秃叶黄檗果实的挥发性化学成分分析

蒋太白，危 莉，王道平，蒋小虎，危 英＊

（1.贵阳中医学院 药学系，贵州 贵阳550002；2.贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州 贵阳550002）

秃叶黄檗（Phellodendron chinese Schneid.var.glabriusculum Schneid.）为芸香科黄檗属（Phellodendron）植 物，是 川 黄 檗 （P.chinese Schneid）的变种，两者的树皮常作为黄柏药材使用。该植物多生于海拔800～1 500m山地疏林或密林中，在四川、贵州、湖南等南方地区均有分布［1］。其味苦、性寒，具有清热燥湿，泻火除蒸，解毒疗疮的功效，主要用于治疗湿热泻痢，热淋涩痛，骨蒸劳热，盗汗，遗精，疮疡肿毒等病症［2］。据《中华本草》记载，黄檗果实挥发油及其单体香叶烯具有一定的镇咳作用［3］。苏荣辉［4］等发现，黄皮树干果的提取物有灭杀家蝇和白蚁拒食的活性。晏晨［5－6］等研究发现，秃叶黄檗果95%乙醇提取物的酸水解产物中含有大量三萜类和生物碱类化合物。目前，秃叶黄檗除了树皮作为药用来源外，其果实的利用未见报道。为综合开发利用秃叶黄檗资源，笔者采用顶空固相微萃取－气质联用法，首次对秃叶黄檗新鲜果实挥发性化学成分进行定性、定量分析。

1 材料与方法

1.1 药材与仪器

药材：秃叶黄檗果实于2012年9月采集于贵州省贵阳市药用植物园，经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定，试验样本（No.05／2012／PCS）保存于贵阳中医学院植化教研室。

仪器：HP6890／5975CGC／MS联用仪（美国安捷伦公司），手动固相微萃取（SPME）装置（美国Supelco公司），StableFlex复合萃取纤维头：2cm－50／30μm DVB／CAR／PDMS（美国Supelco公司）。

1.2 挥发性物质的提取

取样品约5.0g，置于15mL固相微萃取仪采样 瓶 中，插 入 装 有 2cm－50／30μm DVB／CAR／PDMS StableFlex纤维头的手动进样器，在85℃左右顶空萃取30min取出，快速移出萃取头并立即插入气相色谱仪进样口（温度250℃）中，热解析3min进样。

1.3 气相色谱－质谱条件

HP－5MS弹性石英毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；载气为高纯 He（99.999%）；载气流量1.0mL／min；汽化室温度250℃；色谱柱初始温度45℃（保留2min），以4℃／min升温至220℃，保持2min；柱前压7.62psi，不分流进样；溶剂延迟时间：1.5min。质谱条件：电离方式为EI源，离子源温度230℃，电子能量70eV，四极杆温度150℃，接口温度280℃，发射电流34.6μA；倍增器电压1 125V，质量扫描范围20～450amu。

1.4 统计分析

所得总离子流图中的各峰经计算机用HP chemstation检索及核对Nist 05标准质谱图库和Wiley275标准质谱图，确认挥发性化学成分，用峰面积归一化法测定各化学成分的相对质量分数。

2 结果与分析

通过检测获得秃叶黄檗新鲜果实挥发性成分的总离子流图（图示），结合定性分析软件和定量分析软件对图进行分析，确认其中大部分化学成分和相对百分含量（表）。由表可知，从新鲜秃叶黄檗果实挥发性成分中分离并鉴定出45种化合物，占总挥发性成分的99.95%，主要挥发性成分为烯烃类，含量为97.5%，其中相对百分含量大于1.5%的成分有β－月桂烯、β－榄香烯、大根香叶烯D、β－榄香烯和β－水芹烯，其含量分别为66.9%、14.5%、6.8%、1.7%和1.6%。

图示 秃叶黄檗果实挥发性成分的总离子流图Fig. Total ion chromatogram of volatile oil from P.Chinese fruit

表 秃叶黄檗新鲜果实的挥发性成分Table Volatile constituents from fresh fruit of P.chinese

3 结论与讨论

试验采用顶空固相微萃取（HS－SPME）技术首次对秃叶黄檗新鲜果实挥发性成分进行萃取、富集，用气相色谱－质谱（GC－MS）法分析和鉴定其化学成分，从中分离鉴定出45个化学成分，其相对含量占挥发油总量的99.95%，烯烃类的挥发性成分含量高达97.5%，其中单萜类成分β－月桂烯和β－榄香烯含量较高，分别为66.7%和14.5%。说明，在秃叶黄檗新鲜果实中的主要挥发性成分以烯烃类的β－月桂烯和β－榄香烯为主，其他成分如醇类、醛酮类、酯类、有机酸含量较少。

侯冬岩［7］等曾采用GC－MS法分析同属植物黄柏果实的挥发油，发现有23种成分，其主要成分为月 桂 烯 （36.3%）、β－香 茅 醇 （25.3%）、α－蒎 烯（14.1%）。通过对比秃叶黄檗果实与黄柏果实挥发油测定结果发现，两者所含主要挥发性成分有一定差异，但含量最多的成分均为月桂烯，且新鲜秃叶黄檗果实中β－月桂烯含量为黄柏果实的2倍。β－月桂烯常作为精油合成的中间体，广泛应用于化妆品、肥皂、洗涤剂生产中。此外，β－月桂烯有多种药理活性，我国学者李云龙早期研究发现，β－月桂烯具有镇咳祛痰作用［8］。同时，其具有抗肿瘤谱广、毒副作用低的优点，目前已开发为二类非细胞毒性的广谱抗肿瘤新药，在临床上广泛用于肺癌、消化道肿瘤及其他浅表性肿瘤的治疗，具有良好的发展前景［9－10］。β－月桂烯药理研究发现，该化合物具有抗氧化和抗溃疡活性，能显著减少胃和十二指肠病变以及增加胃黏液产生进而保护胃粘膜［11］。但是，β－月桂烯除了有镇咳、抗氧化、抗肿瘤、抗溃疡活性外，还具有致癌作用。国外研究者发现，口服大剂量β－月桂烯将诱发鼠的肾、鼻和肝脏非肿瘤性病变［12－13］。β－榄香烯在抗肿瘤活性方面有良好的表现，对肺癌A459细胞、乳腺癌MCF－7细胞和膀胱癌BIU－87细胞有显著的抑制作用并且能诱导其凋亡［14－16］。因此，β－月桂烯和β－榄香烯无论是在医药和日化产品领域的开发都有一定的潜力。

试验对秃叶黄檗新鲜果实中的挥发性成分进行详细分析发现，果实中富含β－月桂烯和β－榄香烯2种挥发性成分，两者都具有抗肿瘤活性，并且已经用于临床的抗肿瘤治疗。β－月桂烯还广泛作为生产日化产品的工业原料。此外，秃叶黄檗果实的水解产物中富含三萜类化合物，其衍生物具有抗HIV－1蛋白酶作用。由此可知，对秃叶黄檗新鲜果实挥发性成分的研究，为其综合利用以及拓宽黄檗的药用提供了科学依据。

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