MMP—2在早产儿视网膜病变新生小鼠模型中的表达

马书梅

【摘要】 目的 检测MMP-2在新生小鼠模型中的表达，探讨MMP-2在早产儿视网膜病变发病过程中的作用。方法 将7 日龄C57BL/6J小鼠置于75%plusmn；2%高氧环境中，5 天后再置于正常空气环境中，建立高氧诱导的早产儿视网膜病变的小鼠模型。于鼠龄17 天时处死动物并摘除眼球，应用免疫组化方法检测视网膜组织中MMP-2的表达情况。结果 MMP-2在对照组和高氧组的积分光密度值分别为16.33plusmn；4.13和21.12plusmn；6.29，两者比较有显著性差异（t=3.160，Plt；0.01）。结论 MMP-2可能对早产儿视网膜病变的新生血管生成有一定作用。

【关键词】 早产儿视网膜病变；MMP-2；视网膜新生血管

【中图分类号】R774.1 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0086-03

早产儿视网膜病变（Retinopathy of prematurity，ROP）是发生于早产和低体重儿的一种致盲性视网膜病变，其病理特征为视网膜血管异常增生，严重者可引起玻璃体出血、视网膜变性、视网膜脱离等多种并发症。上世纪80年代以来，由于医疗技术的快速发展，早产儿的成活率也显著提高，ROP的发病率也随之呈上升趋势，在体重低于1 000 g的超低体重儿，发病率高达80%以上[1，2]。目前，ROP已经成为世界范围内儿童致盲的重要原因，约占儿童致盲原因的6%～18%[3]。防治ROP以改善早产儿的生存質量己成为全球关注的焦点。己经明确ROP与吸氧治疗高度相关，早产、高氧和低出生体重是发病过程中最为关键的因素，但其发病的确切机制至今仍不明确。

研究表明，视网膜新生血管形成在ROP的发病机制中起主导作用。尽管近年来人们对视网膜新生血管的认识研究有了不少突破，但由于其确切发病机制仍然不明，目前临床上尚无完全根治性手段。在对视网膜新生血管发生机制的研究中，诸多生长因子、细胞因子和炎症介质发挥的作用一直是关注的重点。近些年来，对基质金属蛋白酶的研究成为热点。

本研究在早产儿视网膜病变的小鼠模型中，应用免疫组化方法，检测了基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达，进一步探讨MMP-2在早产儿视网膜病变发病过程中的作用。

1 材料和方法

1.1 实验动物

中国医科大学附属盛京医院动物实验中心提供的健康的清洁级C57BL/6J幼鼠（与哺乳母鼠在一起），选择鼠龄7 天的共40 只，雌雄兼有。

1.2 实验试剂

MMP-2免疫组化试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。

1.3 早产儿视网膜病变小鼠模型的建立

选择鼠龄7天的健康清洁级C57BL/6J幼鼠40 只，与哺乳母鼠在一起，雌雄兼有，随机分成2组，高氧组20 只，对照组20 只。对照组在正常环境温度下饲养；高氧组置于密闭有机玻璃容器内。容器内接入100%湿润医用纯氧气，使容器内氧分压保持在75 %plusmn；2 %，并用测氧仪全程监测容器内的氧分压，确保氧浓度的恒定。高氧环境下饲养5天，然后移置正常环境温度中饲养。每天日光照明12小时，环境温度控制在（23plusmn；2）℃。每日打开氧箱更换垫料、加食、替换母鼠1次。

1.4 标本的制备

鼠龄17 天时处死幼鼠，将眼球摘除，浸泡于4 %多聚甲醛中性缓冲液中固定24 小时，保存温度为4 ℃。梯度酒精脱水、二甲苯透明，常规石蜡包埋。标记方向，制作切片时应避开视乳头周围，含有视神经的切片应排除在外。连续切片，厚度6 mu；m，切片方向平行于角膜至视乳头的矢状位平面。

1.5 免疫组化法

按照即用型SABC免疫组化试剂盒使用说明书进行操作：石蜡切片置于60 ℃烘箱2～3小时溶解石蜡，二甲苯常规脱蜡至水，0.3%过氧化氢室温孵育5～10 分钟，切片置于抗原修复液中92～98 ℃水浴10 min，室温中冷却20 min。滴加5%BSA封闭液，滴加适当稀释的一抗（1：150），4 ℃过夜。次日滴加生物素标记的二抗工作液，置湿盒内37 ℃，滴加试剂SABC，室温孵育30 min。DAB显色：使用DAB显色剂试剂盒，取蒸馏水1 mL，加试剂盒中A、B、C试剂各一滴，混匀后加至切片，室温避光10 min。苏木素复染1 min，脱水、透明、封片、镜下观察。

1.6 统计学分析

实验数据采用均数plusmn；标准差表示，所有数据均以统计分析软件SPSS 11.5 for windows 进行分析，采用独立样本t检验方法，以Plt；0.05作为差异有统计学意义的标准。