S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗对山羊免疫效果比较试验

鲁志平，杨晓玲，申晓莉，黄园媛，朱　波，叶　春，谭春青

（1.遂宁市动物疫病预防控制中心，四川 遂宁　629000；2.四川省大竹县动物疫病预防控制中心）

S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗对山羊免疫效果比较试验

鲁志平1，杨晓玲2，申晓莉2，黄园媛2，朱波2，叶春2，谭春青1

（1.遂宁市动物疫病预防控制中心，四川 遂宁629000；2.四川省大竹县动物疫病预防控制中心）

通过对36只不同日龄、不同性别的健康山羊（含妊娠母羊6只）随机平均分组，分别口服S2株、M5株布氏杆菌减毒活疫苗后，在7 d、14 d、21 d、42 d、90 d对血液中布氏杆菌抗体进行检测，对S2、M5诱导的抗体消长动态进行分析及疫苗安全性评价，最终研究确定出S2可适用于不同日龄、不同性别山羊广泛使用，也适用于妊娠期间山羊的免疫，能有效预防布病的发生，减少由此导致的经济损失；M5可引起妊娠母羊免疫副反应及严重的流产症状。

S2株布氏杆菌减毒活疫苗；M5株布氏杆菌减毒活疫苗；免疫效果

布鲁氏菌是一种细胞内寄生的病原菌，主要侵害动物的淋巴系统和生殖系统，是一种重要的人畜共患病，OIE将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。病畜主要通过流产物、精液和乳汁排菌，污染环境。该病以引起雌性动物流产、不孕及雄性动物出现睾丸炎等为主要特征。人感染该病后，表现为长期发热、多汗、关节痛、神经痛及肝、脾肿大等症状。该病严重威胁着人和多种动物的生命健康［1］。

目前该病控制主要是以“检疫净化”为主的综合防控措施，其中也包括对重点疫区的易感动物接种疫苗，为了筛选确定针对不同年龄段山羊及妊娠母羊可以同时使用的布氏杆菌安全疫苗，该研究通过对2月龄至6月龄、10月龄至12月龄试验山羊按照试验要求分组后分别口服免疫S2株布氏杆菌减毒活疫苗、M5布氏杆菌株减毒活疫苗，测定免疫后不同时期各组试验山羊接种免疫后血清中抗布氏杆菌特异性抗体的消长规律及安全性，为科研以及基层兽医工作者提供参考。

1　材料与方法

1.1试验动物

选2月龄至6月龄雌雄各半、体质量相当的同一品种健康山羊18只，随机分成3组，每组6只，分别为第1组、第2组、第3组，其中第1组为免疫S2株布氏杆菌减毒活疫苗（S2）组，第2组为免疫M5布氏杆菌株减毒活疫苗（M5）组，第3组为空白对照组；选10～12月龄体质量相当的同一品种健康母山羊18只，其中妊娠期母羊9只，随机分成3组，每组6只（含妊娠母羊3只），分别为第4组、第5组、第6组，其中第4组为免疫S2组，第5组为免疫M5组，第6组为空白对照组。以上试验山羊每组均单独隔离饲养，垫草垫料、粪便及废弃物无害化处理。

1.2试剂及疫苗

布病虎红平板凝集试验（RBPT）抗原和布氏杆菌病试管凝集试验（SAT）抗原、阳性对照、阴性对照均由中国疾病预防控制中心传染病和流行病研究所生产；S2株布氏杆菌活疫苗购自金宇保灵生物药品有限公司，每头份含布氏杆菌弱毒活菌100亿CFU；M5株布氏杆菌活疫苗购自新疆天康畜牧生物技术股份有限公司，均在有效期内使用。

1.3疫苗免疫剂量及方法

按照每年接种1次疫苗的程序进行免疫，采取口服方式进行免疫，即用灭菌生理盐水按使用说明稀释疫苗后以投药器喷注到山羊舌根及咽喉部。第1组试验山羊口服S2量为100亿CFU/只，第2组试验山羊口服M5量为25头份/只，第3组试验山羊不免疫，第4组试验山羊口服S2量为100亿CFU/只，第5组试验山羊口服M5量为25头份/只，第6组试验山羊不免疫。

1.4疫苗的安全性及免疫效果比较

第1组、第4组与第2组、第5组试验山羊分别口服免疫活疫苗S2、M5后，分别在免疫前1 d、免疫后7 d、14 d、21 d、42 d、90 d对所有试验山羊采集血液分离血清，定性（RBPT）和定量（SAT）检测血清中的布氏杆菌抗体水平，按GB/T18646-2002规定的程序操作，了解两种活疫苗分别诱导山羊机体的抗体消长动态，并记录各组试验山羊的免疫反应情况及妊娠母山羊流产情况。

2　结果

2.1疫苗的安全性比较

第1组试验山羊免疫S2后，未观察到任何免疫副反应，包括发热、呼吸困难、食欲下降等症状；第2组试验山羊免疫M5后，有1只试验山羊出现了食欲下降等轻微免疫副反应症状；第3组空白对照组山羊均未出现任何症状。结果表明S2株布氏杆菌减毒活疫苗对于2～6月龄山羊口服接种是安全的，M5会引起个别山羊出现免疫副反应。

第4组试验山羊免疫S2后，未观察到任何免疫副反应，包括发热、呼吸困难、食欲下降、流产等症状；第5组试验山羊免疫M5后，所有的试验妊娠母山羊均出现了流产症状；空白对照组羊均未出现任何症状。结果表明S2株布氏杆菌减毒活疫苗对于10～12月龄山羊口服接种是安全的，并能有效减少羊群流产、死胎，减少能繁母羊因流产、死胎导致的经济损失，M5会引起妊娠母山羊出现流产症状。

2.2疫苗的免疫效果比较

2.2.1第1组、第2组试验山羊分别免疫S2与M5后抗体消长情况

图1　第1组、第2组试验羊分别免疫S2、M5后各时期血清的SAT几何平均效价

第1组、第2组试验山羊经S2、M5免疫后，通过采血应用RBPT、SAT两种检测方法测定抗体消长动态，结果基本一致。空白对照组均没有免疫应答产生；通过SAT定量检测，见图1，1组、2组试验山羊免疫前后血清抗体滴度出现了明显变化，第7 d几何平均效价均达到最高，并达到峰值，随后1组试验山羊抗体效价逐渐下降，90 d后接近1∶50临界值。2组试验山羊抗体效价峰值从7 d持续至14 d后逐渐下降，90 d后个别试验山羊抗体效价滴度＜1∶50。

2.2.24组、5组试验山羊分别免疫S2与M5后抗体消长情况4组、5组试验山羊经S2、M5免疫后，通过采血应用

RBPT、SAT两种检测方法测定抗体消长动态，结果基本一致。空白对照组均没有免疫应答产生；通过SAT定量检测，见图2，4组、5组试验山羊免疫前后血清抗体滴度出现了明显变化，第7天几何平均效价均达到最高，并达到峰值，随后4组试验山羊抗体效价逐渐下降，90 d后个别试验羊抗体效价滴度＜1∶50。5组试验羊抗体效价峰值从7 d持续至14 d后逐渐下降，90 d后接近1∶50临界值。

图2　4组、5组试验羊分别免疫S2、M5后各时期血清的SAT几何平均效价

2.2.31组、4组试验山羊分别免疫S2后抗体消长情况（见表1）

SAT方法测定的1组、4组山羊免疫S2后抗体消长动态与RBPT结果基本一致。空白对照组没有相应的免疫应答产生；由表1可知，两组试验羊免疫S2后7 d抗体水平达到峰值，83.3%的血清样本抗体效价为1∶400以上，90 d时，91.67%～100%的血清样本抗体效价达到1∶50以上。

表1　1组、4组试验山羊免疫S2后抗体消长动态

1组试验山羊免疫S2，免疫前后血清抗体滴度出现了明显的变化，见图3。免疫后7 d，抗体水平达到了峰值，随后逐渐下降，抗体水平到90 d后降低至有效保护下限；4组试验山羊免疫S2，血清抗体几何平均效价动态曲线与Ⅰ组基本一致，免疫后90 d个别试验羊失去有效保护性，几何平均效价＜1∶50。说明S2在不同年龄段山羊群体中使用，免疫效果及效价的产生时间、效价高低、消长趋势等方面无明显差异。

2.2.42组、5组试验山羊分别免疫M5后抗体消长情况

SAT方法测定的2组、5组试验山羊免疫M5后抗体消长动态与RBPT结果基本一致，空白对照组没有相应的免疫应答产生；两组试验山羊免疫M5后7～14 d抗体水平达到峰值，75.0%的血清样本抗体效价为1∶400以上，90 d时，91.67%～100%的血清样本抗体效价达到1∶50以上，在有效保护范围之内，见表2。

表2　2组、5组试验山羊免疫M5后抗体消长动态

图3　1组、4组试验羊免疫S2后各时期血清的SAT几何平均效价

2组试验羊免疫M5 7 d后抗体效价达到峰值并持续至14 d后逐渐下降，90 d时个别试验羊抗体水平下降至有效保护下限外；5组试验羊免疫M5后，血清抗体几何平均效价动态曲线基本与2组山羊组一致，免疫后90 d个别试验羊失去有效保护性，几何平均效价＜1∶50。3只妊娠母羊在7～21 d全部出现流产症状，流产率达100%。说明M5在不同年龄段山羊群体中使用，免疫效果及效价的产生时间、效价高低、消长趋势等方面无明显差异，但M5能引起妊娠期母羊发生流产，见图4。

图4　2组、5组试验羊免疫M5后各时期血清的SAT几何平均效价

2.2.5不同性别羊免疫S2、M5后抗体滴度消长情况（见图5和图6）

S2、M5在不同性别山羊群体中使用，免疫效果及效价的产生时间、效价高低、消长趋势等方面无明显差异，但M5能引起妊娠母羊流产。

3　分析与讨论

选择健康山羊，在试验接种疫苗前进行相关检疫，确定健康后方可使用，否则影响疫苗效果及试验结果。

图5　不同性别试验山羊免疫S2后血清的SAT几何平均效价动态图

图6　不同性别试验山羊免疫M5后血清的SAT几何平均效价动态图

该试验研究表明，S2、M5经口服免疫山羊后，免疫前后血清抗体滴度出现了明显变化，二者均在第7天时几何平均效价达到峰值，随后逐渐下降，3个月后个别山羊机体内抗体滴度＜1∶50，在保护范围之外。以上试验结果在羊的性别、年龄等方面无明显差异。根据该试验结果初步认为，S2、M5对山羊的免疫期约为3个月。下一步将对3个月之后山羊体内抗体的消长情况进一步跟踪检测，更加科学掌握山羊体内布病抗体衰减规律。

从以上免疫情况和免疫效果检测情况来看，S2、M5经口服免疫山羊后，二者就抗体产生时间、抗体滴度及抗体水平达到峰值时间、抗体衰减时间等方面无太大差异，就免疫效果和安全性而言，S2对羊的免疫效果是绝对可靠的，这与王季秋［2］等研究结果基本一致，可广泛用于山羊的布病免疫预防。M5可引起妊娠母羊严重流产，对除妊娠母羊外的其他山羊也可使用。

该次试验研究，只进行了S2、M5一次口服免疫后山羊布病抗体的跟踪检测，下一步将进行首免后1个月加强免疫一次的抗体跟踪检测，并通过口服免疫与其他免疫方式（喷雾、注射等）比较研究，以确定更加科学的免疫程序。因此，该研究为大面积推广S2预防山羊布病提供了科学依据，为养羊业的发展和人群健康提供科学依据。

［1］李金平，张继红，符玉娟.布鲁氏菌病的预防与控制［J］.新疆畜牧业，2006，（3）：40.

［2］王季秋，张玉林.S2苗免疫牛、羊安全性及抗体消失规律的观察［J］.中国地方病防治杂志，1993，8（5）：313.

S858.27

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1004-5090（2015）12-0007-03

2015-09-18）