛋白，以WHO/FAO氨基酸参考模式为分析评价标准，对葛根螺旋藻复合片蛋白营养价值进行了全面分析评价；以小白鼠作为实验对象，以小白鼠醉酒后的行为学观察（醉酒和醒酒时间）为指标，对葛根螺旋藻复合片解酒功效进行了初步的实验研究。结果表明：葛根螺旋藻复合片中含有18种氨基酸，总含量为32.46%，蛋白质中氨基酸种类齐全，必需氨基酸（EAA）占总氨基酸量的37.22%，色氨酸为第一限制氨基酸，含硫氨基酸为第二限制氨基酸，氨基酸比值系数分为75.18～82.41；葛根螺旋藻复合片对乙醇急性中毒有显著的预防作用（p＜0.01），具有较为显著的解酒醒酒作用（p＜0.05），预防醉酒效果优于解酒醒酒效果（p＜0.01）。

葛根螺旋藻复合片，氨基酸组成，营养评价，解酒作用

螺旋藻（Spirulina）是迄今世界上发现的营养最均衡、最丰富的天然营养品，是国际生物学、营养学和医学界广泛关注的一种药食两用植物蛋白新资源［1］。螺旋藻被联合国粮食与农业组织（FAO）誉为人类未来最理想的食品，具有增强人体免疫力、抗疲劳、抗辐射、抗病毒、降血脂、降血糖、抗肿瘤等作用［2-4］。

葛根（Pueraria）是豆科植物野葛（Pueraria lobate（Willd）Ohwi.）或甘葛藤（粉葛）（Pueraria thomspiiBenth）的根或块状茎，卫生部卫法监发（［2002］）51号文件附件1公布了葛根既是食品又是药品，属药食两用植物［5］。葛根据本草纲目记载：气味甘、辛、平、无毒。主治消渴、身大热、呕吐、诸痹、起阴气、解诸毒［6］。中医认为，葛根味甘辛，性平无毒，具有生津止渴、清热解毒、解肌退热、滋阴壮阳、透疹、通便、解酒等功效［7］；能预防和治疗外感发热、急性肠炎、细菌性痢疾等暑天易发生的疾病［8］。具有抗自由基、抗氧化、抗癌和增强肌体的免疫力等功效，且无毒无害，对人类的肿瘤、衰老、心血管疾病的治疗和预防具有重要意义［9-10］。

葛根螺旋藻复合片以螺旋藻粉和葛根提取物为主要原料精制加工而成。目前国内外对葛根及葛根提取物解酒作用的研究较多，对将葛根提取物和螺旋藻粉制成复合片的解酒效果研究未见报道。本研究对葛根螺旋藻复合片蛋白营养价值进行了全面评价，对解酒效果进行初步的研究，探讨其防醉解酒的机理，为其申报解酒保健食品提供参考依据。

1　材料与方法

1.1材料与仪器

葛根螺旋藻复合片甘肃凯源生物技术开发中心，规格：0.2g/片，每片含蛋白质0.175g、葛根提取物0.02g、赋形剂0.005g；NIH小白鼠230只，6～8周龄，体重20g～25g，雌雄各半，购于兰州大学医学部动物中心；去离子水自制；丝路春头曲甘肃丝路春食品工业有限公司，酒精含量42%；其他试剂均为分析纯。

835-50型氨基酸自动分析仪日本日立公司。

1.2实验方法

1.2.1蛋白质与氨基酸组成测定实验粗蛋白测定采用凯氏定氮法（GB/T5009.5-2003）；氨基酸含量采用氨基酸自动分析仪测定。必需氨基酸含量（%）= E/［E+N（必需氨基酸量/总氨基酸量）］×100

1.2.2分析评价方法食物蛋白质营养价值的优劣，主要取决于所含必需氨基酸（essential amino acid，EAA）的种类、数量和组成比例［11］，因此本研究采用模糊识别方法［12］、氨基酸比值系数法［13］2种评价方法对葛根螺旋藻复合片中EAA展开综合分析和讨论。模糊识别方法利用数学模型，根据兰氏距离法定义对象ui和标准蛋白a的贴近度（closedegree）L（a，ui），即

常数C取0.09以使计算结果属于区间〔0，1〕，并能增加分辨度，有利于结果比较。由公式计算评价对象ui和标准蛋白a的贴近度，最后按贴近度大小顺序排列。

氨基酸比值系数法，利用WHO/FAO的必需氨基酸（含Cys和Tyr）模式，计算样品中EAA的氨基酸比（ratio of amino acid，RAA），氨基酸比值系数（ratio efficient of amino acid，RC）和比值系数（score of RC，SRC）。

RAA=待评蛋白质必需氨基酸含量（mg/g蛋白质）/［WHO/FAO模式中相应必需氨基酸（mg/g蛋白质）］

RC=RAA/RAA之均数。

1.2.3复合片悬浊液制备将葛根螺旋藻复合片用研钵磨碎，过60目筛，按1g复合片粉末加去离子水7mL，配制成悬浊液10mL（每mL悬浊液含0.1g复合片）。

1.2.4急性毒性实验取20～25g体重小白鼠60只，根据雌雄体重随机分成3组，雌雄各半，每组20只，灌胃给予复合片悬浊液，按小（0.014mL/只，相当于成人4g/60kg用量）、中（0.028mL/只，相当于成人4g/60kg用量的2倍）、大剂量（0.096mL/只，相当于成人4g/60kg用量的4倍），以死亡为指标，每天定时灌胃1次，观察24～72h，观察：瞳孔大小、呼吸深浅、唾液、分泌、呕吐等情况。

1.2.5饮用酒量的选择参照文献方法［14］，取小白鼠50只，根据雌雄体重随机分成5组，雌雄各半，每组10只。禁食12h后，各组分别以0、0.3、0.4、0.5、0.6mL/只给小白鼠灌胃饮用白酒，观察小白鼠醉酒率及死亡情况。小鼠醉酒标准［15］：小鼠背向下的姿势保持30s以上，则认为翻正反射消失，即为醉酒。

1.2.6抗乙醇急性中毒作用实验根据1.2.5实验结果，实验选择有小白鼠发生急性酒精中毒死亡的灌胃饮用白酒剂量。取小白鼠40只，根据雌雄体重随机分成2组，雌雄各半，每组20只。分别为：空白对照组和复合片受试组。禁食12h后，空白对照组灌胃蒸馏水0.014mL/只；受试组灌胃复合片悬浊液0.014mL/只。2组均在30min后以小白鼠发生急性酒精中毒死亡的灌胃饮用白酒剂量灌胃饮用酒，记录各组的死亡率。

1.2.7防醉效果实验防醉效果实验即先灌胃复合片再灌胃饮用酒。参照文献方法［14］，取小白鼠40只，根据雌雄体重随机分成2组，雌雄各半，每组20只。分别为：空白对照组和复合片受试组。禁食12h后，空白对照组灌胃蒸馏水0.14mL/只；受试组灌胃复合片悬浊液0.14mL/只。2组均在30min后灌胃1.2.5实验中小鼠醉酒的饮用酒剂量。记录各组的醉酒（翻正反射消失）和醒酒（翻正反射恢复）时间。

1.2.8醒酒效果实验醒酒效果实验即先灌胃饮用酒再灌胃复合片。分组方法同防醉实验，只是将2组先灌胃1.2.5实验中小鼠醉酒的饮用酒剂量，30min后空白对照组灌胃蒸馏水0.14mL/只；受试组灌胃复合片悬浊液0.14mL/只。记录2组的醒酒（翻正反射恢复）时间。

1.2.9统计分析应用SPSS11.5软件进行数据分析，各组数据以±sD的形式表示，组间采用t检验。

2　结果与分析

2.1氨基酸组成测定与蛋白质营养价值的分析评价

2.1.1氨基酸组成测定表1为葛根螺旋藻复合片蛋白中氨基酸组成。

通过表1中可以看出，葛根螺旋藻复合片中含有18种氨基酸，其中人体必需的8种氨基酸占总氨基酸量的37.22%，E/N（必需氨基酸/非必需氨基酸）=0.59，与WHO/FAO提出的E/E+N应为40%左右、E/N应为0.6左右的参考蛋白模式非常接近，说明葛根螺旋藻复合片是人体良好的蛋白源，能较好的满足人体需要。

在必需氨基酸中，亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸含量最多，质量分数占总量的55.1%。在非必需氨基酸中，天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和精氨酸含量最多，质量分数占总量的65.8%。天然蛋白质中的氨基酸都属于L型，L型的氨基酸及其盐大多具有酸味、甜味、苦味及鲜味［16］。谷氨酸、天门冬氨酸是复合片中藻类的主要鲜味物质，是复合片具有独特海藻腥鲜味的原因；谷氨酸具有健脑益智作用，有利于创伤机体的恢复；天门冬氨酸具有缓解疲劳的作用，还可用于治疗糖尿病［17］；精氨酸有利于伤口愈合，还具有解毒、恢复肝脏功能、提高精子活力和智商等作用［18-19］；赖氨酸是大脑神经细胞再生的第一限制性氨基酸缺乏影响大脑发育［16］；精氨酸、谷氨酸、脯氨酸影响胚胎成长、胎儿生存和发育［20］。说明葛根螺旋藻复合片是一种药用价值的功能性食品。

2.1.2模糊识别法评价利用模糊识别法的数学模型和公式，计算葛根螺旋藻复合片中蛋白相当于鸡蛋蛋白（标准蛋白）的贴近度，其计算结果为0.86，与谷物蛋白贴近度0.88相近，说明葛根螺旋藻复合片蛋白营养价值与鸡蛋蛋白的营养价值非常接近。但低于牛肉、羊肉蛋白贴近度0.98。

2.1.3氨基酸比值系数法评价根据氨基酸比值系数法，计算氨基酸氨基酸比值（RAA）和氨基酸系数（RC），结果见表2。

根据WHO/FAO提出的氨基酸平衡理论［21］，RC=1表示食物中氨基酸组成与氨基酸模式一致，RC＜1表示该氨基酸相对不足，RC＞1该氨基酸相对过剩，RC最小的第一限制氨基酸。通过表2中可以看出，葛根螺旋藻复合片中苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸与模式基本一致，苯丙氨酸+酪氨酸稍微过量，苯丙氨酸是体内合成甲状腺素的来源，可转变为酪氨酸；缬氨酸、色氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、赖氨酸相对不足，色氨酸为第一限制氨基酸，RAA值为0.37，含硫氨基酸为第二限制氨基酸，RAA值为0.57，经计算得氨基酸比值系数分75.18～82.41。说明葛根螺旋藻复合片不仅含有丰富的必需氨基酸，而且必需氨基酸之间的比例适宜，有利于人体吸收，是一种具有较高营养价值的功能性食品。根据蛋白质互补理论和含色氨酸、含硫氨基酸丰富的蛋白质按一定比例混合，可以提高其营养价值。

2.2葛根螺旋藻复合片解酒效果研究

2.2.1急性毒性实验结果见表3。结果可以看出：给小白鼠灌胃0.014～0.096mL/只，均无不良反应，说明葛根螺旋藻复合片没有毒性，是一种安全食品。

表1　葛根螺旋藻复合营养片蛋白中氨基酸含量（%）Table 1　Protein amino acids of Pueraria Extract Spirulina nutrition composite tablets（%）

表2　葛根螺旋藻复合片必需氨基酸含量与WHO/FAO评分模式比较（mg/g蛋白质）Table 2　Comparison essential amino acids with WHO/FAO scoring models in Pueraria Extract Spirulina nutrition composite tablets（mg/g protein）

表3　葛根螺旋藻复合片急性毒性实验Table 3　Acute and toxicity test of Pueraria Extract Spirulina composite tablets

表4　抗乙醇急性中毒作用实验Table 4　Anti-alcohol effect of acute poisoning text

2.2.2饮用酒量的选择实验结果表明：0.5mL/只以上剂量组即有小白鼠发生死亡；而0.4mL/只剂量使小白鼠呈现醉酒状态而又无小白鼠死亡，因此选择饮用酒量为0.4mL/只。

2.2.3抗乙醇急性中毒作用实验根据2.2.2实验结果，选择白酒灌胃剂量为0.5mL/只，结果见表4。结果表明：空白对照组小白鼠死亡率高达60%，事先灌胃葛根螺旋藻复合片的受试组小白鼠死亡率为20%，说明葛根螺旋藻复合片对乙醇急性中毒有明显的预防作用。高学清等［22］研究表明葛根提取物有保护体细胞免遭酒精伤害的作用，高景莘等［23］研究以葛根为主要成分的复方葛根散可降低小鼠急性酒精中毒死亡率，葛根螺旋藻复合片主要成分是葛根提取物和螺旋藻粉，这是其对乙醇急性中毒有明显的预防作用的主要原因。

2.2.4防醉效果实验结果见表5。结果表明：受试组从正常到醉酒时间比空白对照组延长了55.79%，而醒酒时间相比提前了12.65%。醉酒时间和醒酒时间二个指标处理组间均存在着明显的显著性差异（p＜0.01），说明了在饮酒前服用葛根螺旋藻复合片可以起到显著的防醉效果。这与李海涛等［14］关于葛根提取液有显著地防醉效果相符，只是在醉酒和醒酒时间上稍长，这与葛根提取物的用量相对较少有关。

表5　防醉效果实验Table 5　Effect of anti-drunk text

2.2.5醒酒效果实验只记录醒酒（翻正反射恢复）时间，结果见表6。结果表明：受试组的醒酒时间比空白对照组相显著缩短了9.07%（p＜0.05），说明葛根螺旋藻复合片有较明显的解酒醒酒作用。与李海涛等［17］、张恩户等［24］关于葛根提取液解酒功效研究结果相近。

表6　醒酒效果实验Table 6　Effect of sobering text

2.2.6防醉醒酒效果对比以小白鼠醒酒时间为指标，将醒酒效果实验与防醉效果实验相比较，结果见表7。结果表明：两组实验均缩短了小白鼠的醒酒时间。二者相比较，先药后酒组对小白鼠的醒酒作用更好，通过表7可以看出先药后酒组使正常到醉酒的时间显著延长，说明葛根螺旋藻复合片预防醉酒效果要优于解酒醒酒效果。

表7　防醉醒酒效果比较Table 7　Comparison of anti-drunk hangover

3　讨论

周吉银［25］、欧阳玉祝等［26］认为葛根总黄酮是葛根提取物中的主要有效成分，葛根素则是葛根总黄酮中的一种活性单体成分，两者均具有防醉酒、治醉酒和对抗酒精肝损伤等作用。朱振元等［27］研究认为葛根素对小鼠急性防醉解酒有较好的预防效果，葛根中其他异黄酮类物质与葛根素有相似的防醉解酒功效。Yu Wenli等［28］研究认为葛根总异黄酮要明显优于葛根素。王升贵等［29］认为葛根提取物的解酒作用均呈现量效关系，其作用机制可能与减少乙醇吸收和加速代谢降低乙醇的神经兴奋性减弱ALT活性有关。Zhang Rongrong等［30］实验证明了葛根提取物有抑制乙醇导致的肠道通透性增加，改善乙醇所导致的肠屏障功能紊乱的功能。Lee等［31］认为葛根水提物能通过促进脂质物质代谢和提高肝中抗氧化酶的活性，从而降低乙醇及其代谢物的危害。李海涛等［14］对葛根提取物解酒功效进行了实验研究，结果认为葛根提取物具有明显的解酒作用，其解酒机理主要是通过抑制乙醇肠胃吸收和加速乙醇降解代谢。葛根螺旋藻复合片以螺旋藻粉和葛根提取物为主要原料，复合片中添加了10%的葛根提取物，提取物主要成分是异黄酮类和黄酮类化合物；另外螺旋藻中含有丰富的氨基酸、维生素、藻多糖等生理活性物质，具有保肝护肝作用［32-33］。复合片具有预防醉酒和解酒醒酒效果，是葛根提取物和螺旋藻中生理活性成分共同作用的结果，但其解酒的机理尚需进一步研究探讨。

4　结论

葛根螺旋藻复合片蛋白质中氨基酸种类齐全，必需氨基酸占总氨基酸量的37.22%，色氨酸为第一限制氨基酸，含硫氨基酸为第二限制氨基酸，氨基酸比值系数分为75.18～82.41，是一种蛋白质营养价值较为均衡的、具有较高营养价值和药用价值的功能性食品。

葛根螺旋藻复合片对乙醇急性中毒有显著的预防作用，具有较为显著的解酒醒酒作用，预防醉酒效果要优于解酒醒酒效果，是一种具有解酒作用的新型营养食品。

［1］王文博，高俊莲，孙建光，等.螺旋藻的营养保健价值及其在预防医学中的应用［J］.中国食物与营养，2009（1）：48-51.

［2］HAYASHI K，HAYASHI T，MORITA N，et al.An extract from spirulina platensisis a selective inhibitor of herpes simplex virus type 1 penetration into HeLa cells［J］.Phytotherapy Research，1993，7（1）：76-80.

［3］IM H M，LEE E H，CHO H H，et al.Inhibitory effect of mast cell-mediatedimmediate-type all ergicreaction sinrats by Spirulina［J］.Biochem Pharmacol，1998，55（7）：1071-1076.

［4］罗光宏.高纬度高海拔地区螺旋藻生产工艺及免疫调节功能的测定［J］.食品科学，2003，24（6）：135-138.

［5］郑皓.葛根的研究与开发现状［J］.氨基酸和生物资源，2006，28（2）：24-26.

［6］苏中医学院.中药大辞典（下册）［M］.上海：上海科学技术出版社，1985：2307-2308.

［7］陈荔炟，陈树和，刘焱文.葛根资源化学成分和药理作用研究概况［J］.时珍国医国药，2006，17（11）：2305-2306.

［8］唐春红，陈琪.国内外葛根营养保健功能的研究与开发现状［J］.中国食品添加剂，2002（6）：56-58.

［9］LU Y R，FOO Y L.Antioxidant activities of polyphenols from sage（Salviaofficinalis）［J］.Food Chemistry，2001，75：197-202.

［10］DU XF，JIA JH，XU SY，et al.Molecular structure ofstarch from Pueraria lobata（Willd.）Ohwi relative to kuzu starch［J］. Starch，2007，59（12）：609-613.

［11］佩里特P L，杨V R主编.蛋白质营养评价［M］.范文询，李泽英，赵熙和译.北京：人民卫生出版社，1984：5-58.

［12］吴望明，陈永义，黄金丽，等.应用模糊及方法［M］.北京：北京师范大学出版社，1985：26-28.

［13］叶圣陶，吴坤.蛋白质营养评价-氨基酸比值系数法［J］.营养学报，1998（10）：187-190.

［14］李海涛.葛根有效成分的提取工艺及其解酒功效的研究［D］.哈尔滨：东北农业大学，2006.

［15］童妍，李锐，吴晓青.荆防败毒散加减对急性酒精中毒小鼠的解酒作用［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（21）：221-223.

［16］林香信，颜孙安，钱爱萍，等.花鳗鲡鱼体肌肉的氨基酸分析研究［J］.中国农学通报，2012，28（29）：131-136.

［17］陈宗礼，贺晓龙，张向前，等.陕北红枣的氨基酸分析［J］.中国农学通报，2012，28（34）：296-303.

［18］Khatri Sumita B.Arginine metabolism and airflow obstruction inasthma［R］.11th International Congress on Amino Acids，Peptides and Proteins，Amino Acids，2009，37：73.

［19］Hurson M，Regan M C，Kirk D，et al.Metabolic effects of argininein a healthy elderly population［J］.JPEN，1995（19）：227-232.

［20］Guoyao Wu，Fuller W Bazer.Spencer Amino acid nutrition and fetalgrowth［A］.11th International Congress on Amino Acids，Peptides and Proteins［C］.Amino Acids，2009，37：S6.

［21］WHO/FAO.Energy and protein requirements［J］.FAO Nutrition Meeting Report Series，1973：52-63.

［22］高学清，汪何雅，钱和，等.葛根和葛花对急性酒精中毒小鼠发的解酒作用［J］.食品与生物技术学报，2012，31（6）：621-627.

［23］高景莘，余涛.复方葛根散对急性酒精中毒小鼠的解酒作用研究［J］.成都中医药大学学报，2010，33（2）：74-76.

［24］张恩户，赵勤，梁作峰，等.葛根总黄酮解酒作用的实验观察［J］.陕西中医学院学报，1995，18（3）：38.

［25］周吉银，周世文.葛根总黄酮及葛根素解酒的药理研究进展［J］.中国医院药学杂志，2007，27（9）：1280-1282.

［26］欧阳玉祝，朱露，李雪峰.响应面优化葛根总黄酮的钙离子沉淀分离工艺［J］.食品科学，2014，35（4）：35-38

［27］朱振元，薛婧，刘晓翠，等.葛根素及葛根异黄酮对小鼠急性醉酒预防和解酒效果的研究［J］.食品科学，2014，35（15）：247-250.

［28］YU Wenli，ZHAO Yaping，SHU Bo.The radical scavenging activities of radix puerariae isoflavonoids：a chemiluminescence study［J］.Food Chemistry，2004，86（4）：525-529.

［29］王升贵，黄静，王张，等.松花葛根片解酒作用的量效关系和机制研究［J］.中药药理与临床，2014，30（4）：110-113.

［30］ZHANG Rongrong，HU Yiyang，YUAN Jianye，et al.Effects ofPuerariaeradixextractontheincreasingintestinal permeability in rat with alcohol-induced liver injury［J］.Journal of Ethnopharmacology，2009，126（2）：207-214.

［31］LEE J S.Supplementation of Pueraria radixwater extract on changes of antioxidant enzymes and lipid profile in ethanoltreated rats［J］.Clinica Chimica Acta，2004，347：121-128.

［32］万顺康，陈兴荣，马态敏，等.复方螺旋藻片对小鼠实验性肝损伤的影响［J］.时珍国医国药，2002，13（4）：193-194.

［33］张秀.螺旋藻预防抗结核药物肝损害的临床疗效观察［J］.河南预防医学杂志，2002，13（6）：375-375.

Study on amino acid components nutritional analysis and anti-inebriation effects of puerarin spirulina compound tablets

YANG Sheng-hui，LUO Guang-hong*，ZU Ting-xun，WANG Dan-xia，CHEN Tian-ren
（Kai-yuan Biotechnology Center Hexi University，Gansu Engineering Research Center for Microalgae，Zhangye 734000，China）

Amino acid composition of puerarin spirulina compound tablets was determined by automatic amino acid analyzer.Protein nutritional value of amino acid composition of puerarin spirulina compound tablets was carried on the comprehensive analysis and evaluation to the egg protein as standard protein，by WHO/FAO reference model for the analysis and evaluation standard by the amino acid ratio coefficient method and fuzzy recognition method.Taking mouse as experimental material，the preliminary experiment of anti-inebriation of puerarin spirulina compound tablets was studied with mouse drunken behavior observation（drunken and sober）as an index.The results showed that puerarin spirulina compound tablets contained 18 kinds of amino acid，total content of 18 kinds of amino acid was 32.46%.Type amino acids in the protein was complete. Essential amino acid（EAA）accounted for 37.22%of total amino acid content.The first limiting amino acid was tryptophan.The second limiting amino acid was sulfur amino acids.Amino acid ratio coefficient was divided into 75.18～82.41.Puerarin spirulina compound tablets to ethanol acute poisoning had significant preventive effect（p＜0.01）.Puerarin spirulina compound tablets had a more significant role in solution wine decanter（p＜0.05）.Puerarin spirulina compound tablets was better than the solution wine decanter prevention drunk effect（p＜0.01）.

puerarin spirulina compound tablets；amino acid components；nutritional evaluation；anti-inebriation

TS207.3

A

1002-0306（2015）12-0332-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.12.062

2014-09-11

杨生辉（1976-），男，硕士，副教授，研究方向：特色农产品加工及螺旋藻生产与产品开发。

罗光宏（1965-），硕士，教授，研究方向：植物资源利用与产业化开发。

2013年甘肃省科技支撑计划（1304FKCG103）；2014年甘肃省高等学校科研项目（2014A-109）；河西学院校长基金项目（XZ2011-08）；2014年甘肃省农业领域知识产权优势企业培育项目（14OPIPG002）。