野菠菜叶总黄酮提取工艺

许福泉，朱强，郭雷，赵雨

（淮海工学院江苏省海洋生物重点建设实验室，江苏连云港222005）

野菠菜叶总黄酮提取工艺

许福泉，朱强，郭雷，赵雨

（淮海工学院江苏省海洋生物重点建设实验室，江苏连云港222005）

为探索野菠菜黄酮提取工艺，提高总黄酮提取率。利用正交试验考查不同粒度、料液比、乙醇浓度、提取时间、提取温度下总黄酮浓度，得到最佳提取工艺为：粒度40目、料液比1∶30（g/mL）、提取时间1 h、乙醇溶液体积分数75%，在该工艺下，野菠菜总黄酮得率为3.216 mg/mL。

野菠菜；总黄酮；提取工艺

野菠菜（Rumex maritimus L.）为蓼科（Polygonaceae）酸模属（Rumex）植物，广泛分布于江苏省连云港市滩涂地区，具有悠久的药用和食用历史。酸模属全球约有150种，我国有26种，两个变种［1］。16种被记载于《神农本草经》、《本草纲目》等典籍中，其中羊蹄、巴天酸模等具有清热解毒、通便杀虫等功效，民间常用作“土大黄”［2-3］。酸模植物中黄酮含量较高、结构变化小，目前已分离得到34个单体化合物［4-5］，具有抗菌［6］、抗肿瘤［7］等多种药理活性。虽然酸模属植物研究报道较多，但野菠菜目前报道较少，仅有关于其提取物止泻作用报道［8］，尚少见关于其黄酮成分、提取工艺、活性的研究报道，更未见滩涂高盐环境下野菠菜黄酮研究报道。基于活性黄酮成分进行提取工艺研究不仅有助于野菠菜药用开发，也能为相关保健食品研究提供参考［9-10］。本文拟利用正交试验优化野菠菜叶总黄酮提取工艺，为滩涂植物野菠菜高效利用提供实验参考。

1材料与方法

1.1 材料与试剂

野菠菜2013年4月采自江苏连云港滩涂，由淮海工学院海洋学院朱强实验师鉴定为蓼科酸模属植物野菠菜（Rumex maritimus L.），取干燥叶片作为实验材料；去离子水由Millipore（美国）自制；芦丁标准品购自国药集团；无水乙醇、氢氧化钠、硝酸铝等均为国产分析纯。

1.2 仪器与设备

Lambda35紫外—可见分光光度计：美国Perkin Elmer公司；R3旋转蒸发仪：瑞士Buchi公司；EL104电子分析天平：法国Mettler Toledo公司；DZF-6020真空干燥箱：上海飞越实验仪器有限公司。

1.3 芦丁标准曲线

按文献［11］方法建立芦丁标准曲线。

1.4 样品提取

1.4.1 脱叶绿素

样品按料液比1∶10（g/mL）加乙醚冷浸30 min后，取出，通风条件下放置10 min，乙醚挥发完全后待用。

1.4.2 总黄酮提取

野菠菜叶40℃下烘干、粉碎后经不同型号筛处理，收集相应粒度组分并存放于干燥器中。准确称取不同粒度原料5.0 g按料液比不同加入溶剂，称重后热回流提取，提取结束加溶剂补足失重后按料液比不同分别量取20、25或30 mL提取液，45℃减压回收溶剂（试验因素水平见表1）。浸膏超声溶解后定容于25 mL容量瓶中，作为待分析样品。

表1 正交试验L9（34）因素水平表Table 1Factors and their levels in L9（34）orthogonal array design

1.5 单因素试验

固定其他因素水平情况下，分别研究粒度、料液比、提取时间、乙醇溶液体积分数对野菠菜总黄酮提取的影响。

2结果与分析

2.1 芦丁标准曲线

芦丁浓度C与吸光度A的线性回归方程为：A= 7.984 1X+0.000 4，r=0.999 2。

2.2 单因素试验结果

粒度40目最适合进行野菠菜黄酮提取；料液比越高越有利于黄酮提取，因此选择1∶30（g/mL）；而提取时间增加，总黄酮浓度反而小幅下降，提取1 h效果较好；另外，乙醇溶液体积分数75%时，最有利于总黄酮提取。单因素试验结果见图1。

图1 单因素对总黄酮浓度的影响Fig.1Effect of extraction process on total flavonoids

2.3 正交试验结果

正交试验结果见表2。

表2 L9（34）正交试验设计及结果Table 2L9（34）orthogonal array design arrangement and experimental results

由表2可知，影响总浓度因素的大小顺序为D＞A＞C＞B，即乙醇溶液体积分数＞粒度＞料液比＞＞提取时间，K值分析可知，最佳组合水平为A2B1C3D2。

2.4 验证性实验

根据正交试验结果确定最佳组合水平为A2B1C3D2，即粒度40目，料液比1∶30（g/mL），提取时间1 h，乙醇浓度75%，按上述水平提取三次后得到总黄酮浓度的平均值为3.216 mg/mL，其总浓度高于正交试验结果。

3结论

野菠菜在连云港滩涂分布广泛，为建立野菠菜总黄酮提取工艺，本实验以总黄酮浓度为指标，通过正交试验得到野菠菜总黄酮提取工艺：粒度40目，提取时间1h，料液比1∶30（g/mL），乙醇溶液体积分数75%。这是首次关于野菠菜总黄酮提取工艺的研究报道，这能为野菠菜应用研究提供参考。

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［10］ANDROUTSOPOULOS V P，PAPAKYRIAKOU A，VOURLOUMIS D，et al.Dietary flavonoids in cancer therapy and prevention：Substrates and inhibitors of cytochrome P450 CYP1 enzymes［J］.Pharmacology&Therapeutics，2010，126（1）：9-20

［11］扶庆权，侯佩，陈能.响应面法优化芦蒿叶总黄酮的提取工艺［J］.食品科学，2013，34（4）：94-98

Process Optimization for Extraction of Flavonoids from Leaves of Rumex maritimus

XU Fu-quan，ZHU Qiang，GUO Lei，ZHAO Yu
（Jiangsu Key Laboratory of Marine Biotechnology，Huaihai Institute of Technology，Lianyungang 222005，Jiangsu，China）

To develop a optimal process for improving the total flavonoids concentration from Rumex maritimus，the effects of granularity，ethanol concentration，soaking time and material-liquid ratio on extraction rate of total flavonoids were investigated by orthogonal array design methods.The optimal extraction processing parameters were granularity of 40 mush，material-liquid ratio of 1∶30（g/mL），extraction time of 2 h and ethanol concentration of 75%，and the yield rate was 3.216 mg/mL under this extraction condition.

Rumex maritimus；total flavonoid；extraction process

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.016

2014-10-25

江苏省滩涂资源与环境保护重点实验室课题（JLCBE13001）；淮海工学院校课题（Z2012023）

许福泉（1979—），男（汉），讲师，博士，研究方向：天然活性成分。