高效液相色谱法检测生物样品中喹诺酮类药物的研究进展

庞月 刘艳杰

【摘要】喹诺酮类药物是当前临床医学上应用较多的抗菌药物，与其他抗菌药相比，喹诺酮类的药用机理主要是通过阻止细菌DNA合成并使其死亡而达到消炎抗菌效果，所以不会产生质粒传导，因而其耐药性较强，所以喹诺酮类药物的应用非常广泛。加大对喹诺酮类药物检测方法的研究可以对生产和临床应用该类药物提供有利帮助，而高效液相色谱检测法就是这样一种检测方法，已经在多种喹诺酮类药物检测中发挥重要作用。现本文就对高效液相色谱检测法对生物样品在几种常见喹诺酮类药物检测中的应用研究进展进行分析探讨，以供参考。

【关键词】喹诺酮类；高效液相色谱法；检测；研究进展

【中图分类号】R969【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2015）01-0284-01

通俗来讲，喹诺酮类药物就是指沙星类抗生素，如诺氟沙星、左氧氟沙星、加替沙星等等。喹诺酮类药物的抗菌谱非常广，抗菌活性很强，且毒副作用相对较小，不但可以用于人体消炎，还可以用养殖业中。自从第一代喹诺酮类药物研发以来，就得到了非常广泛的应用。目前第四代喹诺酮类药物已经被研发并应用在临床医学中。而无论是在研发生产或是临床应用中都需要对喹诺酮类药物中的含量进行检测，以确定最佳剂量和药物使用量。以下本文就重点对喹诺酮类药物的检测方法之一，高效液相色谱法的应用进行研究探讨。

一、研究概述

喹诺酮类药物作为一种疗效显著、耐药性强、副作用小、具有较长的抗菌后效应的广谱抗菌药，是临床医学上使用较为频繁的药物，尤其是在治疗革兰阴性菌引起的感染方面，更是有着非常好的抑菌杀菌效果。并且喹诺酮类药物无论是口服或是注射针剂都能够很快被生物体吸收，不易与生物蛋白质结合，因此不会对生物体产生太大的毒副作用。一般来讲，喹诺酮类药物很少在生物体内进行代谢，多是以原型排出体外。

从性质上来讲，喹诺酮类药物一般很难在水中溶解，也不易在乙醇中溶解，但可以在弱酸弱碱中溶解，如冰醋酸、稀碱溶液等。喹诺酮类药物在溶解后对光并不稳定，但是其在紫外光区却可以形成较为稳定的荧光，因此在很长一段时间中喹诺酮类药物的含量检测都是利用紫外分光光度计进行检测。而随着高效液相色谱法在有机化合物检测中的应用越来越广，也开始有人将其应用在喹诺酮类药物的检测中。

高效液相色谱法是在经典液相色谱的基础上发展而成的一种新的分析方法，其有着很强的分离能力，可以将有机化合物中的成分分离出来进行测定，测定结果较为精准，因此其逐渐成为一种常用的检测方法。在喹诺酮类药物的检测中，高效液相色谱法多采用反相高效液相色潽法，也可采用离子对色谱法；使用C18柱，以甲醇（或乙腈）-缓冲液（pH2.0～3.5）系统为流动相。并且在长期的研究中，发现在对喹诺酮类药物进行高效液相色谱检测时，其发光效果是与缓冲液的pH值有很大关联，即pH值与等电点越相近，效果就会越明显。所以一般在进行荧光检测时，会在流动相中添加一定的弱酸性缓冲液，这样可以使色谱峰值增高，分离测定效果更好。另外，为了解决喹诺酮类药物检测过程中存在的拖尾现象等问题，还可以在高效液相色谱法检测中加入一定的扫尾剂三乙胺，并使用离子抑制色谱进行检测。

二、几种常见的喹诺酮类药物检测研究进展

1、左氧氟沙星

左氧氟沙星在治疗尿路感染或呼吸道感染方面有着显著疗效，其比氧氟沙星的性能更优，应用更广泛。在对左氧氟沙星进行高效液相色谱法检测时，一般多采用紫外检测或荧光检测，波长采用275nm，可以使用C8柱作为色谱柱，使用乙腈-甲醇-0.4mol/L柠檬酸（7：15：78）当做流动相，并用甲醇对血浆进行萃取，采用内标法进行检测。也有利用反相色谱紫外检测，其所使用的色谱柱为C18柱，流动相为水（含0.1%甲酸，0.4%三乙胺）-乙腈（14：86），波长290nm，柱温35℃，乙腈离心萃取，外标法测定。还有文献报道采用C18柱，波长设计为297nm，流动相虽然也使用乙腈，但使用了pH为5.6的磷酸盐缓冲液，使用50%三氟醋酸来沉淀血浆蛋白，在萃取静置一段时间后，蛋白充分沉淀后再进样，并以帕珠沙星为内标物。这种检测方法不但简便快捷，而且非常灵敏，检测出的准确率较高。左氧氟沙星色谱图如入1所示。

图1左氧氟沙星色谱图

2、巴洛沙星

巴洛沙星也是一种非常重要的喹诺酮类药物，属于第四代沙星类抗生素，其对革兰阳性菌及革兰阴性菌具有广谱的抗菌活性。其母核的7位含有3-甲基氨基哌啶环，因此拥有更为广泛的抗菌谱和更强的抗菌活性。其8位上还可以结合一定的甲氧基，使其几乎无潜在的光敏反应，对中枢神经系统的不良作用小。目前对于巴洛沙星的高效液相色谱检测的研究较少。有学者使用C18色谱柱，流动相为乙腈-0.05mol/L柠檬酸（三乙胺调节pH至4.0）（22：78），柱温40℃，检测波长294nm，二极管阵列紫外检测器进行测定，在一定浓度范围内能呈现良好的线性关系。也有使用乙腈-水（1000ml中含0.5μl磷酸和三乙胺）（25：75）为流动相，色谱柱为C18色谱柱，检测波长320nm，该方法能够很好的将巴洛沙星和帕珠沙星（内标）分离开并进行含量测定。巴洛沙星色谱图如图2所示。

图2巴洛沙星色谱图

3、帕珠沙星

与巴洛沙星一样，帕珠沙星也是一种新一代的喹诺酮类药物，其主要作用的病菌对象是需氧菌和一般的厌氧菌，能够阻止细菌的形成，使其细胞不能继续分裂增殖。目前对于帕珠沙星的高效液相色谱检测研究也很少。仅有的一些研究中多是利用反相色谱紫外检测方法进行检测。检测过程中所使用的波长一般都在254-320nm之间，而流动相也多为加入一定缓冲液的乙腈或甲醇。甲醇相比于乙腈的洗脱能力更弱一些，可适当延长出峰时间，更好的消除杂峰的带来的影响，多用于帕珠沙星混旋体的检测。有文献报道可采用C18色谱柱、以乙腈-[10%甲磺酸溶液-1.0mol/L磷酸氫二钾溶液-水（10：7：153）（用三乙胺调节pH值至3.0）]（30：170）为流动相，检测波长为244nm进行帕珠沙星含量的测定。也有人使用甲醇-磷酸盐缓冲液（pH5.6）（15：85）为流动相，色谱柱为C18柱，检测波长为320nm。这种检测方法也较为灵敏方便，可用应用在帕珠沙星的生产和临床应用检测中。帕珠沙星的色谱图如图3所示。

图3帕珠沙星色谱图

三、结束语

总之，喹诺酮类药物作为目前临床医学生应用极为广泛的广谱抗菌药物，加强对其检测方法的研究有助于更好的利用这些药物，使其在开发生产、更新换代以及临床使用中能够掌握其含量，以更好的控制药效。采用高效液相色谱法力检测生物样品中的喹诺酮类药物，可以实现快速精准分离和高效分辨测定，检测效果很理想，并且还能够在检测质量和检测速度上有更进一步的提升，这就需要广大研究者再进行深入的研究，以促进高效液相色谱法在生物样品检测中得到更好的应用。

参考文献

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