五汁饮对酒精性肝、胃组织形态学的影响

冯楚雄，朱建平，瞿昊宇，谢梦洲，*，肖作为*，向 茗1，2，（1.湖南中医药大学中医诊断研究所，湖南 长沙 410208;2.湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室，湖南 长沙 410208；.湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心，湖南 长沙 410208）

五汁饮对酒精性肝、胃组织形态学的影响

冯楚雄1,2，朱建平1,2，瞿昊宇3，谢梦洲1,2，3*，肖作为3*，向 茗1，2，3
（1.湖南中医药大学中医诊断研究所，湖南 长沙 410208;2.湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室，湖南 长沙 410208；3.湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心，湖南 长沙 410208）

目的观察五汁饮对急性酒精性肝细胞损伤、胃黏膜损伤的保护作用。方法SD大鼠分为5组，分别为空白组，模型组，葛花组，五汁饮低剂量组及高剂量组。预防性给药后，空白对照组蒸馏水灌胃，其余各组按照1.5 mL/100 g的高度酒（酒精度52%）给予灌胃，连续1周，观察并比较各组肝、胃的损伤情况。结果五汁饮低剂量组胃黏膜损伤指数低于模型组（P＜0.05），五汁饮高剂量组胃黏膜损伤指数显著低于模型组（P＜0.01）；HE染色结果显示，五汁饮可减轻酒精性肝细胞损伤及胃黏膜损伤，五汁饮高剂量组作用更明显。结论五汁饮可以改善急性酒精性肝细胞损伤、胃黏膜损伤，具有保肝护胃作用。

五汁饮；酒精性肝损伤；酒精性胃黏膜损伤；苏木精-伊红染色；梨；荸荠；藕

长期饮酒可引起精神障碍、胃溃疡以及脂肪肝和酒精性肝炎和肝硬化等疾病，长期饮酒会导致胃癌、肝癌[1]。五汁饮出自吴鞠通《温病条辨》，由鲜梨汁、鲜荸荠汁、鲜芦根汁、鲜麦冬汁和鲜藕汁组成，其中，鲜梨汁清热化痰，润燥生津；鲜荸荠润肺养胃、清热化痰；鲜藕汁清热生津；芦根汁生津除烦，清热止呕；麦冬汁滋肺养胃，生津润燥；五味共奏清热养阴，生津止渴之功，可以改善酒醉引起的口渴、呕逆，头痛等症状。本实验通过观察五汁饮对酒精性肝、胃损伤组织形态学的影响，探讨五汁饮对酒精性肝胃损伤的保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 五汁饮：取梨200 g，荸荠500 g，藕500 g，芦根50 g，麦冬25 g。梨、荸荠、莲藕洗净去皮，榨汁，过滤，得混合的新鲜汁液500 mL。芦根、麦冬放入锅内，加入1 L水，煮沸5 min后，改文火煎煮30 min，滤过，滤液浓缩至135 mL，冷却至室温后合并混合的新鲜汁液，得2.0 g/mL浓缩液，密封，放入4℃冰箱冷藏备用。

阳性对照药葛花浓缩液：取葛花50 g，加入500 mL水，煮沸后改文火煮10 min，滤过，重复煎煮一次，合并两次滤液，将滤液浓缩为0.5 g/mL浓缩液，密封，放入4℃冰箱冷藏备用。

1.1.2 动物 SPF级SD大鼠50只，雄性，体质量（200±20）g，由湖南中医药大学动物实验中心提供。

1.2 方法

1.2.1 动物分组与处理 实验动物按照随机数字表法分成空白对照组、模型组、五汁饮低剂量组、五汁饮高剂量组、葛花组。适应性喂养一周后，各组大鼠禁食10 h，不禁水，空白组、模型组给予蒸馏水灌胃，五汁饮低剂量组、高剂量组以五汁饮灌胃，给药剂量分别为23.0、46.0 g/kg，葛花组给予葛花水煎液0.15 g/kg。各组给药容量为 10 mL/kg。给药30 min后，空白对照组蒸馏水灌胃，其余各组按照1.5 mL/100 g的高度酒（酒精度52%）给予灌胃，每天一次，连续1周。末次给药2 h后进行标本采集。

1.2.2 胃、肝标本采集 用 10%水合氯醛40 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，打开腹腔，暴露肝脏和胃。取出胃，沿胃大弯剪开，用0.9%生理盐水冲去胃内容物后展平，记录肉眼可见胃黏膜改变，并计算胃黏膜损伤指数。在胃黏膜损伤明显处，剪取1.0 cm×1.0 cm大小的组织，置于4%多聚甲醛中固定24 h。每只大鼠选取同一片肝脏同一位置1.5 cm×1.5 cm大小的组织，置于4%多聚甲醛中固定24 h。标本常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察肝脏、胃黏膜形态学变化（由湖南中医药大学病理实验室协助完成）。

1.2.3 观察指标 肝脏病理学观察：肝脏有无肝细胞脂变、坏死；肝小叶及门管区有无炎症，肝组织内有无纤维组织增生，肝细胞病变范围的大小。参考赵敏等[2]的方法对肝细胞病变进行分级：0级表示肝细胞无病变或变性范围小，基本正常；I级表示病变的肝细胞不超过1/4；II级表示病变的肝细胞不超过1/2；III级表示病变的肝细胞不超过3/4；IV级表示肝组织几乎都发生病变。胃黏膜损伤指数评定：肉眼观察胃黏膜改变，按溃疡指数[3]评定改良法计算损伤指数，具体评分如下：完整的胃黏膜为0分；黏膜充血水肿，散在出血点，点状出血直径≤1 mm，1～5点为1分；＞5点为2分；糜烂（出血直径≤5 mm）1处为3分；条索状出血（出血直径≥5 mm）1处为5分。以全胃病灶得分总和作为动物胃黏膜损伤指数。

1.3 数据处理及统计学分析

2 结果

2.1 五汁饮对酒精性肝损伤的影响

表1 大鼠肝脏病理变化结果（n=10)

如表1所示，给药后各组肝损伤比较有显著差异（χ2=29.756，P＜0.01），提示酒精对肝脏具有损伤作用，急性酒精性肝损伤模型制备成功。模型组、葛花组、五汁饮低剂量组、五汁饮高剂量组的大鼠肝细胞有不同程度的病理改变（χ2=7.998，P＜0.05）。与模型组相比，葛花组、五汁饮高剂量组肝损伤程度均有统计学差异Z=－2.565，P＜0.05），五汁饮低剂量组无统计学差异Z=－1.362，P＞0.05）。葛花组与五汁饮高剂量组比较，无统计学差异W=105.000，Z=0.000，P＞0.05）。提示葛花组、五汁饮高剂量组的肝损伤比模型组轻，葛花、五汁饮高剂量对于酒精性肝损伤有一定改善作用，五汁饮改善酒精性肝损伤与给药剂量有关。

2.2 五汁饮对胃黏膜损伤指数的影响

空白组大鼠均未见胃黏膜损伤，黏膜呈淡红色，损伤指数为0。与空白组相比，其余各组酒精灌胃均出现不同程度的胃黏膜损伤（P＜0.01），肉眼可见黏膜充血，散在出血点，糜烂甚至条索状出血。其中，模型组黏膜充血明显，多见条索状出血，葛花组、五汁饮低剂量组、五汁饮高剂量组主要是点状出血为主，偶见糜烂、条索状出现的现象。各组胃黏膜损伤指数统计结果显示，与模型组相比，葛花组、五汁饮低剂量组的胃黏膜损伤指数有统计学差异 （P＜0.05），五汁饮高剂量具有显著统计学差异（P＜0.01）。提示葛花、五汁饮都能改善酒精性胃损伤，且五汁饮高剂量改善作用明显。见表2。

表2 大鼠胃黏膜损伤指数统计结果 （±s,n=10)

表2 大鼠胃黏膜损伤指数统计结果 （±s,n=10)

注：与空白组相比，△P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

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2.3 光镜下肝脏病理组织观察

如图1所示，空白组肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列，细胞核明显，结构正常。模型组、葛花组、五汁饮低剂量组、五汁饮高剂量组的肝细胞出现不同程度的水肿，表现为细胞染色不均，胞质疏松化和气球样变，肝细胞肿大，排列紊乱，肝窦受压变窄，并伴有炎症细胞浸润 （见图1）。此外，模型组有1例出现脂肪变，HE染色不均，肝细胞胞质内出现大小不等的脂肪滴，有些细核被挤向一边（见图1.E）；模型组1例出现肝细胞坏死，大量炎症细胞浸润（见图1.F）。总体上看，葛花组、五汁饮高剂量组相对模型组损伤程度轻。

2.4 光镜下胃黏膜病理观察

光镜下可见空白组大鼠胃黏膜上皮完整，连续性好，腺体排列整齐，黏膜层组织结构层次清楚。其余各组可见不同程度的胃黏膜受损，表现为黏膜上皮细胞受损脱落，黏膜上皮变薄、充血，壁细胞水肿，分泌物增多，毛细血管增生，黏膜层坏死，炎症细胞浸润。模型组见黏膜上皮细胞坏死脱落，排列稀疏，胃小凹结构破坏，胃腺充血坏死，伴有大量炎症细胞浸润（见图2.K-L）。与模型组相比，葛花组、五汁饮低剂量组、五汁饮高剂量组胃黏膜损伤程度明显较轻，光镜下可见胃黏膜有少量充血，以散在呈点状充血为主，少量炎细胞浸润，黏膜上皮细胞轻度脱落，胃小凹结构完整，局部可见壁细胞轻度变性水肿。见图2。

图1 各组大鼠肝脏病理形态学光镜图（HE染色，×400）

图2 各组大鼠胃黏膜病理形态光镜图（HE染色，×400）

3 讨论与结论

酒精从口腔进入人体后，经胃和肠道吸收后通过血液循环进入肝脏，有90%～95%的酒精在肝脏代谢。酒精的主要成分之乙醇，乙醇在乙醇脱氢酶的作用下转变为乙醛，乙醛在乙醛脱氢酶的作用下转变为乙酸，继而转变为乙酰辅酶A参与机体的物质代谢，最后氧化为二氧化碳和水排出体外。

由于乙醇分子中既有疏水性的烃基，又含亲水性的羟基，故可以破坏黏膜的防御系统，使胃肠黏膜极易遭受胃酸、各类消化酶、胆汁等的侵袭，进而引起黏膜组织水肿、糜烂、甚至出血、坏死，临床上经常表现为腹部烧灼样痛，胃部不适，甚至出现呕吐、呕血、便血等症状[4]。目前研究认为酒精性胃黏膜损害可能与下列因素有关：（1）乙醇对胃黏膜上皮细胞的直接损伤，破坏胃黏膜屏障的结构和功能，使胃内H+反渗增加，进而加重胃黏膜损伤；（2）乙醇可引起黏膜下血管内皮损伤，使血管扩张，小血管破裂、黏膜下出血等改变，进一步破坏黏膜屏障；（3）由于黏膜上皮和血管内皮损伤产生大量炎症介质，引起中性粒细胞浸润，进一步加重黏膜损害；（4）乙醇可刺激胃酸分泌；（5）乙醇可使前列腺素E2(PGE2)、内源性一氧化氮（NO）合成和释放减少，进而减少PGE2、NO对胃黏膜的保护作用[5]；（6）乙醇的代谢产物乙醛可生成氧自由基导致胃黏膜损伤[6]。

酒精对肝的损伤主要是其代谢产物乙醛引起的。乙醛易在肝中堆积，乙醛是肝毒性物质.可引起肝细胞坏死，包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬化乃至肝癌。乙醛对肝功能损伤的机理：（1）干扰线粒体氧化磷酸化和电子传递系统；（2）通过黄嘌呤氧化酶产生超氧离子，使脂质过氧化，破坏细胞膜，氧化应激反应还会导致线粒体功能障碍、脂质沉积、炎症、凋亡等[7]；（3）使微管蛋白解聚，细胞内蛋白质和水分滞留，细胞肿胀，继而坏死[8-9]；（4）乙醛可与肝细胞膜结合形成新抗原，产生相应抗体，从而触发自身免疫反应,导致肝脏的免疫损伤[10]；（5）乙醛通过促进肝星状细胞产生胶原，从而导致酒精性肝纤维化和肝硬化形成[11]。

本实验结果显示，五汁饮、葛花均能减轻酒精所致的肝损伤、胃黏膜损伤，五汁饮改善急性酒精性肝胃损伤，与低剂量组相比，高剂量组肝胃损伤比低剂量组轻，改善作用比低剂量组明显。在改善酒精性肝损伤方面，五汁饮高剂量组与葛花组改善的效果都能减轻肝细胞损伤，而低剂量组改善作用并不明显。在改善酒精性胃黏膜损伤方面，五汁饮高剂量组效果显著，低剂量组及葛花组也能减轻酒精对胃黏膜的损伤。

五汁饮的组成成分莲藕、荸荠、梨、麦冬、芦根，具有清热生津的功效，此外，鲜莲藕还具有凉血化瘀的功效，现代医学研究表明，莲藕所含的鞣酸有收缩血管和止血的作用[12]，这对于酒精所致的胃黏膜充血、糜烂具有一定的改善作用。芦根中的芦根多糖具有抗肝纤维化作用[13]，并能够增加GSH的含量，增强机体细胞的防御和解毒作用，降低脂质过氧化产物MDA含量，从而减轻有害物质对肝脏的损伤[14]，这些可能是五汁饮保肝护肝的物质基础。此外，与葛花（汤）相比，五汁饮富含糖类、淀粉等，饮用后需要消化吸收的时间长，在一定程度上可以减少酒精的吸收，从而减少酒精对胃、肝脏的损伤。综上所述，五汁饮保肝、护胃作用可能与其组分抗氧化、抗自由基作用或减少酒精吸收有关。

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（本文编辑 杨 瑛）

Effect of Wuzhiyin on the Cell Morphology of Alcoholic Hepatocytes and Gastric Mucosal Cells

FENG Chuxiong1,2,ZHU Jianping1,2,QU Haoyu3,XIE Mengzhou1,2*,XIAO Zuowei3*,XIANG Ming1,2,3
（1.Institute of TCM Diagnostics,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China；2.Hunan Key Laboratory of TCM Diagnostics,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China 3.Hunan Engineering Research Center of Drug and Food Homology Functional Food,Changsha,410208,China）

ObjectiveTo observe the protective effect of Wuzhiyin on acute alcoholic liver injury and gastric mucosal injury.MethodsSD ratswererandomlydivided intonormalgroup,modelgroup,Gehuagroup,low dosegroup of Wuzhiyin,high dose group of Five Juice Drink.After prophylactic administration of medicine,the blank control group was given distilled water by gavage,other groups were given 1.5 mL/100 g wine(alcohol 52%)for one week by gavage,and the injury of liver and gastric mucosa in each group were observed.ResultsThe gastric mucosal lesionindex of low dose group of Wuzhiyin was lower than that of model group (P＜0.05),and the high dose group of Wuzhiyin was also lower than that of model group (P＜0.01).The results of HE staining showed that Wuzhiyin could reduce the damage of alcohol induced liver injury and gastric mucosal injury,and the effect of high dose group of Wuzhiyin was more obvious.ConclusionWuzhiyin can improve the acute alcoholic liver injury,gastric mucosal injury,show protective effect on stomach.

Wuzhiyin;alcoholic liver injury;alcoholic gastric mucosal injury;hematoxylin-eosin staining;pear;water chestnut;lotus root

R575.5

A

doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2015.12.014

2015-10-30

湖南省教育厅创新平台基金资助（12K083）；湖南中医药大学中医诊断学国家重点学科开放基金资助（2014-27）。

冯楚雄，女，在读硕士研究生，研究方向：常见疾病中医药膳防治。

*谢梦洲，女，教授，硕士研究生导师；E-mail：xiemz@163.com。肖作为，男，讲师，E-mail:574512660@qq.com.