高效液相色谱法测定小儿胃宝咀嚼片中熊果酸含量

杜小英，姜锦花，宋愿智，马东卫

（1.陕西方舟制药有限公司，陕西西安710075；2.陕西省食品药品检验所，陕西西安710065）

高效液相色谱法测定小儿胃宝咀嚼片中熊果酸含量

杜小英1，姜锦花1，宋愿智2，马东卫1

（1.陕西方舟制药有限公司，陕西西安710075；2.陕西省食品药品检验所，陕西西安710065）

目的建立测定小儿胃宝咀嚼片中熊果酸含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱为KromasilODSC18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-甲醇-水-醋酸铵（70∶16∶14∶0.5），流速为1.0mL/min，柱温为室温，检测波长为210 nm。结果熊果酸质量浓度在0.123 6～0.824 0 g/L（r=0.999 5）范围内与峰面积线性关系良好；平均回收率为97.45%，RSD为1.30%（n=5）。结论该法简便易行，灵敏度高，重复性好，可作为小儿胃宝咀嚼片的质量控制方法。

高效液相色谱法；小儿胃宝咀嚼片；熊果酸

小儿胃宝片由山楂、山药、麦芽、六神曲、鸡蛋壳5味药材经提取精制而成，具有消食化积、健脾养胃、增进食欲、肥儿壮体的功效，用于伤食伤乳、呕吐泄泻、脾虚胃弱、消化不良等症的治疗［1］。原质量标准仅有1项显微鉴别，无含量测定项。小儿胃宝咀嚼片为小儿胃宝片的改剂型品种，为有效控制其质量，根据国家食品药品监督管理总局（CFDA）《药品注册管理办法》及相关技术指导原则［2-3］，本研究中对其质量标准进行了研究，参照文献［4-6］对其含量测定方法进行了研究，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 600E型高效液相色谱仪；Waters 600泵；Waters 2487型紫外检测器；Millog型色谱工作站；奥豪斯电子天平等。熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110742-200516，供含量测定用）；小儿胃宝咀嚼片（陕西方舟制药有限公司）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Kromasil ODSC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；柱温：室温；流动相：乙腈-甲醇-水-醋酸铵（70∶16∶14∶0.5）；流速：1.0mL/min；检测波长：210 nm；进样量：10μL。理论板数按熊果酸计算应大于2 000，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

取熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得对照品溶液。取本品20片，精密称定，研细混匀后，精密称取5 g，置索氏提取器中，加乙醚提取8 h，提取液回收乙醚至干，残渣加甲醇溶解，转移至5mL容量瓶中，加甲醇稀至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取不含山楂的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：取熊果酸对照品贮备液（0.824 0 g/L），分别稀释成质量浓度为0.123 6，0.206，0.412 0，0.618 0，0.824 g/L的溶液，取上述溶液各10μL进样，记录峰面积，以质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y= 213 799X+29 047，r=0.999 5（n=5）。结果表明熊果酸质量浓度在0.123 6～0.824 0 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，依法测定，记录峰面积。结果的RSD为0.99%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品，依法制备供试品溶液并进样测定含量。结果的RSD为1.38%（n=5），表明方法重复性良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别于0，1，2，3，5，8 h时依法测定峰面积。结果的RSD为0.61%（n=6），表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

加样回收试验：取已知含量的同批样品5份，分别精密加入熊果酸对照品，再依法制备供试品溶液，进样测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 熊果酸加样回收试验结果（n=5）

2.4 样品含量测定

取样品，依法制备供试品溶液，进样测定。结果10批样品中熊果酸含量均值为每片0.189mg。

3 讨论

小儿胃宝咀嚼片是由山楂、山药、麦芽等5味中药材组成的复方制剂。山楂为君药，主要含有机酸和黄酮类成分，而起消食化积作用的主要是其有机酸类成分。原质量标准仅有性状、显微鉴别和片剂的通用检查项目，无含量测定项，难以控制其质量。本试验中参考文献［4-6］，采用高效液相色谱（HPLC）法对其熊果酸含量进行测定。

熊果酸的最大吸收波长为203.4 nm［7-10］，为减少干扰，选择210nm为检测波长。采用KromosilODSC18色谱柱，以乙腈-甲醇-水-醋酸铵溶液为流动相，210 nm为检测波长，熊果酸与其他成分得到良好分离。检测结果表明，该方法重复性、精密度、稳定性、回收率等均符合要求，可用于小儿胃宝咀嚼片的质量控制。

［1］WS3-B2283-97.卫生部药品标准·中药成方制剂（第12册）［S］.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：130.

［3］国家食品药品监督管理局.药物研究技术指导原则［M］.北京：中国医药科技出版社，2005：196.

［4］黄豪万，常明泉，李玲，等.颠胃酸口服液中熊果酸的含量测定［J］.实用药物与临床，2014，17（4）：469-471.

［5］郑单萍.高效液相色谱法测定夏枯草中熊果酸的含量［J］.海峡药学，2012，24（9）：72-74.

［6］李培，潘广洲.高效液相色谱法测定消食健胃片中熊果酸含量［J］.中国药业，2014，23（11）：36-38.

［7］孙桂梅，钟秀华，马杰.高效液相色谱法测定六味地黄胶囊中熊果酸含量［J］.中国药业，2014，23（13）：21-22.

［8］朱斌，朱兴述，付泽华.高效液相色谱法测定马鞭草中熊果酸含量［J］.中国药业，2013，22（11）：44-45.

［9］危华玲，蒙大平，郭炎荣.高效液相色谱法测定苦丁茶含片中熊果酸含量［J］.中国药业，2008，17（3）：14-15.

［10］黄和军，许惠琴，崔小兵.HPLC-ELSD法测定山茱萸萜中齐墩果酸与熊果酸的含量［J］.中国药房，2012，23（39）：3 699-3 700.

Content Determination of the Ursolic Acid in Xiaoerweibao Chewable Tablets by HPLC

Du Xiaoying1，Jiang Jinhua1，Song Yuanzhi2，Ma Dongwei1
（1.Shaanxi Fangzhou Pharmaceutical Limited Company，Xi′an，Shaanxi，China 710075；2.Shaanxi Institute for Food and Drug Control，Xi′an，
Shaanxi，China 710065）

Objective To establish an HPLC method for the content determination of the ursolic acid in Xiaoerweibao Chewable Tablets.Methods The column chromatography was performed on a C18Kromosil ODS column（250 mm×4.6 mm，5μm）.The mobile phase was acetonitrile-methanol-water-acetic acid ammonium（70∶16∶14∶0.5）；the flow rate was 1.0 mL/min；the column temperature was room temperature；the detection wavelength was 210 nm.Results The content had good linear relationship with the peak area in the range of 0.123 6～0.824 0 g/L（r=0.999 5）；the average recovery rate was 97.45%，and RSD was 1.30%（n=5）. Conclusion The method is simple，sensitive and reproducible，and can be used as the quality control for the Xiaoerweibao Chewable Tablets.

HPLC；Xiaoerweibao Chewable Tablets；ursolic acid

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0118-02

2014-09-30；

2015-06-02）