长白山野生细叶杜香菌根真菌的分离及其特征

姜云天 顾地周 李玉梅

摘要：本文以野生细叶杜香为试材，初步对其菌根真菌进行分离与培养，并对其菌落特征进行描述。结果表明：分离得到36株真菌菌株，菌落形态特征归为4种类型。菌落颜色各异，菌落边缘规则、无孢子产生、无分泌物，菌落呈绒毡状或棉絮状。

关键词：细叶杜香;菌根真菌;分离

基金项目：吉林省教育厅项目（吉教科合字〔2012〕第361号）

中图分类号： O657.7                     文献标识码：  A                       DOI编号：   10.14025/j.cnki.jlny.2015.18.024

细叶杜香（Ledum palustre L. var. angustum N. Busch），又名狭叶杜香、喇叭茶、山白茶、绊脚丝，为杜鹃花科（Ericaceae）杜香屬（Ledum palustre）常绿小灌木[1]。在我国主要分布于东北地区的大、小兴安岭和长白山区[2]。细叶杜香体内含有多种有效成分，其叶及嫩枝、花、果实均含有芳香油，具有止咳、祛痰、消炎及止痒等功效，主要用于防治急慢性支气管炎、流感、皮肤病等疾病[3];在长白山区，民间有用叶制成药膏治疗月经不调和不孕[4]。杜香除了具有药用价值外，由于其特有的芳香还可作为天然香料应用于日用化工、制药皂、脚气水、洗发水等系列产品[5]。目前，俄罗斯、韩国等学者将杜香提取物添加到食品中，将其制成软饮料、罐头、面条、酸奶、冰淇淋等多种功能食品。此外，杜香嫩叶还被用于制作保健茶等保健品。近年来，随着人们保健意识的增强，杜香需求量越来越大。为了合理开发利用野生细叶杜香资源，人们采用种子、扦插及组织培养等方式对其进行人工繁殖，但是由于该植物存在根系与生境中某些真菌共生的特性，人工繁殖后的种苗出现存活率低、生长缓慢等问题。因此，为了探讨野生细叶杜香生境中与之共生的真菌类型，本研究以长白山野生细叶杜香为试材，对其菌根真菌进行分离与培养，并对其菌落特征进行描述，以期为细叶杜香菌根真菌的鉴定提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试菌株，分离自长白山北坡海拔1300米的针阔混交林下生长的野生细叶杜香（Ledum palustre L. var. angustum N. Busch）。

1.2 试验方法

2014年7月，从长白山北坡采集附带根际土壤的细叶杜香根样，用冰盒带回实验室。先用流水将根系上的土壤和附带物冲洗干净，然后剪成3～4厘米根段，用70%的酒精消毒30秒，再放入0.1%升汞中消毒4～6分钟，用无菌水冲洗5～6次后吸干根段上的水分，再将其切成约0.5厘米的小根段，接种于马丁—孟加拉红培养基（简称MD）和PDA培养基上，每个三角瓶中放3个根段，25℃下暗培养。待根段剪口处长出菌丝后，用灭菌的接种针挑取真菌菌丝，转接于新的马丁—孟加拉红培养基和PDA培养基上进行纯化培养，直至得到单一菌株。培养14天记录单一菌株菌落直径及菌落特征。

2 结果与分析

2.1 分离菌株的菌落特征

经过MD和PDA两种培养基分离纯化培养，从细叶杜香菌根中分离得到36株真菌菌株，根据分离培养菌株的菌落形态特征初步将其归类为4个类型（见表1）。两种培养基上分离的菌株均无孢子产生;菌落外形规则，呈圆形;菌落无分泌物产生。但是在菌落颜色、质地和生长速度上存在较大差异，其中，MD培养基上分离得到的菌株生长较缓慢，菌株编号为a的菌落颜色呈黄褐色，边缘白色隆起，绒毡状，菌落直径为4.8厘米;菌株编号为b的菌落颜色则呈白色，中间隆起，棉絮状，菌落直径为2.1厘米。PDA培养基上分离的菌株生长速度相对较快;菌株编号为c的菌落直径达到6.5厘米，菌落呈黑色，边缘褐色，产生白色菌丝，绒毡状;而菌株编号为d的菌落直径达到9.6厘米，菌落中间部位微隆起，橘中带白，边缘橘色，辐射状。4种类型的菌落形态特征见图版1。

表1  分离菌根真菌菌落特征

3 讨论

两种培养基分离的真菌类型不同，但菌根真菌的菌落大多为绒毡状或棉絮状，菌落边缘规则，无孢子产生，这与杜鹃花科植物分离出的部分真菌特征相似，但是具体属于哪种真菌还需从分子生物学角度做进一步的鉴定。

参考文献

[1] 赵子峰，沙伟，赵子云.我国的杜香属植物及杜香属植物的应用[J].生物学教学，2006，31（04）：8-9.

[2] 孟彩云，巴俊杰，毕力格.HPLC法测定细叶杜香中熊果酸的含量[J].中国民族医药杂志，2010（01）：51-52.

[3] 王晓琴，渠弼.细叶杜香中的化学成分[J].中国民族医药杂志，2010（01）：53-54.

[4] 吉林省中医中药研究所.长白山植物药志[M].长春： 吉林人民出版社，1982：863-864.

[5] 姜云天，陈艳秋，朱俊义，等.细叶杜香高效快繁体系建立及种质试管保存研究[J].西南大学学报（自然科学版），2009， 31（02）：118-123.

作者简介：姜云天，硕士，通化师范学院生物系，讲师，研究方向：植物生理与生态的教学。