HPLC法测定曲安奈德新霉素贴膏中醋酸曲安奈德的含量

胡守莲 邱栋樑

河南省信阳市食品药品检验所，河南信阳 464000

HPLC法测定曲安奈德新霉素贴膏中醋酸曲安奈德的含量

胡守莲 邱栋樑

河南省信阳市食品药品检验所，河南信阳 464000

目的建立曲安奈德新霉素贴膏中醋酸曲安奈德含量的HPLC测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，使用DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，以甲醇-水（60∶40）作为流动相，检测波长240nm，流速1.0mL/min，柱温为30℃。结果醋酸曲安奈德在0.05～0.50μg范围内线性较好（r=0.9999）,平均回收率为98.09%（RSD为0.73%）。结论该方法快速、简便、可靠、准确度高、重复性好，处方中其他成分对测定亦无干扰，分离效果好，可用于曲安奈德新霉素贴膏中醋酸曲安奈德含量测定。

曲安奈德新霉素贴膏；醋酸曲安奈德；HPLC；含量测定

曲安奈德新霉素贴膏是由上海卫生材料厂有限公司生产的复方制剂，其组份为醋酸曲安奈德、硫酸新霉素。用于局限性神经性皮炎、慢性湿疹。也可用于小面积的银屑病。还有文献报道本品用于治疗结节性痒疹[1]和荨麻疹[2]安全有效。醋酸曲安奈德为肾上腺皮质激素类药，外用有抗炎、抗过敏及止痒作用，能消除局部非感染性炎症引起的发热、发红及肿痛[3]。目前，曲安奈德新霉素贴膏在临床上仍在广泛使用，质量标准收载在国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第十一册中，无含量测定，为了完善药品质量标准，本文采用高效液相色谱法进行曲安奈德新霉素贴膏中醋酸曲安奈德含量的测定。

1 仪器与材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪（戴安Ultimate 3000，DAD检测器）；电子天平（普利赛斯 92SM-202A-DR）。

1.2 材料

醋酸曲安奈德对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100125-200404），曲安奈德新霉素贴膏（上海卫生材料厂有限公司，批号：111103，120512 130714）。甲醇为色谱醇（SIGMA-ALDRICH，批号SHBC0053V），水为纯化水，其他化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DIONEX Acclaim 120 C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（60∶40），检测波长：240nm[4]，流速：1.0mL/min，柱温：30℃，进样体积为10μL，理论板数不低于3000。

2.2 试验溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称定醋酸曲安奈德对照品12.5mg，置100mL容量瓶中，加甲醇适量振摇使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取对照品贮备溶液5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，备用。

2.2.2 供试品溶液制备[5-6]取本品约1.5片（39cm2），除去盖衬，剪成小块，精密称定，置50mL烧杯中，加入石油醚（60～90℃）35mL，振摇，使膏体溶解，溶液转移至另一烧杯中，容器及残渣以石油醚（60～90℃）洗涤三次（20mL、15mL、10mL），洗涤液并入上述溶液中，再用同体积的乙醇洗涤容器及残渣，将乙醇洗涤液在边搅拌下缓缓加入上述合并的石油醚液中，静置，使沉淀完全，滤过，滤液置分液漏斗中，容器及沉淀以石油醚（60～90℃）-乙醇（1∶1）混合液洗涤3次（20mL、10mL、10mL），洗液并入分液漏斗中，加水20mL，振摇，静置，取乙醇液，石油醚层用少量80%乙醇液洗涤3次，合并乙醇液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇适量，振摇使溶解，置25mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，备用。

2.2.3 阴性供试品溶液制备 取不含醋酸曲安奈德的空白制剂样品，照2.2.2项下供试品溶液制备方法制备，备用。

2.3 系统适用性试验

分别吸取2.2项下的对照品溶液，阴性供试品溶液，供试品溶液各10μL注入色谱仪并记录色谱图（如图1），醋酸曲安奈德峰与其它峰分离完全，阴性供试品溶液在醋酸曲安奈德出峰位置无干扰。

图1 HPLC色谱图

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系 取2.2.1项下的对照品溶液分别进2μL、5μL、10μL、15μL、20μL，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，以进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线（如图2），线性回归方程为：y=26.544x+0.1067（r=0.9999）。表明醋酸曲安奈德在0.05～0.50μg范围内线性关系良好。

图2 醋酸曲安奈德线性关系图

2.4.2 稳定性试验 取样品（批号：111103）,按2.2.2项下方法制备。分别放置0h、4h、8h、12h、16h后进样分析，记录峰面积平均值为7.351（RSD为0.46%），表明待测成分在该溶液体系中16h内稳定。2.4.3 精密度试验 精密吸取2.2.1项下对照品溶液10μL，连续进样6次，结果测得醋酸曲安奈德峰面积的平均值为7.659（RSD为0.38%，n=6）。表明仪器精密度良好。

2.4.4 重复性试验 取同一批号（111103）的样品5份，按2.2.2项下方法制备，测定含量，结果表明方法重复性较好。见表1。

表1 重复性试验

2.4.5 回收率试验 取本品（批号：111103）适量，共9份，约为0.75片（19.5cm2）的80%、100%、120%，精密称定，精密加入2.2.1项下醋酸曲安奈德对照品贮备溶液2.5mL，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率。测得醋酸曲安奈德平均加样回收率（n=9）为98.09%，RSD=0.73%。结果表明，用高效液相色谱法测定醋酸曲安奈德含量准确度高。见表2。2.4.6 样品含量测定 按2.2.2项下方法制备，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，按2.1项下色谱条件测定，计算含量。结果见表3。

表2 回收率实验（n=9）

表3 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 提取溶剂选择

用2.2.2项下的方法以石油醚（60～90℃）为溶剂溶解膏体与以氯仿为溶剂溶解膏体进行比较，结果乙醇沉淀后，用氯仿为溶剂的样品过滤后溶液不澄清，故选用石油醚（60～90℃）为溶剂溶解膏体。关于醋酸曲安奈德含量测定方法，目前文献报道主要有高效液相色谱法[7-10]，紫外-可见分光光度法[11]，荧光分析法[12]。高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度快、选择性高和灵敏度高等优点，是质量控制中最为常用的一种分析方法。本研究建立的曲安奈德新霉素贴膏中醋酸曲安奈德含量测定方法，结果醋酸曲安奈德在（0.05～0.50）μg范围内线性较好（r=0.9999）,平均回收率为98.09%，表明该方法快速、简便、可靠、准确度高、重复性好，可用于曲安奈德新霉素贴膏中醋酸曲安奈德含量测定。为曲安奈德新霉素贴膏质量标准的进一步完善提高提供依据。

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Determination of triamcinolone acetonide acetate in triamcinolone acetonide and neomycin paste by HPLC

HU Shoulian QIU Dongliang

Xinyang Provincial Institute of Food and Drug Control,Xinyang 464000,China

ObjectiveTo establish a method for content determination of triamcinolone acetonide acetate in triamcinolone acetonide and neomycin paste by HPLC.MethodsThe experimental condition of the RP-HPLC method was as follows：DIONEX Acclaim 120 C18（250mm×4.6mm，5μm）,with linear gradient elution using methanol and water（60∶40）,The detected wavelength was 240 nm,the flow rate was 1.0 ml/min,The column temperature was at 30℃.ResultsThe fluocinolone acetonide curve was linear in the range of 0.05～0.50μg（r=0.9999）.The average recovery rate was 98.09% withRSDof 0.73%.ConclusionThe method is simple,reliable,accurate and It could be used in the determination of triamcinolone acetonide acetate in triamcinolone acetonide and neomyc in paste

Triamcinolone acetonide and neomycin paste;Triamcinolone acetonide acetate;HPLC;Determination

R927.2

B

2095-0616（2015）05-48-03

2014-11-22）