高效液相色谱法检测盐酸度洛西汀肠溶胶囊中α-萘酚杂质

隋海山，戚威，王立娟

（1.山东省潍坊市食品药品检验检测中心，山东潍坊261041；2.山东省潍坊市红十字中心血站，山东潍坊261041）

高效液相色谱法检测盐酸度洛西汀肠溶胶囊中α-萘酚杂质

隋海山1，戚威1，王立娟2

（1.山东省潍坊市食品药品检验检测中心，山东潍坊261041；2.山东省潍坊市红十字中心血站，山东潍坊261041）

目的建立测定盐酸度洛西汀肠溶胶囊中α-萘酚杂质含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法采用岛津-GL Inertsil CN-3液相色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈-正丁醇-磷酸缓冲液（13∶17∶70），流速为1.0 mL/min，检测波长230 nm，柱温为40℃。结果α-萘酚含量在8×10-4～8×10-3μg范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.997 6），平均回收率为99.08%，RSD为0.89%（n=12）。结论该方法专属性强、耐用性好、准确度高，可以控制盐酸度洛西汀肠溶胶囊中α-萘酚的含量。

高效液相色谱法；盐酸度洛西汀；α-萘酚；含量测定

高效液相色谱（HPLC）法是目前药物分析中常用的色谱分离、分析技术，具有较高的分析速度及分离效率，且具有检测灵敏度较高、适用测定范围广、样品处理操作简单、回收率高等特点。随着现代质谱、核磁共振波谱等色谱技术的日益成熟及色谱联用技术的发展，HPLC法在药物制剂分析中的应用越来越广泛［1-2］。因此，笔者通过建立HPLC法对盐酸度洛西汀肠溶胶囊中所含有的特殊杂质α-萘酚进行分离分析，控制药物中杂质α-萘酚的含量，以减少药物中所含杂质对人体造成的损害。

1　仪器与试剂

Aglient 1260型高效液相色谱仪（安捷伦<中国>科技有限公司）；DZF-150型恒温真空干燥箱（郑州长城科工贸有限公司）；KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；PT25S型电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；ZF-20C型暗箱式紫外分析仪（上海和勤科学分析仪器有限公司）；BSZ-160F型电脑自动部分收集器（上海精科实业有限公司）。200～300目柱层析硅胶（青岛海洋化工厂）；230～400目柱层析硅胶（青岛海洋化工厂）；薄层层析硅胶GF254（青岛海洋化工厂）。乙腈色谱纯（天津市大茂化学试剂厂）；正丁醇色谱纯（天津市大茂化学试剂厂）；磷酸分析纯（天津市大茂化学试剂厂）；一水己烷磺酸钠分析纯（中国山东东营市新旺化工有限责任公司）；盐酸度洛西汀对照品（欧洲药品质量管理局，批号为Y0001453）；盐酸度洛西汀系统适用性对照品（欧洲药品质量管理局，批号Y0001454）；盐酸度洛西汀肠溶胶囊（市售品，批号为120801，120802，120803）；盐酸度洛西汀肠溶胶囊对照品（美国EliLilly公司，批号为A858915D）；α-萘酚对照品（美国EliLilly公司，批号为43040901）

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：岛津-GL InertsilCN-3柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-正丁醇-磷酸缓冲液（13∶17∶70）；流速：1.0mL/min；检测波长：230nm；柱温：40℃；进样量：20μL。理论板数不低于2000。

2.2溶液制备

精密称取盐酸度洛西汀对照品10mg，溶解于适量流动相中，100mL容量瓶定容，摇匀即得对照品贮备液，4℃条件下保存备用。

2.3方法学考察

专属性试验：取本试验所用原辅料，将其用洗脱液稀释至一定浓度；取适量盐酸度洛西汀对照品，用同样的方法将其配制成0.2 g/L的待用液；取试验所选用的α-萘酚对照品适量，用洗脱液将其配制成0.4μg/mL的待用液；取上述待用液各10μL，注入液相色谱仪测定并记录色谱图，见图1。结果表明，药品辅料与药品中其他杂质分离效果很好，对α-萘酚的含量测定无干扰。在拟订色谱条件下，盐酸度洛西汀测定结果表明，盐酸度洛西汀与杂质f的分离度r=2.33，拖尾因子T=1.14；与杂质c的分离度r=2.76；盐酸度洛西汀有效板数n=821 5，证明该HPLC分离系统具有较好的适用性。

线性关系考察：取适量（约16 mg）α-萘酚对照品，置20 mL容量瓶中，将其用洗脱液定容至刻度、摇匀；用移液枪精密量取上述配制液1mL，将其置100mL容量瓶中用洗脱液定容。分别用精密量取仪器量取该溶液2，5，10，15，20mL，并将量取试液分别于200mL容量瓶中用洗脱液定容，配制一系列待测液。在上述色谱条件下，用精密仪器分别量取10μL上述溶液，对其分别进行色谱分析，并记录其色谱图。以α-萘酚进样量（W）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进行线性回归。结果表明，α-萘酚进样量在8×10-4～8×10-3μg（r=0.9976）范围内与峰面积呈良好线性关系。

重复性试验：取同一样品，依法制备待测液6份，按拟订色谱条件进样分析。结果，样品中α-萘酚含量的RSD=0.64%（n=6），表明方法重复性良好。

精密度试验：按照2.2项下方法制备供试品溶液和对照品溶液，然后由不同人员在不同色谱仪上测定，每人测定6份，对12份试验数据进行统计学分析。结果的RSD=0.475%（n=12），表明仪器精密度良好。

检测限确定：将适量的α-萘酚对照品溶解于流动相中，将所得溶液逐级稀释，分别取20μL，按上述色谱条件进样测定。当信噪比S/N=3时，对照品检测限为0.013 ng。

图1　高效液相色谱图

回收试验：分别精密量取16，20，24mg的α-萘酚对照品，每次各量取4份，置100mL容量瓶中定容，并按处方量设置空白辅料对照组；精密量取2mL上述制备溶液，于10mL容量瓶中用洗脱液定容。精密量取1mL上述溶液，于100 mL容量瓶中用试验用洗脱液定容至刻度，摇匀过滤即得供试品溶液，对其进行色谱分析；同时根据样品中α-萘酚的含量及限度确定对照品的加入量，以保证结果的准确性。结果见表1。

表1　α-萘酚回收试验结果（n=12）

2.4样品中有关物质检测

将3批盐酸度洛西汀肠溶胶囊及盐酸度洛西汀肠溶胶囊对照品制备的供试品溶液各10μL分别注入液相色谱仪中，应用峰面积与校正因子计算α-萘酚的含量，应用峰面积归一化法计算药品中其他杂质的含量。结果见表2。

表2　盐酸度洛西汀中相关物质含量测定结果

3　讨论

盐酸度洛西汀肠溶胶囊是目前具有口服活性的新型高效抗抑郁治疗药物，由美国Eli Lilly公司研发。度洛西汀对5-轻色胺（5-HT）及去甲肾上腺素（NE）具有双重抑制作用，不仅可发挥抗抑郁作用，且对改善抑郁症患者的躯体症状也有特殊作用。但盐酸度洛西汀中所含α-萘酚是具有较强生理毒性的一类杂质，经口服或皮肤接触吸收均能引起中毒反应，因此对α-萘酚进行限量检查十分必要。

查阅盐酸度洛西汀制剂中主药含量及杂质限量检查的HPLC法相关文献［3］发现，均未考察盐酸度洛西汀中所含有的特殊杂质α-萘酚。为保证其长期用药的安全性和有效性，参考美国药典及国家食品药品监督管理总局规定，拟建立一种专属性强、耐用性好、准确度高，能有效检测盐酸度洛西汀药物制剂中α-萘酚含量的HPLC法［4-5］。

本试验中以相关文献报道设计HPLC分析试验［6］，对所用色谱条件作了适当改变，如更换不同型号的色谱柱、改变色谱柱柱温、改变流动相流速，甚至也可更改供试品的过滤次数。本试验结果显示，该HPLC法的耐用性良好。盐酸度洛西汀在空气、强酸以及湿热条件下稳定性较低，易降解变质，而在强碱、高温以及光照条件下则具有相对较高的稳定性［7-8］。本试验专属性试验显示，盐酸度洛西汀所有降解产物与度洛西汀的分离度R≥1.5。故本试验设计的HPLC法具有系统适用性高、精密度好、专属性强等优点。

［1］伍蔚萍，张静雯.HPLC法测定1-氟萘中1-萘胺杂质的含量［J］.北方药学，2015，12（5）：7.

［2］白梓静.高效液相色谱在中药含量测定中的应用［J］.分析仪器，2014，6（2）：8-11.

［3］杨奇珍，叶东，李聚江.HPLC法测定盐酸度洛西汀肠溶微丸胶囊的含量和有关物质［J］.中国药事，2011，25（9）：922-924.

［4］王鹏，胡红晓，石泰璐.盐酸度洛西汀的含量及其有关物质的RP-HPLC测定法［J］.职业与健康，2013，29（10）：1 223-1 225.

［5］周宏艳，罗斌，王菁.高效液相色谱法测定盐酸度洛西汀肠溶胶囊中α-萘酚杂质含量［J］.中国药业，2015，24（11）：53-54.

［6］陈英红，罗浩铭，王颖，等.HPLC法建立人参糖肽注射液特征图谱的研究［J］.药物分析杂志，2014，34（2）：360-363.

［7］黄文姝，董爱军，金红雨，等.HPLC法测定盐酸度洛西汀的有关物质［J］.实用药物与临床，2011，14（3）：234-235.

［8］周慧民，韦德会.度洛西汀与西酞普兰治疗抑郁症的最小成本分析［J］.中国药业，2013，22（13）：39-41.

R927.2；R971+.43

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1006-4931（2015）24-0156-03

2015-07-23）