不同剂量的环磷酰胺诱导小鼠卵巢功能衰退程度的差异

陈云 郭荣

【摘要】目的比较不同剂量的环磷酰胺诱导小鼠卵巢功能衰退的差异，提供适宜的卵巢功能衰退动物实验模型模型。方法8～10周雌性BALB/C小鼠腹腔注射不同剂量的环磷酰胺，观察一般情况、动情周期和各级卵泡数量变化。以未注射环磷酰胺的小鼠为对照。结果各模型组与正常组相比动情周期延长（P<0.05），其中90mg/kg组与正常组比较性周期延长更加明显、无规律（P<0.01）。与正常组相比，各模型组小鼠均出现不同程度的精神萎靡，活动减少，个别小鼠出现易激惹，毛发无光泽，其中90mg/kg组小鼠与正常组相比在造模后3天内体重下降（P<0.05）。各模型组与正常组相比始基卵泡数量明显减少（P<0.05）。结论一次性腹腔注射环磷酰胺可以不同程度的诱导小鼠卵巢功能衰退，其中一次性注射环磷酰胺90mg/kg引起卵巢功能衰退的程度最大，在高存活率的基础上能更好的形成卵巢功能衰退动物实验模型。

【关键词】环磷酰胺；小鼠；卵巢功能衰退；动物模型

【中图分类号】R155【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2015）01-0013-01

环磷酰胺（CTX）为氮芥类双功能烷化剂，是临床上常用的抗肿瘤药物，CTX在提高肿瘤患者生存率的同时，也严重影响女性患者卵巢功能，有研究[1]指出环磷酰胺具有高危性性腺毒性作用，可导致女性患者出现卵巢早衰，影响生育能力及日常生活[2]。赖宝玲[3]随访了化疗后6～120个月（平均24个月）的乳腺癌、淋巴瘤、骨髓移植患者140例，对其卵巢功能进行回顾性分析，在化疗过程中/后，85.7%患者曾出现闭经或月经不规则，78.6%患者曾出现过至少一组更年期症状，化疗后平均24个月，仍有55%患者闭经，25%患者月经不规则，65.7%患者存在至少一组更年期症状。化疗药物虽然提高了患者生存率，但对卵巢功能的影响也大大降低了患者的生活质量。如何在化疗的同时保护卵巢功能是急需解决的问题。本实验采用不同剂量的环磷酰胺诱导小鼠卵巢功能衰退，为深入研究卵巢功能衰竭的发病机制和治疗方法提供可靠的动物实验模型。

1材料与方法

1.1药物注射用环磷酰胺（BaxteroncologyGmbH生产，批号：2K683A），注射时用生理盐水配置成50mg/kg、70mg/kg、90mg/kg。

1.2动物与分组8～10周龄雌性BALB/C小鼠适应性喂养一周后，观察动情周期一周，选用32只有正常动情周期的小鼠，随机分为正常对照组、50mg/kg、70mg/kg、90mg/kg，除正常组外均采用一次性腹腔注射环磷酰胺0.3ml。2周后处死小鼠。

1.3观察指标

1.3.1观察小鼠动情周期变化每天早上9：00取小鼠阴道脱落细胞涂片，于光学显微镜下观察动情周期变化。

1.3.2观察小鼠一般情况变化观察小鼠精神、活动情况及体重变化情况。

1.3.3观察小鼠卵巢组织形态学变化取卵巢组织常温下4%多聚甲醛固定，每隔5张进行切片、HE染色，于光学显微镜下计算各组卵泡数量。

1.4統计分析使用SPSS17.0统计软件进行统计学分析，采用单因素方差分析检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1不同剂量的环磷酰胺对小鼠动情周期的影响。与正常组小鼠比较性周期延长、紊乱（P<0.05），其中90mg/kg组与正常组比较性周期延长更加明显、无规律（P<0.01），主要表现为动情间期延长，个别表现为持续的动情期（2～3天）。（见表1）

3讨论

雌性小鼠性成熟后的动情周期一般为4～5天，分为动情间期、动情前期、动情期及动情后期[4]。阴道上皮细胞的周期性变化反映了卵巢性激素周期性分泌情况，本研究中各模型组与正常组相比动情周期延长，其中90mg/kg组与正常组比较性周期紊乱更加明显、无规律，表现为动情间期延长或持续的动情期，动情周期紊乱说明了卵巢性激素分泌功能受到损害，这是卵巢功能衰退模型建立成功的证明[5]。通过各级卵泡计数结果发现，各模型组与正常组相比始基卵泡数量减少约一半，90mg/kg组各级卵泡数目均减少，表明原始卵泡被大量杀伤。卵巢中原始卵泡的数量是一定的，当原始卵泡池中的卵泡因募集、凋亡而不断减少最终耗竭时，卵巢就不会排卵，在人类就会丧失生育力[6]。。通过观察一般情况发现，各模型组小鼠均出现不同程度的精神萎靡，活动减少，个别小鼠出现易激惹，毛发无光泽，其中90mg/kg组小鼠与正常组相比在造模后3天内体重下降。综上所述可发现，小鼠出现精神萎靡、皮毛光泽度下降、动情周期紊乱，原始卵泡数量的明显下降，与文献报道一致[7]，说明一次性腹腔注射环磷酰胺可以不同程度的诱导小鼠卵巢功能衰退，其中一次性注射环磷酰胺90mg/kg引起卵巢功能衰退的程度最大，在高存活率的基础上能更好的形成卵巢功能衰退动物实验模型。

参考文献

[1]罗璐等.环磷酰胺对成年大鼠卵巢的损伤以及GnRHR在卵巢的表达.[J]南方医科大学学报，2007；27（11）：1714-1717.

[2]杨岫岩，朱旬.重视在风湿病治疗中卵巢的功能.[J]中华风湿病学杂志，2003，7（2）：65-67.

[3]赖宝玲.化疗对卵巢功能的影响.中山大学2007届硕士学位论文.

[4]翟青新，招霞等.小鼠的生殖特性及阴栓.[J]实验动物科学，2009，26（2）：62-67.

[5]李珂，补肾健脾调肝法治疗卵巢早衰及对POF模型大鼠血清INHB、VEGF的影响.广州中医药大学2003届博士学位论文.

[6]李倩.PIK3p110delta催化亚基在小鼠卵巢卵泡生长中的功能研究.南京医科大学2010届博士学位论文.