HER2、HBME-1、Galectin-3和CK19在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

陈东，谭卫峰，刘庆猛（绍兴第二医院，浙江绍兴312000）

临床研究

HER2、HBME-1、Galectin-3和CK19在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

陈东，谭卫峰，刘庆猛
（绍兴第二医院，浙江绍兴312000）

目的探讨HER2、HBME-1、Galectin-3和CK19在甲状腺乳头状癌 （PTC）中的免疫组化表达和意义。方法用EnVision方法检测上述4种标记物在78例PTC和癌旁组织中的表达水平。结果HER2、HBME-1、Galectin-3和CK19在PTC中的阳性率分别为48.7%（38/78）、91.0%（71/78）、96.2%（75/78）和98.7%（77/78），在癌旁组织中的阳性率分别为0（0/78）、10.3%（8/78）、11.5%（9/78）和14.1%（11/78）。结论与癌旁组织相比，HER2、HBME-1、Galectin-3和CK19在PTC中的表达显著增高，这些标记物结合常规组织学有助于提高PTC的诊断准确性。

甲状腺乳头状癌；免疫组化；HER2；HBME-1；Galectin-3；CK19甲状腺乳头状癌（PTC）是最常见的甲状腺恶性肿瘤，国内外PTC发病率均呈上升趋势。实际工作中，PTC的病理诊断往往具有挑战性，而免疫组化的辅助诊断价值长期以来存在争议。作者回顾性分析了78例具有典型形态学的PTC，用免疫组化方法检测HER2、HBME-1、Galectin-3和CK19的表达水平，探讨它们的辅助诊断价值。

1　资料与方法

1.1一般资料收集本院2012年10月～2015年9月手术切除并诊断的PTC标本78例，年龄23～74岁，平均（46.28±10.89）岁，其中男22例，女56例，女性与男性比值为2.55：1，＜45岁者27例（34.6%）。以癌旁组织（同一蜡块中紧邻癌组织的良性甲状腺组织）作为免疫组化检测结果的对照组（内对照）。所有病例由两名资深病理医师复核原诊断，均具有典型的PTC特征，已剔除可疑病例或交界性病例。

1.2方法根据最新文献报道［1-3］，选用4种免疫组化抗体，包括HER2（克隆号AB5）、HBME-1（克隆号HBME-1）、Galectin-3（克隆号EPR2774）和CK19（克隆号A53-B/A2.26）。HER2的一抗、二抗和显色剂均购自美国罗氏公司，其余免疫组化试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。所有一抗均为即用型，抗原修复采用HIER EDTA缓冲液。标本经10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋切片，免疫组化染色使用全自动免疫组化仪（Bench-Mark XT），采用EnVision法，严格按照说明书操作。用FISH证实存在HER基因扩增的乳腺癌组织作为 HER2阳性对照，Galectin-3、HBME-1和CK19分别使用组织细胞、间皮细胞和皮肤组织作为阳性对照［1］。PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3阳性判定标准HER2染色定位于细胞膜；HBME-1染色定位于细胞膜/质，胞质显色并且腺腔面显色增强；Galectin-3和CK19染色定位于细胞质。阳性显色呈棕黄色。染色定位正确的细胞显色数量超过10%为阳性。

1.4统计学处理统计四种免疫组化标记物在PTC和癌旁组织中的表达率、敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。用 χ2检验比较组间差异。

2　结果

2.1形态学78例甲状腺乳头状癌均为甲状腺全切除术+颈部淋巴结清扫，至少检出2枚颈部淋巴结，＜1cm的肿瘤（乳头状微小癌）占57.7%，颈部淋巴结转移率为39.7%。组织学分型均为经典型甲状腺乳头状癌（已剔除可疑病例或交界性病例），两名资深病理医生复阅原切片证实诊断。严格掌握诊断标准［2］：（1）细胞核变长、增大；（2）核膜不规则、核沟、核内包涵体；（3）透明核；（4）砂粒体；（5）胶质缺乏或深染；（6）多核巨细胞。

2.2免疫组化图1和表1表示每种抗体在PTC和癌旁组织的表达情况。总体上，与癌旁组织相比，PTC细胞对每种抗体显色更强，范围更广，而癌旁组织呈阴性或局灶弱阳性。所有四种抗体的表达率差异在PTC和癌旁组织之间均具有统计学意义（P＜0.01）。表2示PTC对每种抗体的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。HER2特异度最高，达100%，但敏感度最低，仅48.7%。其余抗体均有较高的敏感度，但特异度略低于HER2。

图1　四种抗体在甲状腺乳头状癌的免疫组化表达 （1A：HER2呈细胞膜阳性；1B：HBME-1的染色特征是胞质显色并且腺腔面显色增强；1C：Galectin-3呈细胞质阳性；1D：CK19呈细胞质阳性）。

表1　四种免疫组化抗体在PTC和癌旁组织中的表达（n=78）

表2　四种免疫组仪抗体对PTC的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值（%）

3　讨论

目前，PTC的诊断依据是常规HE切片的组织学检查，并以核特征为主。然而，日常工作中，PTC的形态学诊断经常遇到困难。免疫组织化学对PTC的辅助作用具有争议，多数研究认为某些免疫标记物有助于疑难病例的诊断，但不同抗体的诊断特异度和敏感度不同，作者从文献中选择了四种抗体进行研究，即HER2、HBME-1、Galectin-3和CK19［1-3］。

HBME-1（mesothelial cell，间皮细胞），其克隆号为HBME-1（Hector Battifora Mesothelial Epitope-1）。本组实验结果表明，若采用严格的阳性判读标准，则HBME-1在PTC中表达的敏感度、特异度、PPV、NPV均为90%左右，腺腔面染色增强是其特征性染色模式；并且HBME-1在癌旁组织中低表达，表达呈局灶弱阳性。Nechifor-Boila等［4］报道，单用HBME-1在良恶性鉴别中的敏感度、特异度、阳性预测值和诊断准确性分别高达80%、96%、96.7% 和86.4%，此数据与本组实验结果略有差异，可能与选用的抗体克隆号不同、阳性判读标准存在一定的主观性和检测技术的灵敏度不同有关。为了提高诊断价值，强调其特征性染色模式：胞质显色并且腺腔面显色增强。

近十年开始将HER2（human epidermalgrowth factor receptor-2，人表皮生长因子受体-2）用于PTC的辅助诊断。本组实验发现，HER2在PTC中表达情况与其他三种标记物相比，其特异度和PPV最高（两者均为100%），但敏感度和NPV最低（分别为48.7%和66.1%），这与文献报道较为一致［5］。

Galectin-3是一种非整合素β-半乳糖苷结合性外源凝集素，它表达于乳头状癌等甲状腺恶性肿瘤，但在淋巴细胞性甲状腺炎、滤泡性腺瘤和滤泡癌的滤泡上皮细胞也能检测到Galectin-3表达［6］。细胞角蛋白19（CK19）是腺体组织表达的一种角蛋白微丝。80%以上的乳头状癌病例弥漫强阳性表达CK19。然而，正常甲状腺滤泡上皮、甲状腺结节周围受挤压的甲状腺实质、淋巴细胞性甲状腺炎的滤泡上皮细胞、退变的甲状腺结节和先前活检部位的反应性滤泡上皮都可能表达CK19［7］。本组实验表明，CK19在PTC中表达的敏感度和阴性预测值非常高（分别为98.7%和98.5%），但特异度和阳性预测值较低（分别为85.9%和87.5%），也与文献报道一致［6-7］。

总之，本组实验表明，若单用一种抗体，则CK19的敏感度最高，但特异度最低；HER2的特异度最高，但敏感度最低。因此，建议在实际工作中将上述四种抗体作为一组联合使用，以提高整体敏感度和特异度。作者建议的优先组合是 HER2+ CK19，其整体敏感度和特异度均可达到100%。这些标记物结合常规组织学有助于提高PTC的诊断准确性。

［1］Saleh HA，Jin B，Barnwell J，et al.Utility of immunohistochemical markers in differentiating benign from malignant follicular-derived thyroid nodules.Diagn Pathol，2010，26（5）:9

［2］王炜，薛德彬，主译.甲状腺病理活检解读.北京：北京科学技术出版社，2014:124

［3］ Ma H，Xu S，Yan J，et al.The value of tumor markers in the diagnosis of papillary thyroid carcinoma alone and in combination.Pol J Pathol，2014，65（3）:202

［4］Nechifor-Boila A，Borda A，Sassolas G，et al.Immunohistochemical markers in the diagnosis of papillary thyroid carcinomas:The promising role of combined immunostaining using HBME-1 and CD56.Pathol Res Pract，2013，209（9）:585

［5］Sugishita Y，Kammori M，Yamada O，et al.Amplification of the human epidermal growth factor receptor 2 gene in differentiatedthyroidcancercorrelateswithtelomere shortening.Int J Oncol，2013，42（5）:1589

［6］Salajegheh A，Dolan-Evans E，Sullivan E，et al.The expression profiles of the galectin gene family in primary and metastaticpapillarythyroidcarcinomawithparticular emphasis on galectin-1 and galectin-3 expression.Exp Mol Pathol，2014，96（2）:212

［7］Isic Dencic T，Cvejic D，Paunovic I，et al.Cytokeratin19 expression discriminates papillary thyroid carcinoma from other thyroid lesions and predicts its aggressive behavior. Med Oncol，2013，30（1）:362