消岩汤剂拆方配伍对A549肺腺癌细胞体外生长抑制作用研究*

李小江，贾英杰，于建春，张小青，杜晓玲，朱津丽，孟　醒（.天津中医药大学第一附属医院肿瘤科，天津009；.南开大学生命科学学院，天津0007；.天津中医药大学，天津009）

消岩汤剂拆方配伍对A549肺腺癌细胞体外生长抑制作用研究*

李小江1，贾英杰1，于建春1，张小青1，杜晓玲2，朱津丽1，孟醒3
（1.天津中医药大学第一附属医院肿瘤科，天津300193；2.南开大学生命科学学院，天津300071；3.天津中医药大学，天津300193）

［目的］探讨消岩汤及各拆方组对人肺腺癌A549细胞的体外生长的作用机制，探究消岩汤剂中最有效的作用成分和浓度。［方法］消岩汤全方和根据功效拆分的清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组，以CCK-8检测A549肺腺癌细胞的细胞增殖活性。［结果］各组均有明显的抑制细胞活性作用，抑制强度依次为：全方组、清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组。［结论］消岩汤及其拆方组在体外实验中均能抑制A549肺腺癌细胞细胞生长，消岩汤全方组当浓度达到50g/L时达到最大抑制率为85.60%。清热解毒组药物在抗肿瘤作用方面，与全方接近，提示清热解毒组中药为体外实验中全方抗肿瘤作用最有效组分。

消岩汤；肺腺癌A549细胞；体外抑制作用

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2015.07.11

消岩汤系天津中医药大学第一附属医院肿瘤科贾英杰教授治疗恶性肿瘤之精方，基于肿瘤病机“正气内虚，毒瘀并存”，以“扶正固本，解毒祛瘀”为治法，结合多年临证经验总结拟成“消岩汤”。该方以黄芪、太子参共为君药，滋阴益气、扶正抗癌；以夏枯草、生牡蛎、白花蛇舌草配合使用，清热解毒、软坚散结，共为臣药；佐以姜黄、郁金共奏行气散结、活血祛瘀之功；全方具有解毒祛瘀，扶正抗癌之功效。诸药合用，共奏益气滋阴、活血祛瘀、清热解毒、扶正驱邪之功［1-5］。本实验选用人肺腺癌A549细胞，通过全方及拆方研究，观察消岩汤全方及其不同组分中药对人肺腺癌A549细胞的影响，寻找消岩汤抑瘤作用的主要成分及最大抑制浓度。

1　材料

1.1药物与试剂CCK-8试剂盒（武汉博士德生物有限公司）；RPMI-1640培养液（Gibco公司），小牛血（Amresco公司），青-链霉素（南京凯基生物科技公司）。消岩汤由黄芪、太子参、夏枯草、生牡蛎、白花蛇舌草、姜黄、郁金等中药组成，由天津中医药大学第一附属医院药房提供。根据功效将全方拆分为3组：清热解毒组（夏枯草、生牡蛎、白花蛇舌草）；益气扶正组（黄芪、太子参）；活血祛瘀组（姜黄、郁金）。中药均购自天津中医药大学第一附属医院中药房，中药的浓缩液为棕黄色液体，剂量以原方为准，由天津中医药大学中药提取室严格回流提取，其终浓度分别为含生药2、1、1、1g/mL。

1.2细胞人肺腺癌细胞株A549，由南开大学生命科学学院提供。

1.3仪器Bio-tek Synergy2多功能酶标仪（美国伯腾仪器有限公司），医用净化工作台、二氧化碳（CO2）培养箱、低温高速离心机、倒置相差显微镜。

2　方法

2.1 A549肺腺癌细胞的培养A549细胞置于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL链霉素的RPMI-1640培养液中，置于5%CO2培养箱，恒温37℃培养。每2～3 d换液1次，使用0.05%胰蛋白酶和0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）常规消化传代，4g/L台盼蓝染色后计算细胞数和活率（＞98%），取对数生长期的细胞进行实验。

2.2样品的制备中药消岩汤及各组拆方中药10 000 r/min离心5min，取上清液用0.22μm过滤器除菌，用培养基稀释成梯度浓度的溶液。

2.3 CCK-8法检测消岩汤剂拆方配伍对肿瘤细胞生长的影响选取处于对数生长期的细胞进行常规消化，调整细胞浓度至以每升5×107个接着于96孔板中，每孔80μL。待贴壁后，加入RPMI-1640、10%胎牛血清培养基同步化24 h。设立对照组（加含有CCK-8培养液）、实验组（加不同浓度药物、含CCK-8培养液）、调零组（不同浓度含药培养液）、阴性对照组（细胞悬液）。实验组分别加入不同浓度的中药，4组中药用培养基稀释成梯度浓度的溶液（经过预实验筛选，消岩汤全方组、清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组以10、20、30、40、50、60、70、80、90g/L浓度梯度进行实验），加入96孔板，200μL每孔，每个浓度重复6孔，培养48 h；48 h后，每个浓度取4孔加入20μLCCK-8溶液，37℃孵育4 h。在酶标仪上（λ=450 nm）测各孔吸光度值（A值），实验重复3次。根据以下公式计算药物对细胞的生长抑制率（IC）。

2.4统计学分析数据以表示，用SPSS18.0统计学软件进行数据分析。两组间比较采用方差分析。

3　结果

3.1消岩汤全方及各组药物对人肺腺癌A549细胞作用后吸光度情况见图1和表1、表2。

利用SPSS18.0统计软件，以两因素方差分析对不同浓度各药物处理的细胞A值进行分析，得出不同药物A值有差异，且差异具有统计学意义（F= 232.394，P＜0.001），不同浓度的A值也具有统计学差异（F=220.890，P＜0.001）。进一步利用LSD法对不同药品间进行两两比较，结果见表1。

各组药物均表现出对人肺腺癌A549细胞的抑制作用。随着剂量的增加作用逐渐增强，达到峰值后逐渐减小。各组A值见图1，数据结果见表2。

图1　各组药物体外对A 549细胞生长的A值Fig.1 A of eachgroup of decoction on A549 cells in vitrogrow th

由表2可以看出，各药物组间均存在统计学差异，其中活血化瘀组最小，随后依次为益气扶正组和消岩汤组，清热解毒组最大。

表1　各组药物体外对A549细胞的A值两两比较Tab.1 A of eachgroup of decoction on A549 cells in vitrogrow th

表2　各组药物体外对A549细胞生长的A值Tab.2 Comparison of different decoctionson A of eachgroup of decoction on A549 cells in vitrogrow th

表3　各组药物体外对A549细胞生长的抑制率Tab.3 Inhibition rateof eachgroup ofdecoction on A549 cells in vitrogrow th %

图2　各组药物体外对A549细胞生长的抑制率Fig.2 Inhibition rateof eachgroup of decoction on A549 cells in vitrogrow th

3.2消岩汤全方及各组药物对人肺腺癌A549细胞的抑制情况见表3、图2。各组药物均对人肺腺癌A549细胞有一定的抑制作用。其中消岩汤全方组当浓度达到50g/L时达到最大抑制率85.60%；活血祛瘀组药物浓度达到60g/L时达到最大抑制率82.47%；清热解毒组药物浓度达到70g/L时达到最大抑制率81.54%；益气扶正组药物浓度达到80g/L时达到最大抑制率85.85%。提示消岩汤剂拆方配伍对人肺腺癌A549细胞的生长有明显的抑制作用。

从抑制率看，其抑制强度顺序依次为消岩汤全方组、清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组。实验发现，相对其他拆方组，清热解毒组作用最强，起效最快，抑制曲线与消岩汤全方组趋势最接近，提示清热解毒组中药为全方体外抑抗肿瘤作用的重要组分；其次为活血化瘀药物；益气扶正组中药次之。

4　讨论

消岩汤是在“解毒祛瘀，扶正抗癌”中医肿瘤治则基础上依据现代药理研究研制出的中药制剂，具有多种抗肿瘤活性，在临床应用数十年。大量前期基础实验和临床研究表明，“消岩汤”能有效改善肿瘤患者相关症状，提高患者生活质量及免疫水平，延长生存期，对放疗、化疗具有“减毒增效”作用，并且能有效提高荷瘤小鼠的免疫功能，升高血清中瘦素受体水平、改善身体机能，抗肿瘤血管生成，抑制肿瘤细胞生长，抑制肿瘤转移［6-18］。

本研究证实消岩汤剂及其拆方组均对人肺腺癌A549细胞有很强的抑制作用，具有扶正抑瘤的功效。消岩汤全方组当浓度达到50g/L时达到最大抑制率85.60%。其中清热解毒组中药为全方体外抑瘤作用的最重要组分，为中医药治疗肺癌的临床应用提供了重要的实验依据。

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（本文编辑：马英，滕晓东）

Study of the inhibition effectandmechanism of Xiaoyan decoction and decomposed recipeon A549 cells in vitro

LIXiao-jiang1，JIA Ying-jie1，YU Jian-chun1，ZHANGXiao-qing1，DU Xiao-ling2，Zhu Jin-li1，MENGXing3
（1.Oncology Department，The FirstAffiliated Hospitalof Tianjin University of TraditionalChineseMedicine，Tianjin 300193，China；2.The College of Life Sciences，NankaiUniversity，Tianjin 300071，China；3.Tianjin University of TraditionalChinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］To investigate the inhibition of Xiaoyan decoction and decomposed recipe on A549 in vitro and its possiblemechanism.Explore themosteffective composition and concentration of Xiaoyan decoction.［M ethods］According to the effect，Xiaoyan decoction was divided into threegroups:Qingre Jiedugroup，Huoxue Huayugroup and Yiqi Fuzhenggroup.Use CCK 8 method to detect proliferation activity of A549 lung adenocarcinoma cancer cells.［Results］Groups had obvious inhibitory effectof cancer cell activity. The inhibition of strength in the orderwas Xiaoyan decoctiongroup，Qingre Jiedugroup，Huoxue Huayugroup and Yiqi Fuzhenggroup.［Conclusion］Xiaoyan decoction and decomposed recipegroupshaveobvious inhibitory effecton A549 cellsactivity.Xiaoyan decoction（50g/L）showsmore inhibition on A549 cellswith the lowestcell viability and is time-dependent.Effectof Qingre Jiedugroup is close to Xiaoyan decoction，and suggests thatQingre Jiedugroup is themosteffective components foranti-tumoreffectof the experiment in vitro of Xiaoyan decoction.

Xiaoyan decoction；A549 lungadenocarcinoma cancer cell；inhibition in vitro

R734.2

A

1672-1519（2015）07-0424-04

天津市高等学校科技发展基金计划项目（20120216）；天津市科学技术委员会课题（14JCZDJC36900）。作者简介：李小江（1980-），女，医学博士，副主任医师，主要从事中西医结合肿瘤学研究工作。

贾英杰，E-mail：zxqlovelxj@126.com。

（2015-02-14）