近红外漫反射法检测降压类中成药中非法添加尼莫地平

张 勋，林 晓，徐 伟，林 羽*（福建中医药大学药学院，福建 福州 350122）

·药物分析·

近红外漫反射法检测降压类中成药中非法添加尼莫地平

张 勋，林 晓，徐 伟，林 羽*
（福建中医药大学药学院，福建 福州 350122）

目的运用近红外光谱法快速检测降压类中成药中非法添加尼莫地平。方法采用近红外漫反射光谱法，以尼莫地平化学对照品的近红外光谱为参照光谱，采用二阶导数进行光谱预处理，选定6 103-5 972 cm-1特定谱段，阈值为80%。结果采用近红外透射定性模型分析735批样品，结果与液质联用结果一致，准确率达100%。结论建立的定性模型可行，该法快速、简单、准确度高，可用于降压类中成药非法添加尼莫地平的快速筛查。

近红外；尼莫地平；漫反射；降压类中成药

近红外光谱技术 (Near Infeared Spectra，NIRS)具有简单、快速、无损等特点，适合于在广大区域内大规模地对药品的质量进行快速评价分析和监控掺假药品。尼莫地平和尼群地平均为二氢吡啶类抗高血压化学物质，化学结构相似，在透射采集模式中具有相同的特征性，笔者曾利用该性质采用透射法同时检测降压类中成药中非法添加尼莫地平和尼群地平。相同的物质在不同采集模式下特质性有差异，本文采用近红外漫反射采集模式，确定尼莫地平单一成分特征谱段，评价降压类中成药光谱图与尼莫地平对照品光谱图的相似程度，快速判断降压类中成药中是否含有尼莫地平[1-4]。

1 仪器和试药

1.1 仪器

Bruker-MPA近红外光谱仪 (OPUS 6.5光谱分析软件)，Aglient 1200 Series-6410 Triple Quad高效液相色谱质谱联用仪 (安捷伦公司)，分析天平XS205DU、AL204-IC（上海梅特勒公司）。

1.2 试药

实验用样品来源于2009年福建省食品药品检定研究院抽样品种中的735批检品，涉及26个品种。氢氯噻嗪对照品、尼莫地平对照品、尼群地平对照品、硝苯地平对照品、卡托普利对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100309-200702,100270-200002，100585-200602，100338-200502，100318-200602），盐酸普萘洛尔原料药（江苏省句容市兴源化工厂，质量分数：99.6%，批号：20090826），维C银翘片（福建省食品药品检定研究院2008年全国评价性抽样），金牡感冒片（漳州片仔癀药业股份有限公司，批号:0906014），羚羊感冒胶囊（漳州市生物化学制药厂，批号:09302），肠炎宁片（江西天施康中药股份有限公司，批号:20080627），盐酸苯海拉明片（临汾宝珠制药有限公司，批号：080201）。

2 NIR光谱采集

2.1 光谱采集条件

光谱采集范围：12 500-3 600 cm-1，扫描次数64，分辨率8 cm-1，方式：积分球漫反射。

2.2 采集对照品光谱图

取尼莫地平对照品，放在积分球检测口处检测。按光谱采集条件采集光谱图。

2.3 采集样品光谱图

样品取用量为一次服用剂量。片剂和丸剂直接研细，胶囊剂去除囊壳，直接取内容物。将样品粉末装入石英样品杯中，按光谱采集条件采集原始光谱图。每批样品重复扫描3次，取平均光谱进行测试。26个品种样品各取一批，共26批样品原始光谱图如图1所示。

图1 26个品种近红外漫反射原始光谱图

3 LC-MS/MS法检测降压类中成药尼莫地平成分

3.1 色谱条件

色谱柱：Welch XB-C18分析柱 （4.6× 250 mm，5 μm）；柱温：30℃；流动相：乙腈-水（70∶30），等度洗脱；流速：0.5 mL/min；进样体积：5 μL。

3.2 质谱条件

电离方式：ESI负离子检测模式；扫描模式:多反应监测（MRM）；毛细管电压：4 000 V；气体流速: 6 L/min；雾化器压力:30 psi;其他质谱条件参数详见表1。

表1 质谱MRM参数

3.3 对照品溶液的配制

精密称取尼莫地平对照品10 mg,置于25 mL棕色容量瓶中，加乙腈溶解，稀释至刻度，摇匀，使用时用乙腈稀释成不同浓度的标准工作溶液。

3.4 供试品溶液的配制

片剂、丸剂，取一次服用剂量，研细，精密称定；胶囊剂，取一次服用剂量，倾出内容物，研细，并剪碎囊壳，精密称定；将样品粉末置于50 mL棕色量瓶中，加入45 mL乙腈超声10 min，放冷至室温，乙腈定容至刻度，摇匀；离心机离心15 min（4 000 r/min）；精密吸取上清液100 μL至250 mL棕色容量瓶中，乙腈稀释至刻度，0.2 μm滤膜滤过，即得。

4 结果

4.1 LC-MS/MS结果

对样品进行分析，样品均未检出含有尼莫地平。

4.2 NIR结果

以尼莫地平对照品光谱图为参考光谱，采用二阶导数光谱预处理方式，选取6 103-5 972 cm-1为特征吸收谱段，阈值设定为80%，对735批样品进行测试并与液质联用结果进行比较，未有样品含有尼莫地平成分，与液质联用检测结果一致。

4.2.1 NIR特征谱段选择 将清脑降压片 （吉林省通化博祥药业股份有限公司），添加了尼莫地平原料药的清脑降压片和尼莫地平原料药的NIR图谱经二阶导数（平滑点13）预处理后，分段比较各谱段相似性 （如图2所示），发现在6 103-5 972 cm-1谱段，样品B、C、D与A具有相同的四重特征峰位，特征性明显，样品E与A的峰形有差异。随着样品中尼莫地平量的增多（B＞C＞D）,峰高和峰谷越接近A，信号越强。

图2 尼莫地平、清脑降压片及清脑降压片模拟样品的NIR谱图

4.2.3 NIR特征谱段验证 称取清脑降压片粉末约2 g，逐加尼莫地平原料药，混匀，研细，制备实验室模拟样品0-6号；称取降压片粉末约2 g，制备实验室模拟样品7-10号，测试相关系数，测试结果如表2所示。

尼莫地平临床最低初始剂量为40 mg,根据最次低始剂量及清脑降压片、降压片的用法用量，要保证添加的尼莫地平具有药效，在样品中非法添加的尼莫地平的量应在1.3%～2% 范围。从表2可知，模拟样品相关系数随着尼莫地平添加量的增多而增大，进一步证明6 103-5 972 cm-1是尼莫地平的特征谱段。在两种处方差异大的基质中添加尼莫地平，制备模拟样品，达到阈值的尼莫地平量均小于最低初始剂量，表明选取6 103～5 972 cm-1谱段可以排除清脑降压片和降压片基质的干扰，所建立的方法可以满足快速筛查尼莫地平的需要[5]。

4.3 NIR模型验证结果

4.3.1 模型适用性 在26个样品 (如表3所示)中添加尼莫地平原料药40 mg，混匀，研细，制备26种模拟样品。以尼莫地平对照品光谱图为参考光谱，采用建立的相关系数模型测试样品，模拟样品相关系数均大于阈值80%，表明6 103～5 972 cm-1谱段可以排除基质的干扰，所建立的方法适用性强，可以满足快速筛查尼莫地平的需要。

4.3.2 专属性试验 采用建立的尼莫地平相关系数模型测试氢氯噻嗪对照品、尼群地平对照品、硝苯地平对照品、卡托普利对照品、盐酸普萘洛尔原料药、维C银翘片、金牡感冒片、肠炎宁片、盐酸苯海拉明片和羚羊感冒胶囊，相关系数均小于80%，未被识别为含有尼莫地平，表明此模型专属性强。

表2 近红外相关系数法对清脑降压片和降压片模拟样品预测结果

5 讨论

5.1 分辨率的选择

在扫描累加次数保持64不变的情况下，将分辨率设置为4、8、16、32、64 cm-1扫描尼莫地平原料药。从理论上说分辨率越高，对样品的信息掌握越细致，也就越容易进行光谱分析，但是所携带的与样品无关的信息就越多。从图3可以得出尼莫地平在分辨率为 4 cm-1，显示出更为精细的信息，但是由于噪声大，导致6 103-5 972 cm-1处峰的形状变形，无用信息干扰尼莫地平特征性。当分辨率为8 cm-1时，6 103-5 972 cm-1特征峰的峰形明显优于分辨率为4 cm-1、16 cm-1和32 cm-1，故将样品光谱采集条件的分辨率设置为8 cm-1。[6]

5.2 选择和优化特征谱段

在近红外光谱区域内一般在9 000-4 000 cm-1内的信息量最为丰富，此波段区域主要是O-H、N-H和C-H化学键一级倍频、二级倍频和组合频吸收，选取特征谱段是一般从该谱段区域开始。尼莫地平原料药的近红外二阶倒数光谱图可知，在6 200-4 000 cm-1波段下，谱图的信息量丰富，首先考虑在信息量丰富和吸收强度大的6 200-4 000 cm-1波段下寻找特征谱段，通过对比尼莫地平原料药、样品及模拟样品的近红外二阶导数光谱，选取6 103-5 972 cm-1作为特征谱段。

6 结论

建立的近红外漫反射模型，无需样品预处理，利用近红外仪器配置的OPUS软件计算样品与尼莫地平纯品近红外光谱局部区域之间相关系数，即可对样品中所含降压类中成药中是否含有尼莫地平进行判别，实现对非法添加尼莫地平的快速检测。与传统的分析方法相比，该方法快速、有效，可用于现场的筛查，对于药品质量突发事件的检测有其独特的优势。

表3 26个品种信息

图3 不同分辨率二阶导数光谱图

[1]陆婉珍.现代近红外光谱技术[M].2版.北京：中国石化出版社, 2007:1.

[2]Y.J.Wu,Y.Jin,Y.R.Li,et al.NIR spectroscopy as a process analytical technology（PAT）tool for on-line monitoring of an extraciton process[J].Vibrational Spetroscopy,2012,58:109-118.

[3]金 叶,吴永江,刘雪松,等.蟾皮提取液浓缩过程中吲哚类生物碱等多指标近红外快速检测研究[J].中国药学杂志,2012,47(9):712-717.

[4]Sylvie B,David R,Maryse R,et al.Rapid and non-destructive analysis of apricot fruit quality using FT-near-infrared spectroscopy[J].Food Chemistry,2009,113(4):1 323-1 328.

[5]金 鸣，吴春敏，张 勋.近红外光谱法鉴别维C银翘片中L-抗坏血酸[J].药物分析杂志，2010,30(12):2 412-2 417.

[6]池文杰，张 勋，陈海滨,等.近红外特征谱段相关系数法测定降压类中成药中添加氢氯噻嗪 [J].药物分析杂志,2014,34（2）：310-313.

（本文编辑 贺慧娥）

Detection of Nimodipine Illegally Added into Antihypertensive Chinese Medicine by Near Infrared Reflectance Spectra

ZHANG Xun，LIN Xiao,XU Wei，LIN Yu*
(School of Pharmacy,Fujian University of Chinese Medicine,Fujian,Fuzhou 350122,China)

ObjectiveTo rapid detect nimodipine illegally added into antihypertensive Chinese medicines by near infrared reflectance spectra (NIRS).MethodsEstablished the model to detect nimodipine by NIRS with the second derivative spectra prêtreatment (13 smooth points),6103-5972 cm-1 as the characteristic spectral bands and thresholed was 80%.Results735 baches of samples were analyzed by NIRS model.The result with 100%accuracy rate was in accordance with that by HPLCMS.ConclusionThe qualitative model was viable,fast,simple and accurate and could be used to screen amtihypertensive Chinese medicines added substances illegally.

near infrared reflectance spectra;nimodipine;diffuse reflection

R28

A

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.12.018

2015-11-25

福建省中青年教师教育科研项目资助（JA13158）。

张 勋，女，讲师，研究方向：中药质量标准。

*林 羽，男，教授，E-mail:yulam@163.com。