对氨基苯甲酰胺中对氨基苯甲酸含量的测定

王丰莉 聂和俊 熊永科 陈伟强

摘 要：运用薄层色谱、紫外光谱、红外光谱对对氨基苯甲酰胺中对氨基苯甲酸进行定性确认。通过条件试验确定HPLC最佳分离条件，用乙酸铵调节缓冲体系，用20%（V/V）的甲醇作为流动相，外标法定量。对氨基苯甲酸含量在0%～0.28%之间具有线性关系。验证试验表明方法简单、可行。可满足对氨基苯甲酰胺中对氨基苯甲酸含量的测定。

關 键 词：对氨基苯甲酰胺;对氨基苯甲酸;高效液相色谱

中图分类号：O 657 文献标识码： A 文章编号： 1671-0460（2015）06-1435-03

Determination of 4-Aminobenzoic Acid in p-Amino-Benzamide

WANG Feng-li，NIE He-jun，XIONG Yong-ke，CHEN Wei-qiang

（Lily Group Co.，Ltd.， Zhejiang Hangzhou 311228，China）

Abstract： TLC＼UV＼IR were used to prove the existence of 4-aminobenzoic acid in p-amino-benzamide. The separating conditions were decided by condition tests. The pH of mobile phase was adjusted by ammonium acetate， mobile phase was methanol 20%（V/V）. Quantitative content was determined by external standard method. The results show that 4-aminobenzoic acid （0%～0.28%） in p-amino-benzamide can be determined by this method. The method is simple， rapid， accurate and can meet the requirement for determination of 4-aminobenzoic acid in p-amino-benzamide.

Key words： P-amino-benzamide; 4-aminobenzoic acid; HPLC

对氨基苯甲酰胺（DB-70）即红色基DB-70，（以下以DB-70表示）是重要的有机颜料中间体，是颜料红170的主要原材料[1]。DB-70通常以对硝基苯甲酸为原料，经过酰氯化、氨解、还原反应制成[2]。对氨基苯甲酸易在氨解过程产生，它能够与DB-70一起重氮化，与偶合组分偶合生成有色物质，对颜料的纯度、颜色性能甚至应用性能等产生影响。并且其本身为双官能团化合物，也可以与芳胺类偶合，生成偶氮染料[3]和偶氮颜料[4]。因此测定其中对氨基苯甲酸的含量对生产应用具有重要意义。

DB-70中对氨基苯甲酸含量通常用薄层色谱法测定。该法萃取及分离时间较长，显色需经过重氮化、偶合反应，容易产生有毒氮氧类气体;并且使用高浓度的酸，产生酸雾，对测试环境及操作者造成不良影响。依靠斑点的大小及颜色的深浅判定含量，量化准确度较差。

化妆品中的对氨基苯甲酸类物质色谱法测定已有报道[5]。本文把高效液相色谱法应用于DB-70中对氨基苯甲酸的测定，用外标法进行定量。测试快速、结果准确，过程安全，环保。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

1.1.1 试剂

DB-70（工业样品）;对氨基苯甲酸标准品;甲醇（色谱纯）;乙酸铵、异丙醇、甲苯、氨水、亚硝酸钠、盐酸、N-（1-萘基）-二氯乙二胺均为分析纯试剂;GF254薄层硅胶板（制备板）。

1.1.2 仪器

三用紫外分析仪（ZF-2）;真空泵（AP-9925）;超声波清洗器（KUDOS）;红外光谱仪（PE SPECTRU TWO）;高效液相色谱仪（LC-20AD，DAD 检测器，ODS C18柱， 5 μm×4.6 mm×250 mm）。

1.2 试验方法

1.2.1 定性试验

用TLC方法把DB-70中主杂质进行分离，通过显色找出待测杂质位置。用硅胶制备板分离出对氨基苯甲酸，制取试验溶液。同样方法配制对氨基苯甲酸标准品，作为标准溶液。

对试验溶液和标准溶液分别用HPLC和IR测试。通过HPLC出峰位置，及对应位置峰提取的UV图，以及IR图来确定试验溶液的成分。

1.2.2 定量试验

通过条件试验优化流动相组成，选取最佳分离条件。

称取0.5 g样品，用甲醇溶解并定容到50 mL，作为样品溶液。在选定的HPLC分离条件进行测定。以对氨基苯甲酸标准品配制标准溶液，用外标法，用峰面积计算其含量。

2 结果和讨论

2.1 谱图定性分析

2.1.1 HPLC图（图1）

图1 标准溶液HPLC图

Fig.1 HPLC spectrum of standard sample

图2中，试验溶液在～4.1 min出峰（其中～6.2 min的微量峰为DB-70），与图1中对氨基苯甲酸标准品出峰位置吻合。

图2 试验溶液HPLC 图

Fig.2 HPLC spectrum of sample

2.1.2 UV 吸收结果

分别提取图1、图2及图3中～4.1 min处峰对应的UV图，其紫外吸收相同，最大吸收波长均为265 nm。斑点位置的杂质与对氨基苯甲酸标准品的紫外吸收一致。

2.1.3 IR测试结果

用液膜法，在4 000 ～450 cm-1对试验溶液进行扫描。结果显示，特征峰位置（cm-1）：3 460;3 390;3 360;1 660～1 575;1 355;1 180;845，与对氨基苯甲酸特征峰匹配。

综合2.1.1、2.1.2、2.1.3，可以判定DB-70中主杂质为对氨基苯甲酸。

2.2 DB-70中对氨基苯甲酸含量的测定

图3为车间生产的DB-70工业品的HPLC图。对氨基苯甲酸含量以～4.1 min峰的峰面积，用外标法测定。

图3 DB-70的HPLC图

Fig.3 HPLC spectrum of p-amino-benzamide

2.2.1 色谱条件的选择

在现有仪器条件，通过对流动相的选择优化分离条件。

考虑到DB-70及对氨基苯甲酸结构中含有路易斯酸碱基團，向流动相中加入缓冲盐调节其pH值，使被测物质以单一的形态存在于体系中。本研究中选择乙酸铵进行调节。

在C18反相色谱中，流动相中有机成分比例对大多数待测组分的保留行为影响较大。30%（V/V）甲醇作流动相，DB-70与对氨基苯甲酸重叠。而10%（V/V）甲醇体系中，分离效果较好，但出峰较慢，甚至部分其它杂质成分不能洗出。考虑分离效果及操作时间，选定20%（V/V）比例的有机相组成。

UV图显示，该体系中对氨基苯甲酸的最大吸收波长为265 nm，DB-70的最大吸收波长271 nm，综合其它杂质成分的紫外吸收特性，选定270 nm作为定量的波长。

最终确定测试的色谱条件为：

柱温箱：35 ℃

流速：0.8 mL/min

流动相：（甲醇：0.2%乙酸铵溶液=20：80，V/V）

HPLC图提取波长：270 nm。

2.2.2 测量范围的确定

以对氨基苯甲酸的线性范围作为测量范围选择的依据。

图4中，对氨基苯甲酸含量在0～2 800 mg/kg，即不超过0.28%范围内，相关系数达到0.999 1，有很好的线性关系，能满足工业DB-70中对氨基苯甲酸含量测定的需求。

图4 对氨基苯甲酸线性范围

Fig.4 Linear range of 4-aminobenzoic acid

注释：TLC评级是通过薄层分离显色后，以对照品批次的杂斑点颜色为参考，样品批次的杂斑点与之相比较，根据颜色深浅评定为不同的等级，颜色越深级别越高。

2.2.3 可行性试验

同时对5个不同生产批次和1个对照品批次的的DB-70样品中对氨基苯甲酸进行薄层显色评级和本法测定含量进行比较（表1）。

表1中TLC评级与测出的对氨基苯甲酸含量高低相对应，说明该法测定可行。

3 结束语

通过标准物质对照，借助UV、HPLC、IR手段确定待测组分为对氨基苯甲酸。用乙酸铵调节流动相的pH值，以20%（V/V）的甲醇作流动相，能够使DB-70中的杂质完好分离。用峰面积进行定量，可以快速准确的测定其中对氨基苯甲酸的含量，该法也可推广运用于DB-70中其它杂质成分的测定。

本研究中使用的HPLC使用的DAD检测器，可以用UV检测器，固定检测波长进行测定。测试中使用的其它试剂、仪器等也比较大众化，宜于测定方法的推广。

参考文献：

[1] 周春隆，穆振义.有机颜料化学与工艺学[M].修订版.北京：中国石化出版社，2002：335.

[2] 喻素娟， 栾永勤，周飞舟，等.对氨基苯甲酰胺合成方法研究[J].化工时刊，1998，12（7）：19-20.

[3] Riesz E. Bull. [J].Sc. Inst. Text. Fr. ，1982，11（43）：61-63.

[4] Keys B A ， Ouderirk J T. PCT Int. Appl： WO，8910385[P].

[5] 张可冬，李慧勇，谭建华，等.高效液相色谱法测定化妆品中9种对氨基苯甲酸及其酯类防晒剂[J].分析试验室，2014，33（9）：1108-1113.