市售不同加工方法当归的GC-MS分析△

魏文龙，黄林芳

(中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193)

·中药农业·

市售不同加工方法当归的GC-MS分析△

魏文龙，黄林芳*

(中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193)

目的：开展不同加工方法对市售当归药材中挥发油含量影响的研究，为建立当归药材合理的加工工艺提供科学依据。方法：收集不同加工处理的当归药材，运用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)测定挥发油含量，应用含量数据进行主成分分析(PCA)。结果：烟熏和晒干处理的当归品质较优，硫熏和酒炙品质较差；硫熏、酒炙和晒干三种加工处理的当归药材能够明显区分开，烟熏与晒干较接近；挥发油中鉴定出22个化合物，其主要成分藁本内酯、邻苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎内酯A的相对含量分别为53.55%、23.66%、3.89%、4.20%、2.06%、2.88%。结论：该研究探究不同加工方法对当归药材挥发油含量影响，为硫熏工艺规范化奠定基础。

当归；加工方法；成分含量；GC-MS

当归为伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，性温，味甘、辛，具有补血活血调经止痛润肠通便之功效[1]。苯酞类化合物为当归挥发油中主要活性成分，现代药理实验研究表明此类化合物具有抗血栓、平喘、镇痛、抑制平滑肌痉挛等广泛药理作用[2-4]。药材生产加工工艺会对药材质量产生很大影响，从而影响临床疗效。不同的种植户采用不同的方法干燥，除传统烟熏外，还有晒干、阴干等方法，其产地加工无规范的指南，存在一定的盲目性和随意性。近年来发现，在当归的主要产区甘肃，当地药农在加工过程中为了使药材色泽洁白和防腐，采用硫磺熏制的现象较为普遍[5-6]，而硫磺熏蒸会使药材中的化学成分发生改变，并伴有SO2残留，会严重影响到用药安全性[7-8]。本实验收集甘肃岷县当归药材市场上硫熏、烟熏、晒干、酒炙的药材，应用气象色谱-质谱联用技术(GC-MS)对其中的挥发性成分进行分析，测定药材中4种苯酞类成分含量，考察不同加工方法对药材化学成分的影响，从而为当归质量控制提供参考。

1 实验部分

1.1 仪器及试药

安捷伦6890气相色谱仪；氢火焰离子化检测器；HP-5石英毛细管气相色谱柱(HP公司，30 m×0.25 mm)；乙酸乙酯(分析纯，北京化工厂)，对照品，藁本内酯Ligustilide(批号：MUST-11072416)、正丁基苯酞n-Butylphthalide(批号：MUST-12020706)、丁烯基苯酞Butylidenephthalide(批号：MUST-12071103)、洋川芎内酯A senkyunolide A(批号：MUST-10102309)均购于成都曼思特生物科技有限公司，纯度经高效液相色谱分析大于98%。

当归药材统一购自甘肃省岷县当归城药材市场(见表1)，药材上部主根圆柱形，下部分出多条支根，表面棕黄色或黄褐色，断面黄白色或淡黄色，具油性，气芳香，味甘微苦，无须根、杂质、虫蛀、霉变。硫熏当归外表色泽金黄，闻起来有明显的硫磺味；晒干当归呈土褐色，无异味；烟熏当归表面黄褐色，香气浓；酒炙当归切面深黄色，味甘、微苦，香气浓厚，有酒香气(见表2)。

表1 不同加工方法当归药材列表

表2 不同加工处理当归外观及气味比较

1.2 对照品溶液制备

称取洋川芎内酯A，正丁基苯酞、藁本内酯、丁烯基苯酞6 mg于10 mL棕色容量瓶中，乙酸乙酯定容至刻度，混匀。

1.3 供试品溶液的制备

有机溶剂超声提取法：取干燥当归药材粉碎，过四号筛，精密称取粉末1 g于100 mL具塞锥形瓶中，加50 mL乙酸乙酯溶剂超声提取30 min，过滤，重复提取一次，合并提取液，离心上清液用定容于100 mL量瓶中，用0.22 μm微孔滤膜过滤，备用。

1.4 色谱条件

安捷伦6890气相色谱仪：50 ℃开始保留2 min，以10 ℃/min升至250 ℃，保留10 min，进样量1.0 μL，分流比1∶10；载气高纯N2，尾吹气高纯N2，气化室温度250 ℃，检测室温度250 ℃。

2 结果与讨论

2.1 线性关系考察

取标准品溶液至进样瓶中，分别进样1、2、3、4、5 μL进行测定，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标绘制标准曲线。结果表明，范围内呈良好线性关系(见图1)。

2.2 精密度试验

取0.1 mg·mL-1标准品溶液，进样量1 μL，连续进样6次，4种苯酞类化合物峰面积RSD值为0.21%，表明仪器精密度良好。

2.3 重现性实验

取同一批次的甘肃岷县当归样品，按供试品溶液制备方法制备，按上述色谱条件测定，各对照品色谱峰的峰面积在0.52%～1.84%范围内，表明此方法的重现性良好。

2.4 稳定性实验

取上述供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24、36 h，按前述测定方法进行测定，记录峰面积，各对照品色谱峰的峰面积对应的浓度的RSD值在0.76%～2.25%范围内，表明样品至少在36 h内稳定。

2.5 加样回收率实验

取已测知含量的同一批次(甘肃岷县-DG1)样品6份，每份约0.5 g，精密称定，分别精密加入一定量(相当于样品中的量)4种对照品，按供试品溶液的制备方法操作，按上述色谱条件测定。4种成分的回收率在98.33%～102.22%，RSD值在1.16%～4.72%之间[9-10]。

图1 苯酞类成分的标准曲线

2.6 样品测定

取9种不同加工处理方法的市售当归样品，按1.3项下方法制备供试品溶液，精密吸取5 uL进样，平行测定3次，计算当归中洋川芎内酯A、正丁基苯酞、藁本内酯的含量[11-12]，色谱分离图(见图2)，结果见表3和图3。

表3 苯酞类成分的含量测定结果 /mg·g-1

图2 不同加工方法当归药材GC-MS指纹图谱

2.7 结果分析与成分鉴定

9种市售当归药材GC-MS指纹图谱(如图2)所示。结合表3、图3分析，不同加工方法当归药材及饮片中，正丁基苯酞质量分数排序为：传统烟熏≈酒炙>晒干>硫熏。丁烯基苯酞质量分数排序为：晒干>传统烟熏>酒炙>硫熏。洋川芎内酯A质量分数排序为：酒炙>晒干>传统烟熏>硫熏。蒿本内酯质量分数排序为：传统烟熏>晒干>硫熏>酒炙。烟熏、晒干、硫熏、以及酒炙当归四者进行比较，硫熏与酒炙当归含量较低，而晒干当归与烟熏当归较为相似且较高。将硫熏与晒干当归比较分析，当归经硫熏后四种苯酞类成分的含量均呈降低趋势，其中藁苯内酯降低最为明显，含量下降58%，正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎内酯A分别下降49%、38%和27%。将含量测定结果导入Simca-P软件，进行PCA分析，2个主成分累计解释率达88.69%，发现硫熏、晒干、酒炙三种不同加工处理的当归药材能够明显区分开来(见图3)，且烟熏与晒干较接近。

图3 不同加工方法当归药材PCA分析

利用气相色谱-质谱(GC/MS)联机分析，经计算机谱库(WILEY)检索及与标准图谱对照，采用面积归一法共鉴定出22种化合物[13-14]。其中主要成分为藁本内酯、邻苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎内酯A，相对含量分别为53.55%、23.66%、3.89%、4.20%、2.06%、2.88%(见表4)。

表4 当归主要挥发油的化学成分及相对含量

3 结论

应用GC-MS法测定当归药材，共鉴定出22种化合物。定性分析表明，其主要成分为藁本内酯、邻苯二甲酸二丁酯、正丁基苯酞、丁烯基苯酞、洋川芎内酯A、二十三酸。不同加工方法的当归品质呈现差异。其中晒干和烟熏当归质量较优，硫熏当归质量较差。晒干当归虽然质量较好，但当归药材富含油脂类成分，在保存过程中容易引起虫蛀，不宜长期保存。烟熏当归是传统产地加工方式，具有外观品相欠佳，烟熏过程的温度、时间及操作方式多依靠主观经验等缺陷，且烟熏产生的烟尘颗粒物会使当归药材有效成分和无机元素的含量及分布发生变化。硫熏当归是一种较为广泛应用的加工方法，虽具有杀菌、防虫、容易操作、花费较低及色泽较好的优点，但硫化物及砷有害残留严重影响当归药材品质[15]。已有学者报道通过控制硫熏过程中的含氧量、温度和硫磺量等参数来保障药材品质[16]。目前，因晒干方法简便，成本较低且能保障当归品质，大部分栽种者仍采用此种方法，但晒干当归较易引起虫蛀，未能进行长期保存，未来寻求一种防蛀方法是当归长久贮藏和品质保障的重要先决条件，也将是当归加工贮藏规范化、标准化的重点之一。

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StudiesonthedifferentprocessedcommercialRadixAngelicaSinensisbasedonGC-MSandChemometrics

WEIWenlong，HUANGLinfang*

(InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China)

Objective：the research for the difference of volatile oil content was carried out to establish a reasonable processing technology for RadixAngelicaSinensis.Method：nine different processed RadixAngelicaeSinensiswere collected，GC-MS was used to qualitatively and quantatively analyze the volatile oil content，and content data were applicated in the principal component analysis.Results：the quality of smoked and sun-dried samples was better than sulfur-fumigated and wine-processed samples；different processed samples were distinguished clearly；22 compounds were identified，and the relative contents of main compounds including ligustilide，dibutyl phthalate，n-Butylphathlide，butylidenephthalide，senkyunolide A and tricosanoic acid were 53.55%，23.66%，3.89%，4.20%，2.06%，2.88%.Conclusion：The study explored the difference of volatile oil content in processed RadixAngelicaeSinensis，and laid the foundation for standardization of sulfur-fumigation.

RadixAngelicaeSinensis；Processing method；Volatile oil；GC-MS

2014-12-18)

国家自然科学基金面上项目(81274013，81473315)；国家自然科学基金重点项目(81130069)

*

黄林芳，副教授，硕士生导师，研究方向：中药资源与质量评价研究；Tel：(010)57833197， E-mail：lfhuang@implad.ac.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.6.014