Folin-Ciocaileu法测定鼠尾草多酚含量

冷雪娇，章林，邓绍林，*，王卓，裴玉琼，许金国，潘苏华

（1.南京中医药大学药学院，江苏南京210046；2.南京农业大学食品科技学院，江苏南京210095）

Folin-Ciocaileu法测定鼠尾草多酚含量

冷雪娇1，章林2，邓绍林2，*，王卓1，裴玉琼1，许金国1，潘苏华1

（1.南京中医药大学药学院，江苏南京210046；2.南京农业大学食品科技学院，江苏南京210095）

采用Folin-Ciocaileu法，以没食子酸为标准品，测定鼠尾草多酚含量，用比色法测定其稳定性、精密度、重现性和加样回收率。标准曲线的回归方程为：y=0.1525x＋0.018 1（R2=0.998）。本方法测得的鼠尾草中多酚含量为3.86%，5组样品的平均回收率为101.3%。本方法测定鼠尾草多酚含量具有较高的稳定性（RSD=1.63%）、重现性（RSD= 3.01%）和精密度（RSD=1.02%）。

鼠尾草；多酚；Folin-Ciocaileu法

鼠尾草（salvia officinalis L.）为唇形科、鼠尾草属植物，其叶、茎和花均有很高的利用价值，被广泛的用作医药、香料和食品行业的原料［1］。鼠尾草是著名的民间常用草药，有活血化淤、通经止痛、清心除烦、治月经不调、心绞痛、肝脾肿大等作用［2］，还可以作为香辛料来调味和保藏食物［3］。现代科学研究表明鼠尾草具有良好的抗氧化作用，主要表现在自由基清除活力、螯合过渡金属离子活性和单线态氧清除能力［4］，鼠尾草的抗氧化能力源于其所含有的抗氧化活性物质，如萜类化合物、黄酮类化合物和酚酸，其中酚类化合物起主要作用［5］，因此，有必要了解鼠尾草中的多酚含量及其测定方法。目前，Folin-Ciocaileu比色法广泛的应用于植物多酚的含量测定，此方法操作简便、精密度较高、重现性好，并且所需仪器设备价格低廉。本试验选择Folin-Ciocaileu比色法测定鼠尾草中的多酚含量，研究此方法是否可应用于鼠尾草的多酚含量测定。

1　材料与方法

1.1材料与试剂

鼠尾草粉：山东济南海乐西亚泽公司；没食子酸（HPLC级纯）：阿拉丁公司；石油醚、乙醇、钨酸钠、钼酸钠、硫酸锂、无水碳酸钠、磷酸、溴等均为国产分析纯。

1.2仪器与设备

PS-10A超声波：洁康牌数码超声波清洗机；WFJ 2100可见分光光度计：尤尼柯（上海）仪器有限公司；AUY120电子天平：日本SHIMADZU公司；ZKSY-600恒温水浴锅：南京科尔仪器设备有限公司；Milli-Q超纯水系统：Millipore公司。

1.3方法

1.3.1Folin-Ciocaileu试剂的配制［6］

称取50 g钨酸钠和12.5 g钼酸钠置入1 L磨口圆底烧瓶中，用350 mL蒸馏水溶解，缓慢加入85%磷酸25 mL，浓盐酸50 mL，充分混匀，放入数粒玻璃珠，连接回流冷凝装置，文火回流10 h（回流不一定连续）。用25 mL蒸馏水冲洗冷凝管上的附着物，拆开冷凝管后加入75 g无水硫酸锂和几滴溴水（边加边振摇），开口继续加热沸腾15 min，直至溴水完全挥发，终点颜色为黄绿色。冷却后定容至500 mL，过滤，储存于棕色瓶中，放入冰箱保存备用，使用时稀释1倍。

1.3.2没食子酸标液的配制

精确称取0.035 4 g没食子酸标准品，用烧杯溶解后，定容至250 mL，浓度为140 μg/mL，使用时浓度稀释1倍。

1.3.3标准曲线的建立［7］

精密吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL 70 μg/mL没食子酸标准稀释液于10 mL量瓶内，加1.0 mL Folin-Ciocaileu试剂，再加入10%碳酸钠溶液3 mL（前后时间间隔不应超过8 min），混匀，加水定容，再混匀。然后室温下避光放置反应2 h，在765 nm处测吸光度。以吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。鼠尾草样品中的多酚含量以没食子酸标准品计。

1.3.4鼠尾草样品溶液的制备［8］

鼠尾草粉中按鼠尾草粉：石油醚为1∶10（g/mL）加入石油醚浸提12 h脱脂，室温下干燥至恒重。准确称取1.0 g鼠尾草粉末，加入60%乙醇20 mL，40℃，超声提取30 min共3次，合并提取液，过滤，定容至100 mL，待测。

1.3.5鼠尾草样品中多酚含量的测定

将鼠尾草样品液稀释10倍，用样品空白作为对照。移液管精确量取稀释液0.5 mL置于10 mL容量瓶中，加Folin-Ciocaileu试剂1.0 mL，再加入10%碳酸钠溶液3 mL，混匀，加水定容，继续摇匀，然后室温下避光放置反应2 h，在765 nm波长处测吸光度，代入回归方程，得多酚浓度（μg/mL）。

1.3.6鼠尾草多酚测定方法评价

1.3.6.1稳定性实验

取鼠尾草酚类提取样品液按上述处理及测定方法，分别在样品液与显色剂反应0.5、1、2、3、4 h后测吸光度，以评价该比色分析方法在一定时间内的稳定性。

1.3.6.2重现性实验

取鼠尾草样品4份，依上述制备及分析方法，分别测定其多酚含量，并计算测定结果的相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD），以评价该方法的重现性。

1.3.6.3精密度实验

用Folin-Ciocaileu法测定同一鼠尾草提取样品液5次，计算测定结果的RSD，以评价该方法的精密度。

1.3.6.4加样回收率实验

鼠尾草酚类样品液中加入不同量的没食子酸标准贮备液，分别测定其多酚含量，并计算回收率和RSD，以评价该方法的准确度和可靠性。取0.4 mL稀释10倍的鼠尾草样品溶液于10 mL具塞刻度试管中，再加稀释10倍的没食子酸标样0、0.5、1、1.5、2 mL，加1 mL福林试剂，再加3 mL 10%碳酸钠，定容至10 mL，摇匀，室温放置2 h，测吸光度。

2　结果与分析

2.1标准曲线的建立

由图1可知，没食子酸在0 μg/mL～5 μg/mL浓度范围内与其吸光度值呈良好的线性关系，在此范围内线性回归方程为Y=0.152 5X+0.018 1（R2=0.998）。

图1　没食子酸标准曲线Fig.1Gallic acid standard curve

2.2鼠尾草中多酚含量的测定

精密称取1.0 g鼠尾草粉4份，按照1.3.4的方法制备供试品溶液，按照1.3.5的方法进行操作，设空白管。为消除供试品溶液本身颜色的干扰，同时制备不加显色剂的对照管，于765 nm波长处测定吸光度。结果见表。结果表明，本方法测得的鼠尾草中多酚含量平均为3.86%，RSD=3.71%。

表1　鼠尾草中多酚含量Table 1Content of polyphenols in sage

2.3Folin-Ciocaileu方法的稳定性、重现性和精密度

本试验验证了Folin-Ciocaileu比色法测定鼠尾草中酚类含量的稳定性、重现性和精密度，结果见表2。

表2　Folin-Ciocaileu方法的稳定性、重现性和精密度Table 2Stability，repeatability and precision of the Folin-Ciocaileu method

由表2可见，该方法在体系反应完全后放置4 h内测定的吸光度值变化较小（RSD=1.63%），表明方法稳定性较好；重现性实验测得5个不同鼠尾草样品中多酚含量值较接近（RSD=3.01%），表明该方法重现性较好；精密度实验，同一样品5次测定的多酚含量值相差较小（RSD=1.02%），表明该方法精密度较高，完全能满足样品分析的要求。

2.4加标回收率实验

按照1.3.6的方法进行加样回收率的测定，结果见表3。

表3　鼠尾草多酚含量测定加样回收率实验结果Table 3Recovery rate of polyphenols in sage

由表3可见，5次加样回收实验的最低回收率为99.6%，最高回收率为103.5%，平均回收率为101.3%， RSD=1.61%。表明此法有很高的准确性和可靠性。

3　结论

本试验以没食子酸为对照品，采用Folin-Ciocaileu比色法测定鼠尾草多酚含量，绘制标准曲线，多酚浓度在0 μg/mL～5 μg/mL范围内与吸光值呈现良好的线性关系。本方法测得的鼠尾草中多酚含量平均为3.86%，RSD为3.71%。稳定性试验RSD为1.63%，重现性试验RSD为3.01%，精密度试验RSD为1.02%，5组样品的平均回收率为101.3%，RSD为1.61%。本方法操作简单、效率高、设备要求低、精密度高、稳定性和重现性较好，可为鼠尾草多酚的检测提供了技术参考。

［1］Santos-Gomes P C，Seabra R M，Andrade P B，et al.Determination of phenolic antioxidant compounds produced by calli and cell suspensions of sage（Salvia officinalis L.）［J］.Journal of Plant Physiology，2003，160（9）：1025-1032

［2］曲慧.甘西鼠尾草提取物抗氧化活性的初步研究［J］.青岛农业大学学报（自然科学版），2007，24（4）：261-263

［3］Durling N E，Catchpole O J，Grey J B，et al.Extraction of phenolics and essential oil from dried sage（Salvia officinalis）using ethanolwater mixtures［J］.Food Chemistry，2007，101（4）：1417-1424

［4］Pizzale L，Bortolomeazzi R，Vichi S，et al.Antioxidant activity of sage（Salvia officinalis and S fruticosa）and oregano（Origanum onites and O indercedens）extracts related to their phenolic compound content［J］.Journal of the Science of Food and Agriculture，2002，82（14）：1645-1651

［5］Lu Y，Foo L Y.Antioxidant activities of polyphenols from sage（Salvia officinalis）［J］.Food Chemistry，2001，75：197-202

［6］吴亮亮，石雪萍，张卫明.Folin-Ciocalteu比色法测定花椒中多酚含量的研究［J］.中国野生植物资源，2010（6）：54-56

［7］曹艳萍，代宏哲，曹炜，等.Folin-Ciocaileu比色法测定红枣总酚［J］.安徽农业科学，2008，36（4）：1299-1299

［8］王晓阳，唐琳，赵垒，等.Folin-Ciocaileu比色法测定刺槐花中的多酚含量［J］.食品与药品，2010，12（9）：332-335

Determination of Polyphenols in Flowers of Salvia Officinalis L.by Folin-Ciocaileu Method

LENG Xue-jiao1，ZHANG Lin2，DENG Shao-lin2，*，WANG Zhuo1，PEI Yu-qiong1，XU Jin-guo1，PAN Su-hua1
（1.Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，Jiangsu，China；2.College of Food Science and Technology，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，Jiangsu，China）

Gallic acid as reference，the Folin-Ciocalteu method was established to determine the content of polyphenols in sage.The stabilization，precision，repetition and recovery rate of this method were investigated. The regression equation was：Y=0.152 5X+0.018 1（R2=0.998）.This method measured the polyphenols content in sage was 3.86%，the average recovery rate of five groups of samples was 101.3%.This method for determining the content of polyphenols in sage possesses high stability（RSD=1.63%），repeatability（RSD= 3.01%）and precision（RSD=1.02%）.

sage；polyphenols；folin-ciocaileu method

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.13.025

2014-03-18

南京中医药大学青年自然科学基金（13XZR29）

冷雪娇（1988—），女（汉），助理实验师，硕士，从事食品安全与工艺研究工作。

邓绍林（1986—），男，实习研究员，硕士，主要从事畜产品加工与质量控制研究。