活血合剂质量标准研究

申祥国

[摘要]目的 以当归和胸肋行气活血合剂为例，探讨当归活血合剂和胸肋行气活血合剂质量研究标准。 方法 采用薄层色谱（TLC）法对当归活血剂中当归、羌活、赤芍、紫花地丁进行定性鉴别，对胸肋行气活血合剂中的大黄、当归进行质量鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）测定胸肋行气活血合剂中黄岑苷的含量。 结果 建立灵敏、简便、可靠的TCL，采用TCL鉴别，可以清楚的看到药剂显示出来的光斑颜色与对照药品是相同的，并且阴性无干扰。胸肋行气活血合剂中黄甘油的含量应在16mg以上。 结论 当归活血剂和胸肋行气活血合剂中都是一种性质稳定的活血剂，TCL和HPLC可用于当归活血剂和胸肋行气活血合剂的质量控制。

[关键词] 活血合剂；质量控制标准；薄层色谱 ；高效液相色谱

[中图分类号] R927.11 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）13-37-03

[Abstract] Objective To angelica and costal line blood gas mixture as an example， study Angelica Huoxue Mixture and costal line blood gas mixture quality standard research. Methods Using thin layer chromatography （TLC） method for qualitative identification of angelica， notopterygium Angelica Huoxue agent， radix paeoniae rubra， Viola yedoensis， used to identify the quality of chest Qi Huoxue Mixture of rhubarb， Chinese angelica， using high performance liquid chromatography（HPLC） determination of chest Qi and blood circulation of Baicalin in bonding agent. Results To establish a sensitive， simple， reliable TCL， using TCL identification， can clearly see the spot color and control drug agents displayed is the same， and no negative interference. Content in yellow glycerol costal line blood gas in the mixture should be more than 16mg. Conclusion Angelica blood activating agent and chest rib of Qi and blood and activating blood circulation in the mixture is a stable， TCL and HPLC can be used for quality control of Angelica Huoxue agent and costal line blood gas mixture.

[Key words] Huoxue Mixture； The quality control standard； Thin layer chromatography； High performance liquid chromatography

活血合剂是一种以活血化瘀为主要组成方剂的统称，具有消散淤血、通行血脉、通经止痛、疗伤消疮以及破血消症等作用，主要是应用于各种治瘀血阻滞病症的治疗[1]。根据作用强弱的不同，可以分为活血化瘀剂、活血消疮剂、疗伤止痛剂、活血消症剂以及活血调经剂五大类[2]。当归是活血合剂的一种，其成分主要有当归、红花、续断以及羌活等十多味重要组成，在临床中可以用于治疗关节疼痛、肌肉疼痛、神经痛、慢性支气管炎、慢性盆腔炎、月经疼痛、高血压病、带状疱疹以及鼻炎等各种病例。胸肋行气活血合剂主要成分有川芎、黄芪、赤芍、桃仁、红花、青皮、当归、苍术、海藻、牛膝、枳壳、桔梗等，具有活血、祛瘀、止痛和消肿作用，在临床上主要用于胸肋跌打损伤的治疗[3]。为有效的控制当归活血合剂和胸肋行气活血合剂的质量，保证其在临床中的疗效，本研究采用TLC对当归活血剂中当归、羌活、赤芍、紫花地丁进行定性鉴别，对胸肋行气活血合剂中的大黄、当归进行质量鉴别，采用HPLC测定胸肋行气活血合剂中黄芩苷的含量，现将研究报道如下。

1 试药与仪器

1.1 试药

1.1.1 当归活血剂试药 当归活血合剂（深圳平乐骨伤科医院制剂室）；当归对照药材，芍药苷对照品均购自中国药品生物鉴定所；芍药苷对照品、紫花地丁对照药材；硅胶 G薄层板购自山东大学生物科学与工程研究所；研究中使用的所有药剂均为分析纯[4]。

1.1.2 胸肋行气活血合剂试药 胸肋行气活血合剂（江苏省姜堰市中医院）；当归对照药材中国药品生物制品鉴定所，正己烷和醋酸乙酯色谱纯，所使用的水均为纯化水。

1.2 仪器

点样器；水浴锅（型号：H.H.S21-4R，厂家：上海医疗器械五厂）；三用紫外仪（型号：ZF-2，厂家：上海安亭电子仪器厂）。

2 方法与结果

2.1 当归活血合剂质量鉴别

2.1.1 当归与羌活的薄层鉴别方法与结果 当归与羌活的薄层鉴别：（1）取当归20mL，采用乙醚振摇的方式连续提取2次，每次提取量为20mL，分取出当中的乙醚，保留备用，将溶液合并到乙醚提取液中，挥干，将1mL的醋酸乙酯加入残渣中，使其充分溶解，并将其作为供试验的溶液用品。（2）取当归对照药材1g，并加入10mL的乙醚，待混合后连续振摇5min，并提取当中的乙醚液，蒸干，将1mL的醋酸乙酯加入残渣中，使其充分溶解，并将其作为试验中的对照药材溶液用品。（3）取无当归的阴性药品作为对照药品，按照供试验品的制作方法将其制成当归空白对照溶液。

鉴别结果：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录 VIB）实验[5]，吸取供试验用品溶液、对照药材用品溶液以及当归空白对照用品溶液三种，每种溶液中吸取5μL，分别将该三种溶液点在统一硅胶G薄层板上，按照9︰1的以正己烷-醋酸乙酯作为展开剂，将其展开后取出，并将其晾干，待其晾干后放置紫外光灯365nm下进行检测。在供试验色谱中，可以看到与对照药材色谱相应的位置上，其显示出来的光斑颜色都是相同的，并且阴性无干扰。

2.1.2 赤芍薄层鉴别方法与结果 赤芍薄层鉴别：（1）取赤芍20mL，放置于正丁醇和水饱溶液中，连续振摇5min，并提取2次，每次提取20mL，将提取的40mL溶液与正丁醇提取液合并，并在合并溶液中加入20mL清水洗涤，过滤水液，蒸干，将1mL的醋酸乙酯加入残渣中，使其充分溶解，并将其作为供试验的溶液用品。（2）取芍药苷对照品1g，加入甲醇将其制成每1mL含1mg的溶液，将其作为对照品溶液。（3）取没有赤芍的阴性药品作为对照药品，按照供试验品的制作方法将其制成当赤芍白对照溶液。

鉴别结果：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录 VIB）实验[6]，吸取供试验用品溶液、对照药材用品溶液以及当归空白对照用品溶液三种，每种溶液中吸取5μL，分别将该三种溶液点在统一硅胶G薄层板上，按照40︰5︰10︰0.2的比例，将氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸作为展开剂，将其展开后取出，并将其晾干，并喷以5%的香草醛硫酸溶液，对其进行加热处理后，可以清晰的看到斑点，在供试验色谱中，可以看到与对照药材色谱相应的位置上，其显示出来的光斑颜色都是相同的，并且阴性无干扰。

2.1.3 紫地花丁薄层鉴别方法与结果 紫地花丁薄层鉴别：（1）取紫地花丁20mL，放置于正丁醇和水饱溶液中，振摇提取2次，每次提取20mL，将提取的40mL溶液与甲醇提取液合并，采用超声处理20min，并在合并溶液中加入20mL清水洗涤，过滤水液，将甲醇溶液蒸干，将1mL的醋酸乙酯加入残渣中，使其充分溶解，并将其作为供试验的溶液用品。（2）取紫地花丁对照品0.8g，加入30mL清水煎煮，将其作为对照品溶液。（3）取不含紫地花丁的阴性药品作为对照药品，按照供试验品的制作方法将其制成紫地花丁空白对照溶液。

鉴别结果：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录 VIB）实验，吸取供试验用品溶液、对照药材用品溶液以及当归空白对照用品溶液三种，每种溶液中吸取5μL，分别将该三种溶液点在统一硅胶G薄层板上，按照5︰3︰1的比例，将甲苯-醋酸乙酯-甲酸作为展开剂，将其展开后取出，待其晾干后放置紫外光灯365nm下进行检测。在供试验色谱中，可以看到与对照药材色谱相应的位置上，其显示出来的光斑颜色都是淡蓝色的荧光斑点，并且阴性无干扰。

2.2 胸肋行气活血合剂质量鉴别

2.2.1 大黄薄层鉴别 （1）取大黄药剂10mL，并加入10mg氯仿，萃取，分离出氯仿液，并将其蒸干；（2）用1%氢氧化钠溶液加入残渣，当溶液呈红色后加入3%过氧化钠溶液，加热，当加酸至酸性时，溶液由红色逐渐变为黄色。

2.2.2 当归薄层鉴别 当归薄层鉴别方法如上述当归活血剂中的鉴别方法相同。

2.2.3 黄岑苷含量测定 试药：胸肋行气活血合剂（江苏省姜堰市中医院）；黄岑苷对照药材中国药品生物制品鉴定所。仪器：仪器为SHIMADZU日本岛津高效液相色谱仪，检测器为SPD-10AVP，CH250型超声波清洗器。试剂：甲醇（色谱纯）、水（重蒸馏水）；含量测定：流动相取47︰53︰0.2的比例配置甲醇-水-磷酸，流速设置为1.0mL/min，检测波长设置为280nm，柱温设置为28℃，理论塔板数>3000，分离度：>1.5，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶[7]。溶液的制备：取在60℃减压干燥4h的黄岑苷和适量对照品，加入甲醇制成含量为1mL含40μg的溶液作为对照品。取试验品1mL，加入70%的乙醇制成50mL样品并过滤，作为供试品溶液。

2.2.4 测定结果 线性关系考察：分别吸取1.0～0.6μL的对照品溶液记录色谱图，将对照品含量作为横坐标，将峰面积作为纵坐标，绘制标准曲线图，结果表明黄岑苷在0.04～0.24μg之间线性关系良好[4]。

测定方法：吸取对照品溶液和供试验品溶液各10μL，并分别将溶液注入HPLC中，测定出没带黄岑苷的含量应该大于16.0mg。

3 讨论

当归也叫做干归，是一种伞形科植物，其形状略呈圆柱形，一般支根有3～5条，其支根长度在15～25cm左右，表面主要呈现出黄棕色，颜色深一点的呈现出棕褐色，具有纵横纹和横长皮孔；根部含有挥发油，即亚丁基苯酞、邻羧基苯正戊酮等[8]。当归性味甘、辛，温，具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效[3]。主要用于血虚萎黄、眩晕心悸、月经不调、经闭痛经等症状的治疗，酒当归具有活血通经的作用，可以用于经闭痛经，风湿痹痛，跌扑损伤[5]。因其有多种治疗功效，因此在临床医学中得到了普遍的应用，加强其质量检测也显得尤为重要。胸肋行气活血合剂是一种活血、祛瘀、止痛和消肿作用，在临床上主要用于胸肋跌打损伤的治疗。

当归活血合剂和胸肋行气活血合剂都是临床医学中常用的一种活血合剂药物，为保证其制剂质量，采用薄层色谱质量检测的方法，可以对当归活血合剂中的当归、羌活、赤芍以及紫花地汀等主要药物成分进行鉴别。在当归薄层鉴别方法中，主要是参考了朱美艳、李郑林[6]的鉴别方法，按照9︰1的以正己烷-醋酸乙酯作为展开剂。在赤芍薄层鉴别中，主要参照了朱益利、谭浩军[1]的鉴别方法，按照按照40︰5︰10︰0.2的比例，将氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸作为展开剂。在紫地花丁薄层鉴别中，参照了叶宓曚、徐凌的鉴别方法，按照5︰3︰1的比例，将甲苯-醋酸乙酯-甲酸作为展开剂，其显示出来的光斑颜色都是淡蓝色的荧光斑点。

TCL和HPLC 鉴别方法具有操作简单、开展快速的特点，在鉴定过程中，可以清晰的看到显示出来的光斑颜色，分离出来的效果也比较好，体现出了很强的专业性，并且阴性空白无干扰[9-12]。HPLC可以有效检测出胸肋行气活血合剂中黄岑苷的含量。因此可以总结出当归活血剂和胸肋行气活血合剂中都是一种性质稳定的活血剂，TCL和HPLC可用于当归活血剂和胸肋行气活血合剂的质量控制。

[参考文献]

[1] 朱益利，谭浩军.活血接骨合剂的质量标准研究[J].中医药导报，2009，15（4）：88-90.

[2] 叶宓曚，徐凌.祛风清热合剂质量标准的研究[J].浙江临床医学，2012，8（11）.1008-7664.

[3] 蓝明雄，李国荣，林慧菁，等.伤科活血合剂质量标准的研究[J].医药前沿，2012（21）：119-120.

[4] 叶宓曚，俞索静，徐凌，等.升清降浊合剂质量标准的研究[J].中成药，2011，29（8）：附16-附18.

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[6] 朱美艳，李郑林.归芍通络合剂的质量标准研究[J].中医正骨，2011，19（5）：16.

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[8] 杜娟.复方天麻缓释片的制备及质量标准研究[D]. 咸阳：陕西中医学院，2009：122-123.

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[10] 张明辉，蔺宁利，邵忙收.HPLC法测定胃安宁片中延胡索乙素含量研究[J].陕西中医学院学报，2010，33（1）：112-113.

[11] 刘修树，陈业仓.高效液相色谱法测定舒通肩痛片中延胡索乙素含量[J].中国药业，2011，20（7）：156-157.

[12] 李永，张龙.高效液相色谱法测定延胡索药材中延胡索乙素的含量[J].中国当代医药，2009，16（11）：11-12.

（收稿日期：2015-03-15）