Ezrin在软组织肉瘤中的表达意义及其预后相关性分析

锡林宝勒日，董超，鲁学良，李勇奇

Ezrin在软组织肉瘤中的表达意义及其预后相关性分析

锡林宝勒日，董超，鲁学良，李勇奇

作者单位:830000新疆乌鲁木齐，新疆医科大学附属肿瘤医院骨与软件组织病区

目的探究Ezrin在不同软组织肉瘤中的表达水平及其与肿瘤术后复发的相关性方法。

Ezrin;免疫组化;术后复发;软组织肉瘤doi:10.3969/j.issn.1674-4136.2015.01.005

软组织肉瘤（soft tissue sarcoma，STS）是一种高度异质性的恶性肿瘤，虽然其发病率相对较低（1%）［1-3］，但术后复发率较高（10%～20%）［4］。充分的术前评估、高复发患者的识别及优化治疗成为STS临床研究中关注的焦点，而对于可能受益于辅助治疗的高复发患者，需要高度敏感性和特异性的预测因子更好的加以识别。

Ezrin蛋白为细胞骨架蛋白，在胞质中起链接胞膜与肌动蛋白的作用，而细胞骨架（以肌动蛋白为基础）在细胞的移动和细胞形态发生中起着中心作用。研究表明，Ezrin在多种肿瘤的预后中扮演重要的角色［5-6］。同时Ezrin［4，7］的表达与软组织肉瘤患者生存率及预后密切相关，但其与软组织肉瘤患者术后复发的相关性研究较罕见。Ezrin的表达改变与软组织肉瘤患者术后复发是否相关联，各标记物作用机制如何依然是不确定的。本研究以新疆医科大学附属肿瘤医院94例软组织肉瘤患者为研究对象，以术后局部复发为预后指标，采用组织芯片制备、免疫组织化学染色方法，分析Ezrin的表达及软组织肉瘤患者临床病理特征与其预后的相关性，以期为软组织肉瘤患者术前评估及优化治疗提供积极的理论指导意义。

1　资料与方法

1.1纳入标准选取2006年1月至2012年12月新疆医科大学附属肿瘤医院骨与软组织科软组织肉瘤患者139例，挑选其石蜡包埋材料和切片，所有患者术后均经病理学证实为软组织肉瘤。

1.2排除标准诊断时已出现远处转移（主要是肺转移）;未行手术治疗;临床资料或病理资料不完整。

1.3复发与随访临床体格检查结合影像学彩色多普勒超声或磁共振成像发现原术区复发占位征象或再次手术术后病理学检查证实原肿瘤术后局部复发。纳入的患者以手术后发现局部复发为随访终点，对于未复发者至少随访3年。

1.4主要试剂及实验方法采用组织芯片，PV两步法免疫组化染色，用PBS缓冲液作为阴性对照，用已知的阳性片作为阳性对照。埃兹蛋白鼠抗人单克隆抗体（Ezrin）（MAB-0351，浓缩型，稀释度为1∶50）购自福州迈新生物技术开发有限公司;PV-6000两步法免疫组化试剂盒购自北京中杉京桥生物技术有限公司;浓缩型DAB试剂盒（产品编号:ZLI-9017）购自北京中杉京桥生物技术有限公司。

1.5免疫组化染色结果的判断免疫组化组织芯片由2位病理学医师同时独立评分，所有组织标本均采用匿名，如出现意见分歧，切片将重新审查直至达成一致。每位患者的评分都是基于1个或2个穿刺点的平均得分。评分时，仅肿瘤代表区被纳入，坏死和炎症浸润区被排除。

Ezrin的着色部位为细胞膜;着色的肿瘤细胞百分数计分:0分（无着色的肿瘤细胞），1分（1%～25%），2分（26%～50%），3分（51%～75%），4分（76%～100%）;着色强度计分:0阴性（无着色），1弱阳性（淡黄色），2中阳性（棕黄色），3强阳性（棕褐色）。着色的肿瘤细胞百分数计分与着色强度分数相加得到总分（范围从0～7）。Ezrin低表达:总分＜4分，Ezrin高表达:总分≥4分。

1.6统计学处理采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。Ezrin表达与软组织肉瘤临床病理变量的相关性采用单变量检验或Fisher确切概率法分析;同时绘制Ezrin不同表达水平的无复发生存曲线（Kaplan-Meier曲线），曲线间差别的统计学意义采用Log-Rank检验;作Ezrin不同表达水平的无复发生存时间箱式图，均数的比较使用独立样本t检验。P＜0.05表示有统计学意义。

2　结果

在139例软组织肉瘤患者中，45例患者被排除，共纳入94例合格患者。其中复发患者18例，3年总复发率19.1%。中位随访时间19.5个月（1～65个月）。

2.1Ezrin表达与软组织肉瘤临床病理特征的关系94例中，Ezrin低表达50例，Ezrin高表达44例，高表达比例为46.8%。

2.2Ezrin表达和临床病理特征与软组织肉瘤复发的相关性在单变量分析中，仅肿瘤大小、恶性度分级、切缘状况、化疗情况、Ezrin表达提示为有统计学意义的复发预测因子（见表1）。

表1　Ezrin表达和临床病理变量与软组织肉瘤术后复发的相关性

表1　（续）

上述差别有统计学意义的变量进入多变量Lo-gistic回归分析显示:恶性度分级（P=0.008，OR =14.256）、切缘状况（P=0.037，OR=9.670）、化疗情况（P=0.017，OR=0.092）、Ezrin表达（P= 0.026，OR=10.301）与复发有明显相关性，为影响软组织肉瘤复发的独立预测因子;但肿瘤大小与软组织肉瘤复发未见明显相关（P=0.237，OR= 2.961）（见表2）。

表2　Ezrin表达和临床病理变量与软组织肉瘤复发的相关性

图1　A～C软组织肉瘤患者Ezrin不同表达水平的无复发生存曲线

Ezrin（P=0.000）表达增加均相关于更短的无复发生存率（图1A～C）。同时，Ezrin表达增加相关于更短的无复发生存时间（P=0.031）（图2）。

2.3Ezrin表达与软组织肉瘤复发相关性的亚组分析在亚组单变量分析中，在年龄≤60岁、部位为四肢肉瘤、切缘阴性、不同肿瘤大小、不同性别、不同恶性度、不同化疗及放疗状态下，Ezrin不同表达水平的软组织肉瘤复发率均不同，差异有统计学意义，均P＜0.05（见表3）。且恶性度3级的患者、切缘阴性的患者，Ezrin表达增加术后无复发生存率均降低，不同表达水平无复发生存率差别均有统计学意义（图1）。

图2　软组织肉瘤患者Ezrin不同表达水平的无复发生存时间箱式图（图中显示了Ezrin不同表达水平的无复发生存时间均数＜+标记＞、上四分位数P75、下四分位数P25、中位数及最大值、最小值）

表3　Ezrin表达与软组织肉瘤复发相关性的亚组分析

3　讨论

既往大量研究认为:切缘阳性、切除不彻底是影响复发的主要因素［8-11］。近年来随着分子生物学及细胞遗传学的发展，人们对软组织肉瘤及其复发因素的认识亦逐步从细胞水平进入到分子水平。

Ezrin蛋白为细胞骨架蛋白，在胞质中起链接胞膜与肌动蛋白作用，而细胞骨架（以肌动蛋白为基础）在细胞的移动和细胞形态发生中起着中心作用。通过调节黏附分子和信号转导等途径，Ezrin蛋白参与细胞与细胞、细胞与基质之间的相互作用，它在肿瘤发展、浸润及转移过程中起着至关重要的作用。Carneiro等［4］人的研究显示:在软组织肉瘤中，Ezrin蛋白可以独立预测局部复发和远处转移。这也使在可能的术前评估中，Ezrin蛋白成为识别本该受益于新辅助治疗的患者的潜在标记物。而另一项［7］以78例黏液纤维肉瘤为研究对象的研究发现: Ezrin蛋白可独立预测不良预后，且其过度表达显著相关于增加的恶性度分级。在本研究中，94例STS患者的总复发率约为19.1%，Ezrin蛋白高表达显著相关于软组织肉瘤术后复发（P=0.026，OR= 10.301）（表2），且不同表达水平时软组织肉瘤术后无复发生存率（图1）及无复发生存时间（图2）差别均有统计学意义。对其进一步行亚组分析时发现，仅单变量分析时差别有统计学意义，多变量分析时，这种统计学差异则不存在（表3）。但Ezrin蛋白表达水平与临床病理变量（包括肿瘤恶性度分级）间并无相关性（表1）。

综上所述，Ezrin蛋白在软组织肉瘤的术后复发过程中发挥重要作用，可作为软组织肉瘤患者术后复发的独立预测因子。Ezrin可作为候选标记物指导高复发患者的术前评估及优化治疗。其作用机制尚需进一步深入研究，同时对于其在不同软组织肿瘤亚型中的表达意义及作用机制亦需进一步的探讨。

［1］Verweij J，Baker LH.Future treatment of soft tissue sarcomas will be driven by histological subtype and molecular aberrations［J］. Eur J Cancer，2010，46（5）:863-868.

［2］Sampo M，Tarkkanen M，Tukiainen E，et al.A web-based prognostic tool for extremity and trunk wall soft tissue sarcomas and its external validation［J］.Br J Cancer，2012，106（6）:1076-1082.

［3］Jones NB，Iwenofu H，Scharschmidt T，et al.Prognostic factors and staging for soft tissue sarcomas:an update［J］.Surg Oncol Clin N Am，2012，21（2）:187-200.

［4］Carneiro A，Bendahl PO，Åkerman M，et al.Ezrin expression predicts local recurrence and development of metastases in soft tissue sarcomas［J］.J Clin Pathol，2011，64（8）:689-694.

［5］Wang YF，Shen JN，Xie XB，et al.Expression change of Ezrin as a prognostic factor in primary osteosarcoma［J］.Med Oncol，2011，28 Suppl 1:S636-S843.

［6］J rgren F，Nilbert M，Rambech E，et al.Ezrin expression in rectal cancer predicts time to development of local recurrence［J］.Int J Colorectal Dis，2012，27（7）:893-899.

［7］Huang HY，Li CF，Fang FM，et al.Prognostic Implication of Ezrin Overexpression in Myxofibrosarcomas［J］.Ann Surg Oncol，2010，17（12）:3212-3219.

［8］Potter BK，Hwang PF，Forsberg JA，et al.Impact of margin status and local recurrence on soft-tissue sarcoma outcomes［J］.J Bone Joint Surg Am，2013，95（20）:e151.

［9］Sawamura C，Matsumoto S，Shimoji T，et al.What are risk factors for local recurrence of deep high-grade soft-tissue sarcomas［J］. Clin Orthop Relat Res，2012，470:700-705.

［10］Sogaard AS，Laurberg JM，Sorensen M，et al.Intra abdominal and retroperitoneal soft-tissue sarcomas—outcome of surgical treatment in primary and recurrent tumors［J］.World J Surg Oncol，2010，8:81.

［11］Potter BK，Adams SC，Pitcher JD，et al.Local recurrence of disease after unplanned excisions of high-grade soft tissue sarcomas［J］.Clin Orthop Relat Res，2008，466（12）:3093-3100.

The correlation of Ezrin expression and comprehensive analysis with prognosis in soft tissue sarcoma

XILIN Baoleri，DONG Chao，LU Xueliang，LI Yongqi.
（Department of Bone and Soft Tissue Tumor，Affiliated Cancer Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China）

XILIN Baoleri，E-mail:xlblrdj@126.com

ObjectiveTo investigate the expression level of Ezrin in soft tissue sarcomas and the prognosis value in postoperative recurrence.MethodsAnalyzing the specimens from 94 patients suffered from soft tissue sarcomas.Tissue microarrays were constructed with representative tumor areas.Immunohistochemistry from PV-6000 polymer detection system was used to evaluate he expression of Ezrin and to analyze the relationship between the expression of Ezrin and recurrence after operation from 94 soft tissue sarcomas patients.Results

Ezrin;immunohistochemical;postoperative recurrence;soft tissue sarcoma

锡林宝勒日，男，主任医师，副教授，研究方向:骨与软组织肿瘤的临床研究，E-mail:xlblrdj@126.com

2014-10-14］［本文编辑:文心］

1674-4136（2015）01-0020-04

采用组织芯片、二步法免疫组织化学染色法对94例软组织肉瘤中Ezrin的表达情况进行检测，分析其与软组织肉瘤术后复发之间的相关性。结果Ezrin高表达的软组织肉瘤患者术后复发率显著高于Ezrin低表达组（P=0.026，OR=10.301）。在亚组单变量分析中，在年龄≤60岁、部位为四肢肉瘤、切缘阴性、不同肿瘤大小、不同性别、不同恶性度、不同化疗及放疗状态下，Ezrin不同表达水平的软组织肉瘤复发率均不同，差异均为P＜0.05。结论Ezrin可作为软组织肉瘤复发的独立预测因子，可作为候选标记物指导软组织肉瘤患者的预后治疗。

Compared with the group with low expression of Ezrin，there was a high recurrence rate in the group of high expression of Ezrin，and the result was significant different（P=0.026，0R=10.301）.In subgroup univariate analysis，the recurrence rate varied with the expression of Ezrin on the patients under 60 years old who suffered from extremity malignant tumor and negative margin，regardless of the gender，tumor size，grade nor chemotherapy（P＜0.05）.ConclusionsHigh expressions of Ezrin occurred in soft tissue sarcomas patients with negative margin and can be treated as an independent predictor of recurrence and it can guide the preoperative evaluation and treatment on patients with soft tissue sarcomas.