野生油蘑菌种分离与纯化的研究

潘 静，郭梦桥，刘伟伟

（黑龙江省科学院大庆分院，黑龙江 大庆 163319）

野生油蘑菌种分离与纯化的研究

潘 静，郭梦桥，刘伟伟

（黑龙江省科学院大庆分院，黑龙江 大庆 163319）

以在大庆市不同地区采集的野生油蘑为试验材料，选取子实体不同部位进行组织分离纯化，并对不同培养基下子实体的萌发状况进行了比较研究，得出PDA+杨树树叶浸泡液培养基最适宜油蘑菌丝的萌发，子实体表面的消毒与否对菌丝的生长产生影响。

野生油蘑；分离；纯化

油蘑属于伞菌目白蘑科口蘑属，是一种商品价值极高的野生食用菌，其口感滑腻，香气浓郁，风味独特，具较高的营养价值。野生油蘑发生于秋季杨树林下，喜在沙质土壤上繁殖生长。因长期的过度采摘和生态环境的不断恶化，许多地区的野生油蘑资源日益减少，有效保护和合理开发野生油蘑资源，实现野生油蘑的人工栽培是现阶段亟待解决的问题。

目前对油蘑的研究主要集中在生态分布［1-2］、生境考察［3］等方面，而在其菌丝分离方面的研究较少［4］。本研究以在大庆市不同地区采集的野生油蘑为试验材料，选取子实体不同部位进行组织分离培养，对得到的菌种进行纯化，为下一步利用rDNA ITS区段对菌丝体进行物种鉴定提供基础数据，为明确大庆市野生油蘑的菌种类别，实现野生油蘑的人工栽培提供技术指导，同时为日后野生油蘑的深入研究和开发奠定理论基础。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1子实体

野生油蘑子实体中等至较大。菌盖直径3～12 （15）cm，扁半球形，边缘内卷，波状，黏，浅红褐色，趋向边缘色浅，被细小的棕褐色鳞片，气味香，菌肉较厚，污白色，伤处变暗。菌褶密，较窄，污白色，不等长，伤处色较暗，菌柄较为粗壮，内实至松软，长4～8cm，粗1～3.5cm，有的下部膨大，孢子印白色。孢子卵圆形至近球形，光滑，无色，5.6～7.6（8）μm×3.5～5.4μm。秋季在杨树林中沙质的土地上群生、散生。1.1.2培养基

A.马铃薯葡萄糖琼脂培养基 （PDA）：葡萄糖20.0g，马铃薯200.0g，琼脂20.0g，蒸馏水1 000.0mL，pH值自然。

B.孟加拉红培养基：蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，琼脂20g，1/3000孟加拉红溶液100mL，蒸馏水1 000mL，氯霉素0.1g。

C.PDA+VB1+VB3培养基（PVB）：葡萄糖20.0g，马铃薯200.0g，VB10.5mg，VB30.5mg，琼脂20.0g，蒸馏水1 000.0mL，pH值自然。

D.PDA+杨树树叶浸泡液：葡萄糖20.0g，马铃薯200.0g，琼脂20.0g，杨树树叶浸泡液1 000.0mL，pH值自然。

1.1.3仪器设备

超净工作台、生化培养箱、高压灭菌锅、电炉、酒精灯、接种环等。

1.2试验方法

1.2.1培养基配制

按上述配方配制三种培养基，置高压灭菌锅灭菌30min。灭菌后，用直径为90mm的培养皿分装。

1.2.2组织分离

1.2.2.1子实体表面消毒后分离

在超净工作台上，取子实体用75%的酒精棉球擦洗表面，用无菌水冲洗后，分别将菌柄、菌柄与菌盖交界处、菌盖组织等三个不同部位切割成黄豆粒大小块，在酒精灯火焰边接入各培养基中。

1.2.2.2子实体直接分离

新鲜野生油蘑子实体若干，置于超净工作台上，打开紫外线灯照射30min后，用酒精棉球擦拭双手，在酒精灯火焰旁，用无菌解剖刀分别切取菌柄内部、菌柄与菌盖交界处内部、菌盖内部各黄豆粒大小组织块，分别接入4种培养基上，每一子实体不同部位组织块分别接入4种培养基。然后置于生化培养箱内25℃下黑暗培养，每天定时观察，记录不同组织块在不同培养基内的定植萌发及菌丝生长情况［5］。

2　结果与分析

2.1子实体表面消毒后分离对黑龙江省大庆市野生油蘑子实体的菌柄、菌柄与菌盖交界处、菌盖组织分别进行组织分离。由表1中可以看出菌盖组织块在培养25d后，开始萌发，长出白色菌丝，平均萌发率为10%。其中，PDA+杨树树叶浸泡液的培养基中菌盖组织的平均萌发率最高，可达到20%；在PDA+VB1+VB3培养基（PVB）中，菌盖组织的萌发率较低，只有5%；PDA培养基最不适宜油蘑子实体菌丝的培养，基本不萌发。子实体的菌柄以及菌柄与菌盖交界处在四种培养基中均不萌发，不适宜作为油蘑子实体组织分离培养的对象。

表1　子实体菌丝的萌发状况Tab.1 Mycelium germination of fruiting body

2.2子实体表面未经消毒直接分离

表2　子实体菌丝的萌发状况Tab.2 Mycelium germination of fruiting body

由表2中可以看出菌盖组织块在培养27d后，开始萌发，长出白色菌丝，平均萌发率为3.75%。其中PDA+杨树树叶浸泡液的培养基中菌盖组织的萌发率最高，可达到10%，在孟加拉红培养基培养基中菌盖组织的萌发率为5%，而在PDA培养基和PDA+VB1+VB3培养基（PVB）中，菌盖组织不萌发菌丝，均不适宜油蘑子实体菌盖组织的培养。

子实体的菌柄以及菌柄与菌盖交界在四种培养基中均无菌丝萌发。

3　结论

3.1树叶浸泡液对油蘑菌丝萌发的影响

在PDA培养基中加入杨树树叶浸泡液后，提高了菌盖组织菌丝的萌发率。可以得出杨树树叶浸泡液中含有促进油蘑菌丝萌发的成分，其具体成分含量及比例，有待于进一步的研究。

3.2子实体表面消毒对油蘑蘑菌丝萌发的影响

从以上两个表中数据可得出，在PDA+杨树树叶浸泡液培养基中，对子实体表面进行消毒后菌丝萌发率可达20%，而未经消毒的子实体菌丝萌发率只有10%。在孟加拉红培养基中，对子实体表面进行消毒后菌丝萌发率可达15%，而未经消毒的子实体菌丝萌发率只有5%，由此可见对子实体表面消毒可促进油蘑菌丝的萌发。

［1]何绍昌.贵州林木外生菌根种类及生态分布的初步研究［J］.贵州科学，1991，9（1）：51-58.

［2]赵友春，马启明.山东省的菌根真菌及其分布［J］.生态学杂志，1990，9（6）：56-58.

［3]弓明钦.海南岛尖峰岭地区大型真菌考查报告［J］.林业科学研究，1988，3 （1）：90-97.

［4]吴珂.野生杨口蘑茵丝分离试验［J］.食用菌，2008，（03）：22-24.

［5]张功，侯枝莲.三种菇子实体不同部位组织分离培养菌丝生长研究［J］.中国食用菌，2001，20（2）：9-10.

Studies on the Isolation，Purification of Tricholoma populinum

PANGJing，GUOMeng-qiao，LIUWei-wei
（Daqing Branch of Heilongjiang Academy of Sciences，Daqing 163319，China）

In this paper，Tricholoma populinumJ.Lange which was collected in different areas of Daqing was selected as the experimental material.Different parts of the fruiting body was isolated and purified.The germination conditions of fruiting body under different culture medium was studied.The results showed that PDA+poplar leaves liquid culture medium was the most suitable culture medium for mycelium germination. Whether the surface offruitingbodywas disinfected had a great influenceon myceliumgrowth.

Tricholoma populinum；Isolation；Purification

S646

A

1674-8646（2015）07-0016-02

2015-05-13

潘静（1987-），女，黑龙江哈尔滨人，学士，研究实习员，从事花卉、食用菌研究。