甲氧苄啶与58种中药联用抗菌增效作用的研究

吴梅梅　常明向.湖北省中医院药事部，湖北武汉43006；2.湖北中医药大学临床医学院，湖北武汉43006

甲氧苄啶与58种中药联用抗菌增效作用的研究

吴梅梅1常明向2▲
1.湖北省中医院药事部，湖北武汉430061；2.湖北中医药大学临床医学院，湖北武汉430061

目的系统研究甲氧苄啶（TMP）对具抗菌作用中药的抗菌增效作用。方法选择58种不同功效种类中药，采用琼脂稀释法分别对中药、TMP、中药联用TMP抗菌作用进行研究。结果除五倍子外，TMP对所研究的单味中药基本上均有抗菌增效作用，但对不同中药、不同菌种增效强度有所不同。总体上，对金葡菌、水弧菌增效作用较强，对铜绿假单胞菌增效作用较弱。大多数中药对铜绿假单胞菌无抗菌作用，与TMP联用后大多显示出与TMP相当或增强的抗菌作用。补益类中药与TMP联用后，抗菌增效作用增幅较大。结论TMP对所研究的57种中药具抗菌增效作用。

甲氧苄啶；中药；抗菌增效

甲氧苄啶（TMP）属抑菌剂，它能大幅度地增强磺胺类药物的效力，故其有磺胺增效剂之称。甲氧苄啶和其他抗生素配伍也能更好地发挥抗生素的杀菌或抑菌作用，同样能起抗菌增效的效果［1-5］。

随着对中药抗菌作用研究的深入，人们发现中药中有多种品种体外对多种致病菌有杀灭或抑制作用，但临床效果并不佳；究其原因，其一是中药抗菌效能不够，笔者曾比较研究中西抗菌作用，发现1 g菌得治抗菌作用相当于3 kg左右黄连的作用［6］；其二可能是中药中抗菌有效成分在体内的血药浓度及持续时间不够所致，由于中药使用最大剂量的限制，靠增大剂量来增加体内血药浓度往往难以如愿，如《中国药典》2010年版所载黄连常用剂量为3～5 g。

为了增强中药对细菌性疾病的治疗效果，方法之一是在中医药理论指导下运用某些西药，即西药中药化；方法之二是将某些西药（如TMP）与中药伍用，取其相互增效减毒作用。近年来，TMP与中药伍用进行增效作用研究也有不少报道［7-12］，结果均是TMP对中药抗菌增效作用明显。笔者曾采用琼脂稀释法对比研究了黄连、香连丸、五味消毒饮与TMP联用对5种不同细菌的体外抗菌增效作用，结果TMP对黄连及其复方均有抗菌增效作用。为进一步系统、深入、广泛地研究TMP与中药联用抗菌增效情况，本研究从具抗菌作用的中药中，选择有代表性的不同功效种类58种中药进行系统研究，现将研究结果报道如下：

1　材料与仪器

1.1仪器

XSW-CJ-2A标准型净化工作台（吴江市津化设备总厂）；LRH-250A生化培养箱（广东省医疗器械厂）；LMQR-4060型立式灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司）。

1.2培养基

MH琼脂培养基（江门市凯琳贸易有限公司）；营养肉汤（广东环凯微生物科技有限公司）。

1.3菌株

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、水弧菌，以上菌种购置于武汉大学微生物典藏中心。

1.4样品配制

1.4.1中药解表药：麻黄（5 g），桂枝（5 g），桑叶（7.5 g），菊花（5 g），野菊花（5 g）。清热药：知母（5 g），夏枯草（7.5 g），栀子（5 g），大青叶（7.5 g），紫草（5 g），赤芍（5 g），丹皮（5 g），黄连（2 g），黄芩（5 g），黄柏（5 g），苦参（5 g），金银花（5 g），连翘（5 g），蒲公英（15 g），紫花地丁（7.5 g），马齿苋（7.5 g），穿心莲（2.5 g），天葵子（5 g），地骨皮（7.5 g），胡黄连（5 g）。泻下药：大黄（5 g）。利水渗湿药：车前草（5 g），木通（5 g），茵陈（15 g），金钱草（15 g）。化湿药：厚朴（5 g）。祛风湿药：威灵仙（5 g），虎杖（7.5 g）。理气药：枳实（5 g），乌药（5 g），旋覆花（5 g）。活血化瘀药：丹参（7.5 g）。止血药：地榆（5 g），仙鹤草（7.5 g）。消食药：山楂（5 g）。止咳平喘药：紫菀（5 g）。祛寒药：高良姜（5 g）。安神药：远志（2.5 g）。补虚药：黄芪（5 g），甘草（5 g），当归（5 g），何首乌（7.5 g），白芍（5 g），仙茅（5 g），山茱萸（5 g），天冬（5 g）。收敛药：诃子（5 g），五倍子（1.5 g）。外用药：雄黄（0.5 g），硼砂（1.5 g），明矾（1.5 g），硫磺（1.5 g），儿茶（1.5 g）。以上药物均取自湖北省中医院中药房，经张跃军主任药师鉴定为正品后进行试验。以上药物抗菌试验时按各药物名后括号中剂量进行，该剂量为《中国药典》2010年版所载剂量的一半。以上每种中药分别常规煎煮浓缩成50mL。取10 mL浓缩成浸膏状，加入无菌普通肉汤培养基10 mL，微热使溶，摇匀即得各种中药供试药液。

1.4.2 TMP称取TMP100mg于试管中，加入肉汤10mL，微热使溶，摇匀即得TMP供试药液。

1.4.3中药+TMP复方取上述每种中药煎剂10mL浓缩成浸膏状，再加入TMP 100mg及肉汤培养基10mL，微热使溶摇匀即得含中药+TMP复方供试药液。

2　方法与结果

2.1药液的稀释

无菌试管3排，每排15管，除每排的第14管外，其余各管中均加入无菌普通肉汤培养基5 mL，然后于每排试管的第1管分别加入上述每种中药3种供试药液5mL，混匀，吸出5mL加至第2管中，同法依次稀释至第13管，混匀后取出5mL于第14管中。每排第14管作无菌阴性对照管，第15管作无药阳性对照管。然后于各管中加5mL热无菌肉蛋白胨琼脂，摇匀，趁热依次倾入到同一型号的无菌培养皿中，放置使琼脂冷凝。药物倍比稀释倍数依次为1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048倍。

2.2菌液的加入

除14号培养皿外，1～15号培养皿分别划分为5个近等的区域，并分别编号，然后在每个区域中分别加入5种经16 h培养的各含菌培养液0.01 mL，37℃培养18～24 h。

2.3结果判断

以细菌的生长有无为判断指标，观察细菌培养结果。具抗菌作用（-）指接种区光滑无可见菌落，无抗菌作用（+）指接种区可见较多细菌生长。1～11管药物稀释倍数依次为原浓度的1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048。药物稀释倍数越大表示药物最小抑菌（MIC）浓度越小，抗菌作用越强。因药物种类较多，为方便直观比较，抗菌作用强度结果以具抗菌作用（-）最大药物稀释倍数表示。0：表示第1管（1/2倍原浓度）即无抗菌作用。结果见表1、2。

3　讨论

本研究所采用琼脂稀释法是在传统实验方法基础上加以改进而成。传统方法一次只能进行一种细菌的抗菌实验，而改进后的方法一次可同时进行多种细菌的抗菌实验，大大提高实验效率，而且操作简便、快捷，干扰因素少，重复性好，结果更准确，可比性更强。结果表明，在本实验条件下，不同中药抗菌作用强度不同。常用的清热解毒中药如黄连、黄芩、黄柏、苦参、金银花、连翘、蒲公英、紫花地丁、马齿苋、穿心莲等抗菌作用强度并不强，反而补益类药中的山茱萸、收敛药中的诃子、外用药中的硼砂及明矾显示出有较强的抗菌作用。TMP与不同功效种类的57种单味中药联用研究表明，TMP对所研究的单味中药基本上均有抗菌增效作用，但对不同中药、不同菌种增效强度有不同。

总体上，对不同菌种而言，对金葡菌、水弧菌增效作用较强，对铜绿假单胞菌增效作用较弱。在本实验条件下，大多数中药对铜绿假单胞菌无抗菌作用，而TMP有一定的作用，中药与TMP联用后大多显示出与TMP相当或增强的抗菌作用，这些中药与TMP联用后客观上增强了这些中药的抗菌作用。

补益类药中除山茱萸外，黄芪、甘草、当归、何首乌、白芍、仙茅、天冬的抗菌作用均较弱，但与TMP联用后，抗菌作用增幅较大。外用药中硼砂、明矾、儿茶具有较强的抗菌作用，雄黄、硫磺作用较弱，但与TMP联用后，抗菌作用均增强。外用药常直接用于创面，与体内影响因素无关，如与TMP联用将直接有益于提高中药临床疗效。

表1　 TMP（100 m g）与大黄（1 g）联用抗菌作用结果（药物稀释倍数）

表2　 TMP与各中药联用抗菌作用结果（药物最大稀释倍数）

（续表2）　表2 TMP与各中药联用抗菌作用结果（药物最大稀释倍数）

目前，中药与TMP联用研究大多是进行体外抗菌实验研究［13］，体内研究报道不多。笔者曾将TMP与小儿止泻灌肠液联用进行小鼠体内研究［14］，结果联用TMP后对小鼠保护作用明显增强。还曾将TMP与小儿止泻灌肠液联用治疗菌痢进行初步临床疗效观察，中药小儿止泻灌肠液对照组6例，TMP与小儿止泻灌肠液联用组12例，用药3 d，结果联用TMP后治疗作用大幅增强。韩铁锁［15］研究表明中药增效抗菌复方具有较强的清热解毒和杀菌作用，还可增强机体免疫力。增强机体免疫力是中药体内发挥抗菌作用的主要机制之一，但在机体感染期，体内病菌大量存在，只靠增强机体免疫力是不够的，因中药直接杀菌作用明显弱于抗生素，结果是中药抗菌预防效果明显优于治疗效果。孙怀刚等［12］进行了中药增效抗菌复方对人工诱发鸡大肠埃希菌病的疗效试验，结果中、高剂量的中药增效抗菌复方与环丙沙星的治疗效果相当，间接证明中药增效抗菌复方也具有较强的杀菌作用。

当前，市场上将TMP与中药联用相关的产品只有增效黄连素片，TMP与中药联用的应用很少。不过从笔者及其他科研工作者所进行的TMP与中药联用的研究结果看，如果将TMP广泛引入到中药的基础及临床应用中，加强体内及临床应用研究，进行科学的联合应用，取长补短，相信将会增强中药的抗菌作用强度，提高中药在细菌性疾病领域的作用。

（续表2）　表2 TMP与各中药联用抗菌作用结果（药物最大稀释倍数）

［1］高新富，魏传梅，徐彦飞，等.增效磺胺嘧啶银混悬剂体外抑菌效果与临床疗效观察［J］.实用医学杂志，2013，29（2）：308-309.［2］黄丽萍.利福平与甲氧苄氨嘧啶治疗变形杆菌肠炎临床观察［J］.航空航天医学杂志，2012，23（11）：1334-1335.

［3］郭丽华，刘在青，肖建森，等.复方土青注射液制备方法及疗效试验［J］.山东农业科学，2012，44（2）：101-103.

［4］陈玉华.头孢羟氨苄甲氧苄啶分散片的含量测定研究［J］.海峡药学，2010，22（8）：70-73.

［5］王桂梅.甲氧苄啶联合抗痨药物用于淋巴结核性溃疡换药的疗效分析［J］.中国当代医药，2012，19（29）：70-74.

［6］常明向，李良长，黄传俊，中西抗菌作用比较研究［J］.中华实用中西医杂志，2001，20，（1）：1831-1832.

［7］王新，崔一酷，邵红，等.甲氧苄啶对蒲公英体外抗菌增效作用的研究［J］.中国畜牧兽医，2010，37（2）：169-171.

［8］王新，崔一醅，韩铁锁.甲氧苄啶对黄芩苷体外抗菌增效作用的试验［J］.中国兽医杂志，2010，46（11）：69-70.

［9］王新，崔一酷，邵红.甲氧苄啶对连翘体外抗菌增效作用的研究［J］.黑龙江八一农垦大学学报，2011，23（4）：30-32.

［10］崔一酷，王新，韩铁锁.甲氧苄啶对金银花体外抗菌增效作用及量效关系的试验［J］.中国兽医杂志，2010，46（8）：60-62.

［11］崔一酷，王新，韩铁锁.甲氧苄啶对白头翁体外抗菌增效作用及量效关系的试验［J］.中国兽医杂志，2010，46（9）：44-46.

［12］孙怀刚，王新，崔一晶，等.中药增效抗菌复方对人工诱发鸡大肠杆菌病的疗效试验［J］.东北农业大学学报，2011，42（3）：86-89.

［13］郑铁锁.甲氧苄啶对中药抗茵增效作用研究进展［J］.中国兽医杂志，2012，48（5）：68-69.

［14］涂可斌，常明向，刘浩.甲氧苄氨嘧啶对小儿止泻灌肠液增效作用研究［J］.亚太传统医药，2012，8（3）：42-43.

［15］韩铁锁.TMP对中药抗菌增效作用及其复方对免疫功能影响的研究［D］.大庆：黑龙江八一农垦大学，2009.

Study on the antibacterial synergistic effect of 58 kinds of traditional Chinesemedicine com bined w ith Trim ethoprim

WUMeimei1CHANGMingxiang2▲
1.Department of Pharmaceutical Affairs，Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hubei Province，Wuhan 430061，China；2.School of Clinical Medical，Hubei University of Chinese Medicine，Hubei Province，Wuhan 430061，China

Objective To study the antibacterial synergistic effect of 58 kinds of traditional Chinese medicine（TCM）combined with Trimethoprim（TMP）systematically.Methods The 58 kinds of TCM were selected according to their types of efficacy and antibacterial effects，then the agar dilutionmethod was adopted to compare the antibacterial effect between TCM，TMP and TCM+TMP.Resu lts Except Gallnut，the result showed that TMP could mainly increase the antibacterial effects of TCM on 6 kinds of germs，but synergistic effect different on different kind of TCM and germ.As a whole，synergistic effect was stronger on Staphylococcus aureus and Vibrio aquatilis and weaker on Pseudomonas aeruginosa.Most of TCM had no antibacterial effect on Pseudomonas aeruginosa，after combined with TMP，their effects against Pseudomonasaeruginosawere increased orequivalent to TMP.Thesynergistic extentoftonic classChinesemedicine were increased largely when combined with TMP.Conclusion TMP posses synergistic effects on 57 kinds of TCM.

Trimethoprim；Traditional Chinesemedicine；Antibacterial synergistic effect

S853.7

A

1673-7210（2015）05（a）-0027-06

2015-01-02本文编辑：卫轲）