小儿轮状病毒感染免疫应答的研究

任晓兰

[摘要] 目的 对小儿轮状病毒感染的免疫应答进行研究。方法 以该院2014年1月—2015年3月收治的62例轮状病毒感染患儿作为观察组，以同期在该院进行健康体检的60例小儿作为对照组，对比两组研究对象的抗原及粪便标本与血浆中的特异性抗体，并检测轮状病毒基因类型。结果 观察组62例患儿的粪标本中的轮状病毒分型P型中Ps型所占比例最高，为82.26%，G分型中以G3所占比例最高，为79.03%，P<0.05，差异具有统计学意义。观察组患儿的CD19+细胞比例明显高于对照组，CD4+比例明显低于对照组，P<0.05，差异具有统计学意义。同对照组相比，观察组患儿的外周血单个核细胞IFN-γ mRNA表达水平在发病3 d内出现明显升高，P<0.05，差异具有统计学意义。IL-12p40 mRNA在疾病构成中均明显高于对照组，P<0.05，差异具有统计学意义。 结论 轮状病毒感染患儿的免疫应答中以特异性体液免疫为主，特别是黏膜免疫显著性增强。

[关键词] 轮状病毒感染；免疫应答；儿童

[中图分类号] R725.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）08（c）-0103-03

Study of Immune Response to Rotavirus Infections in Children

REN Xiao-lan

Department of Pediatrics， Qingdao Third Peoples Hospital， Qingdao， Shandong Province， 266000 China

[Abstract] Objective To study the immune response to rotavirus infections in Children. Methods 62 children with rotavirus infections admitted to our hospital and 60 other children who taken physical examination here between January 2014 and March 2015 were assigned to observation group and control group respectively to compare the antigen and the specific antibodies in feces and plasma between the two groups and determine the gene types of rotavirus. Results In the observation group， in P and G type rotavirus from feces specimens， P8-type and G3-type were most prominent， accounting for 82.26% and 79.03%， respectively， and the differences were statistically significant， P<0.05. The proportion of CD19+ Cells were higher and that of CD4+ lower in the observation group than in the control group， and the differences were statistically significant， P<0.05. Compared with the control group， IFN-γ， and mRNA expression in peripheral blood mononuclear cells in the observation group increased significantly within 3 days after onset， and the difference was statistically significant，P<0.05. IL-12p40 and mRNA in the diseases constitution were higher in the observation group than in the control group with statistical differences， P<0.05. Conclusion Immune response to rotavirus infections in children is mainly specific humoral immune response， especially that of mucosal immune.

[Key words] Rotavirus； Immune response； Children

轮状病毒为导致儿童严重脱水腹泻的重要病原体，全世界每年有100万左右的患儿死于该病[1]。因为轮状病毒会首先损害肠道黏膜上皮细胞，免疫反应主要表现为典型黏膜免疫反应特点[2-3]。为了对小儿轮状病毒感染的免疫应答特点进行分析探讨，笔者对该院62例患儿的临床资料进行回顾性分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2014年1月—2015年3月期间，该院共收治62例轮状病毒感染患儿，其中男38例，女24例；年龄为4～30个月，平均年龄为（16.4±2.8）个月；每日排便次数为1～24次，平均（8.4±1.7）次。以同期在该院进行健康体检的60例小儿作为对照组，其中男32例，女28例，年龄为6～38个月，平均（18.6±4.7）个月。两组研究对象的性别、年龄等基本资料差异无统计学意义，P>0.05，有可比性。

1.2 检验方法

①外周单个核细胞分离：在采集肝素抗凝血之后，加入等量的Ficoll分离液，离心20 min，取上层血浆存入-70℃冰箱中保存。将中间层细胞吸出，以氯化钠溶液（0.9%）进行冲洗，离心10分钟，留细胞沉淀。

②淋巴细胞亚群检测：采集50 μL肝素抗凝血，加入荧光标记体，然后混合均匀，于室温下避光30 min，加入450 μL溶血剂，混合均匀之后，静止20 min，进行流式细胞仪检测。

③细胞因子基因表达检测：将TRIzol1mL加入外周血单个细胞沉淀，于室温条件下保存5 min，加入氯仿200 μL，剧烈摇晃20 s，静止5 min。取上层置入Eppendorf管，再加入异丙醇500 μL，混合均匀，于室温条件下静止10 min，离心10 min。取上清液，以乙醇（70%）洗一次，离心5 min，在沉淀晾干后，加入3 μLDEPC水，检测260 nm与280 nmA值。

1.3 观察指标

以SPSS 22.0软件对所得数据进行处理分析，对计数资料以χ2检验，以例数百分比的形式表示，对计量资料以t检验，以（x±s）的形式表示，当P<0.05时，差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 轮状病毒基因型检测结果

观察组62例患儿的粪标本中的轮状病毒分型P型中P8型所占比例最高，为82.26%（51/62）（χ2=7.742，8.105，P<0.05），G分型中以G3所占比例最高，为79.03%（49/62），（χ2=7.085，11.383，P<0.05），差异具有统计学意义，见表1。

表1 观察组患儿粪便的轮状病毒基因分型（n=62）

2.2 两组研究对象的淋巴细胞亚群测定结果

观察组患儿的CD19+细胞比例明显高于对照组，CD4+比例明显低于对照组，P<0.05，差异具有统计学意义，见表2。

2.3 外周血单个细胞因子mRNA表达变化

同对照组相比，观察组患儿的外周血单个核细胞IFN-γ mRNA表达水平在发病3 d内明显升高（χ2=10.994，P<0.05），差异具有统计学意义。两组研究对象的IL-2、IL-4及IL-10水平无显著性变化（t=0.014，0.106，0.004，P>0.05），见表3。

3 讨论

观察组患儿的轮状病毒的主要结构蛋白为VP4与VP7，其中VP7为外壳糖蛋白，是主要中和抗原[4]。按照VP7差异可将轮状病毒分为14个不同G型，临床常见性婴幼儿轮状病毒有G1、G2、G3及G4[5]。该研究中，观察组患儿的G分型主要有G3，比例约占79.03%。VP4为另一种糖蛋白，可诱导中和抗体，常见类型主要有P4、P6及P8型[6]。该研究中，P分型主要以P8为主，比例约为82.26%。

该研究中，观察组患儿在感染轮状病毒之后，外周血的主要淋巴细胞比例出现明显变化，主要表现为CD19+细胞比例为（30.6±7.5）%，符合相关文献报道[9]，且明显高于对照组的（23.3±7.4）（P<0.05）。原因为，患儿在感染轮状病毒之后，免疫系统会经识别病原体来激活免疫反应，如产生特异抗体、激活T细胞等[7]。因为轮状病毒会首先对肠道黏膜的上皮细胞造成侵犯，产生IgG、IgA及IgM三类抗体。这三类抗体抑制用作轮状病毒免疫应答的主要评价指标，其中产生IgA抗体是重要特点[8]。

血浆与粪便标本中的轮状病毒特异性IgA抗体水平同患儿病情程度有密切关系。每天排便次数5次以上、腹泻时间超过6 d的患儿的粪便标本中的IgA抗体的滴度更高。临床上关于轮状病毒感染患儿的临床特点及特异性抗体的报道比较少，且因人种、地区、血样采集时间等不同，结论不同。研究指出[10]，腹泻严重患儿的肠道上皮细胞内可能会有更多的轮状病毒增殖及感染，并且会对局部淋巴细胞造成刺激，引发免疫反应，进而引发更多IgA抗体。小儿的幼龄阶段会感染多次轮状病毒，前次严重腹泻者，可有效降低下一次病情程度。

综上所述，小儿轮状病毒感染病情严重者的IgA水平更高，能够对患儿再次感染轮状病毒进行有效抵抗。

[参考文献]

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[8] 周金芳，钟红平.炎琥宁联合更昔洛韦治疗小儿轮状病毒感染性腹泻的临床疗效[J].现代药物与临床，2014，29（7）：795-798.

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[10] 胡海珍.更昔洛韦治疗小儿轮状病毒性肠炎 30 例观察[J].上海预防医学杂志，2011，32（4）：181-184.

（收稿日期：2015-05-15）