整合素β1和TIMP—1在子宫内膜腺癌中的表达研究

刘玲　詹平　聂丹等

[摘要] 目的 研究整合素β1与TIMP-1在子宫内膜腺癌中的表达及其与临床病理特征等因素间的关系。 方法 选取2013年1月～2014年10月本院60例子宫内膜腺癌组织作为研究组，20例正常子宫内膜组织作为对照组，应用免疫组织化学S-P法检测其整合素β1和TIMP-1的表达情况，分析两者与子宫内膜腺癌的关系。 结果 整合素β1在子宫内膜腺癌中的阳性表达率为76.67%，高于对照组的15.00%，差异有统计学意义（P<0.05）；整合素β1表达程度与癌细胞的组织学分级呈正相关（P<0.05），与手术病理分期呈正相关（P<0.05）。TIMP-1在子宫内膜腺癌中的阳性表达率为65.00%，高于对照组的25.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。子宫内膜腺癌中整合素β1与TIMP-1的阳性表达率呈正相关（P<0.05）。 结论 整合素β1和TIMP-1与子宫内膜腺癌的发生、发展有关，联合检测整合素β1和TIMP-1在子宫内膜腺癌中的表达，对辅助判断子宫内膜腺癌的恶性程度、转移潜能及预后有重要的参考价值。

[关键词] 整合素β1；TIMP-1；子宫内膜腺癌

[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）09（a）-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of intergrin-β1 and TIMP-1 in human endometrial adenocarcinoma and the relationship between each other. Methods From October 2014 to January 2013，60 cases of endometrial adenocarcinoma tissues in our hospital were selected as the research group，and 20 cases of normal endometrial tissues as the control group.The immuno-histochemical method was used to examine the expression of intergrin-β1 and TIMP-1 in endometrial adenocarcinoma tissue and the normal endometrial tissue separately.The relationship between the two and endometrial adenocarcinoma was analyzed. Results The expression of intergrin-β1 in endometrial adenocarcinoma tissue was 76.67%，higher than 15.00% in control group，it was related with differentiation of cancer cells and operation pathologic staging（P<0.05）.The expression of TIMP-1 in endometrial adenocarcinoma tissue was 65%， higher than 25.00% in control group，it was related with operation pathologic staging （P<0.05），but not related with differentiation of cancer cells（P>0.05）.Positive correlation was found between intergrin-β1 and TIMP-1 in endometrial adenocarcinoma tissue. Conclusion Intergrin-β1 and TIMP-1 may be associated with the occurrence and development of endometrial adenocarcinoma，and which may be acted as clinical indexes that they are related to the invasion and metastasis of endometrial adenocarcinoma.

[Key words] Intergrin-β1；TIMP-1；Endometrial adenocarcinoma

细胞间基质和基底膜组成的细胞外基质（ECM）是肿瘤细胞侵袭和转移中的重要屏障，整合素表达缺失或过表达可导致上皮细胞病变，甚至癌变，其通过调节基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）的分泌和活化，促进肿瘤浸润和转移[1-4]，整合素β1与肿瘤细胞凋亡、增殖和侵袭转移密切相关[5-7]，具有抑制金属蛋白酶的活性而使细胞外基质降解减少的作用，基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）过表达可防止基质降解，抑制肿瘤浸润转移，TIMP-1与肿瘤的恶性进展、浸润转移有关[8]。本研究应用免疫组化方法分析整合素β1和TIMP-1在子宫内膜腺癌中的表达情况及与临床病理特征的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集泸州医学院附属医院2013年1月～2014年10月因子宫内膜腺癌手术治疗的病理标本共60例，其中Ⅰ期23例，Ⅱ期21例，Ⅲ期9例，Ⅳ期7例（2009年FIGO子宫内膜癌手术病理分期），组织学分级：G1 18例、G2 26例、G3 16例。所有患者术前均未接受放、化疗和激素治疗，平均年龄（54.52±5.79）岁。正常子宫内膜组织来源于同期因子宫良性疾病行子宫全切除术标本共20例，术后病理学证实无恶性病变存在，平均年龄（51.04±5.57）岁。

1.2 方法

所有新鲜标本均经10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4 μm切片。兔抗人多克隆的整合素β1抗体、TIMP-1抗体及SP-9001试剂盒均购自北京中杉金桥公司。两种抗原均行微波修复，按试剂盒说明书操作，苏木素复染。用已知的阳性片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断

评分标准参照Birner法[9]。由两名病理学专家双盲法观察切片，若两专家结果不一致则重新判定。染色结果以半定量方法进行判定，根据染色的强度和范围评分。两项评分相乘所得的积分为得分：不管其染色强度，只要阳性细胞数<10%者为（-）；3分为（+）；4～5分为（++）；6～7分为（+++）。表达阳性率=[（+）+（++）+（+++）]例数/总例数×100%。

1.4 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析，两组间比较采用Mam-Whitneyu U检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，相关性分析采用Spearman秩相关检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 整合素β1在子宫内膜腺癌中的表达

整合素β1主要表达于子宫内膜组织腺上皮细胞胞浆，少量表达于间质细胞胞浆（图1）；子宫内膜腺癌组中整合素β1的阳性表达率为76.67%，高于对照组的15.00%，差异有统计学意义（P<0.05）；Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期子宫内膜腺癌组织中，整合素β1表达均于高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；子宫内膜腺癌G1、G2、G3组织中整合素β1表达均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）；整合素β1的表达与手术病理分期呈正相关（r=0.327，P=0.011），与组织学分级呈正相关（r=0.626，P=0.000）。

2.2 TIMP-1在子宫内膜腺癌中的表达

TIMP-1主要表达于子宫内膜组织腺上皮细胞胞浆（图2）；子宫内膜腺癌组织中TIMP-1的阳性表达率为65.00%，高于对照组的25.00%，差异有统计学意义（P<0.05）；Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期子宫内膜腺癌组织中，TIMP-1表达均于高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；子宫内膜腺癌G1、G2、G3组织中TIMP-1表达高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）；TIMP-1的表达与组织学分级无相关性（r=0.205，P=0.116），TIMP-1的表达与手术病理分期呈正相关（r=0.472，P=0.000）。

2.3 整合素β1与TIMP-1在子宫内膜腺癌中表达的相关性

60例子宫内膜腺癌整合素β1与TIMP-1的表达有相关性（r=0.258，P=0.046）（表3）。

3 讨论

3.1 整合素β1表达与子宫内膜腺癌的关系

整合素通过调节细胞黏附到细胞外基质，调节细胞迁移、生长、分化和凋亡，从而发挥调控肿瘤进展的作用，整合素β1通过Hedgehog途径调节大肠癌细胞增殖和迁移[10]。Hecht等[1]研究发现，整合素α6、α3在子宫内膜癌中呈现高表达，随肿瘤组织学分期的增加其表达水平升高，而正常子宫内膜腺上皮及子宫内膜原位癌中呈低表达。邓樑卿等[11]研究发现，整合素α ν β3在子宫内膜癌中高表达，其表达从正常子宫内膜组织到子宫内膜腺癌的发展过程中逐渐增加，随临床分期、肌层浸润及淋巴结转移等方面的发展，其表达均显著增加，其表达与肿瘤的恶性程度呈正相关，而朱婷等[12]与其意见不统一。目前整合素在肿瘤的侵袭和转移中的作用尚不明确，以Hecht等的意见为主流。

本课题前期研究表明，整合素β1在子宫内膜癌中呈高表达[9]，本研究亦显示，整合素β1在子宫内膜腺癌中呈高表达，主要表达于子宫内膜组织的腺上皮细胞胞浆，少量表达于间质细胞质，且其表达程度与癌细胞的组织学分级和手术病理分期呈正相关，由此推测，在子宫内膜腺癌组织肿瘤细胞与基质成分黏附过程中，通过增加细胞膜整合素β1-受体分子的分布数量和质量并与层粘连蛋白、纤维连接蛋白等ECM配体结合，促进肿瘤细胞的黏附扩散和转移，整合素的表达或功能的变化可能与肿瘤转移密切相关。

3.2 TIMP-1与子宫内膜腺癌的关系

TIMPs是重要的内源性调节因子，能抑制MMPs的活性[14-15]，MMPs及其抑制剂在肿瘤的发生及发展过程中发挥重要作用[16-17]。TIMP-1在结肠癌和乳腺癌组织中呈高表达，参与肿瘤的发生、发展[18-19]。本研究发现，TIMP-1表达于子宫内膜腺上皮细胞胞浆，在子宫内膜腺癌组织中呈高表达，与临床病理分期呈正相关，随病理分级增高，表达增加，表明TIMP-1与子宫内膜腺癌的浸润和转移密切相关。TIMP-1对所有类型MMPs均有抑制作用，尽管TIMPs可抑制肿瘤的侵袭和转移，但本研究发现子宫内膜腺癌组织TIMP-1的表达是上调的，TIMP-1表达水平增高与肿瘤的较差预后呈正相关，其机制可能是TIMP-1与MMPs表达水平存在不平衡，这种失衡加速了细胞外基质的降解，促进了肿瘤细胞的浸润与转移。

3.3 整合素β1与TIMP-1在子宫内膜腺癌中的关系

整合素通过调控MMPs的生成及激活其对基质蛋白的降解，利于癌细胞的侵袭和转移。TIMP-1对所有类型MMPs均有抑制作用，可抑制肿瘤的侵袭和转移，但本实验显示，整合素β1与TIMP-1在子宫内膜腺癌中的表达呈正相关，两者与临床病理分期均呈正相关，整合素β1表达与病理分级呈正相关，但TIMP-1表达与病理分级无相关，TIMP-1的表达并未显示出其抑制子宫内膜腺癌侵袭和转移的作用，也并未显示出TIMP-1与整合素β1相互间的负性调节作用关系。整合素β1与TIMP-1与子宫内膜腺癌的发生发展相关，两者协同参与子宫内膜腺癌的恶性行为，影响子宫内膜腺癌的侵袭和转移，可能并非单独简单、直接正性和负性调节关系，可能系整合素β1与TIMP-1和MMPs之间的动态平衡在影响肿瘤浸润与侵袭过程[20]，其在子宫内膜腺癌侵袭和转移中的作用还需要深入研究。

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（收稿日期：2015-07-28 本文编辑：王红双）