加味玉屏风散对变应性鼻炎大鼠模型中免疫球蛋白E的影响

田翠玲 雷小平 楚红梅 税民鸿 王定松 李维 钟毅 唐嗣泉

加味玉屏风散对变应性鼻炎大鼠模型中免疫球蛋白E的影响

田翠玲 雷小平 楚红梅 税民鸿 王定松 李维 钟毅 唐嗣泉

目的 探讨加味玉屏风散对变应性鼻炎(allergic Rhinitis，AR)大鼠模型中免疫球蛋白E（IgE）的影响。方法 采用卵清蛋白对SD雌性大鼠做全身致敏与局部攻击方法制作变应性鼻炎大鼠模型，给予加味玉屏风散灌胃后，心脏取血行ELISA法检测免疫球蛋白E。结果 4组间比较,模型组中血浆免疫球蛋白E含量显著高于正常组(P＜0.01)；2个治疗组中免疫球蛋白E的含量明显低于模型组，差异有统计学意义（P＜0.01）。2个治疗组间免疫球蛋白比较，差异无统计学意义。结论 加味玉屏风散能使变应性鼻炎大鼠模型中免疫球蛋白E减少，可起到抗过敏反应的作用。

鼻炎；变应性；玉屏风散；免疫球蛋白E

变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的发病机理属于特异性IgE抗体介导的Ⅰ型变态反应，现发病率呈现逐渐增高的趋势，此病为耳鼻喉科常见的难治性疾病，西医多采用抗组胺和糖皮质激素等治疗，但其易复发，而中医药在改善患者体质方面常有佳效，可减少变态反应性疾病的复发治疗。因此，本研究通过观察玉屏风散加味对AR大鼠模型中免疫球蛋白E的改变，探讨加味玉屏风散治疗变应性鼻炎机理，进一步探讨其调节机体的免疫功能及改善患者的高敏状态机理，为临床治疗提供科学的依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 成年SD大鼠40只，体质量180～240 g，由成都中医药大学动物研究室提供。

1.2 实验试剂及药品 玉屏风散加味：黄芪60 g、白术30 g、防风30 g、细辛9 g、苍耳子12 g、薄荷15 g、白芷15 g组成，由成都中医药大学附属医院中药房提供，按中医传统方法煎煮，浓度0.85 g生药，灌胃。卵清蛋白（美国Sigma公司）；氢氧化铝粉末（成都市科龙化工试剂产）；氯雷他定片：（上海先灵葆雅制药有限公司生产，国药准字H 10970410）。ELISA试剂盒(美国RD公司)。

1.3 动物造模 成年SD大鼠40只，按体质量随机分成正常对照组、模型对照组，玉屏风散加味组，氯雷他定组，每组各10只。参照章如新等[1]方法造模给予卵清蛋白2 mg，氢氧化铝30 mg混悬液，行腹腔注射基础致敏，隔日1次，共7次。再用5%卵清蛋白50 μL/侧滴鼻做局部激发，每日1次，共7次。正常对照组以生理盐水致敏，方法和步骤相同。

1.4 给药方法 造模结束后第2天，将药按人鼠剂量换算后给大鼠灌胃，直至实验结束。玉屏风散加味组：给予加味玉屏风散按原方剂量煎取汁，中药生药12.6 g/kg灌胃；氯雷他定组：将氯雷他定片研磨后溶于生理盐水中，给予氯雷他定片1 mg/ kg灌胃；正常对照组及模型对照组以生理盐水代替。每组每日1次灌胃，每周6次，共2周。给药期间乃给予持续局部抗原攻击，直至实验结束。

1.5 标本采集 在末次激发后30 min后，以10%水合氯醛(3 mL/kg)腹腔注射麻醉后，心脏取血，凝固30 min，1000 r/ min离心15 min，取出血清分装，备ELISA检查用。

1.6 实验方法 实验前20 min从冰箱中取出试剂盒；建立标准曲线；加样洗板；用抗大鼠IgE单抗包被于酶标板上，IgE与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠IgE抗体，形成免疫复合物，加入终止液混匀。在492 nm处测吸光值。根据样品OD值在标准曲线上测定相应大鼠IgE含量。

1.7 统计学方法 采用SPSS 11.5统计软件分析，结果用“x±s”表示，进行方差分析，选用LSD两两比较，比较前进行方差齐性检验。

2 结果

2.1 大鼠模型评分标准及结果 大鼠模型于激发第3～5天后，大鼠出现明显的喷嚏、清涕、搔鼻症状，一直持续到致敏结束后，正常对照组仅偶有抓鼻现象，个别大鼠打喷嚏，于末次激发后30 min内，分别观察动物搔鼻动作、喷嚏、清涕鼻部症状，各指标采用叠加量化记分法，总分超过5分者为模型成功，评分标准见表1。模型对照组与正常对照组间差异均有统计学意义（P＜0.01）。

表1 大鼠鼻部症状评分标准

2.2 免疫球蛋白E（IgE）检测结果 正常对照组IgE低于模型对照组，差异有统计学意义意义（P＜0.01）；模型对照组

IgE明显高于玉屏风散加味组和氯雷他定组，差异有统计学意义（P＜0.01），2个治疗组间差异无统计学意义。见表2。

3 讨论

研究表明玉屏风散能提高Thl／Th 2比值[2]，能使CD4＋／CD8

＋、IL-2分泌显著上升，下调ICAM-1、IL-4的表达，减少P物质释放含量，提高IgG、IgA水平，调节cAMP、cGMP水平及比值，显著改善免疫低下[3-5]；玉屏风散尚能通过抑制嗜酸性粒细胞的活性，降低鼻粘膜组胺含量，提高红细胞免疫功能改善AR患者的高敏状态等。玉屏风散具有双向调节免疫功能[6-8]，提高IgG含量及巨噬细胞的吞噬功能，白细胞吞噬指数明显上升[9]，可提高机体的细胞免疫功能，对于免疫抑制者，可使其TH细胞数明显增加[10]。

本研究表明，模型大鼠经玉屏风散加味治疗后症状明显减轻，免疫球蛋白E显著减少，而AR是IgE介导的鼻黏膜的Ⅰ型变态反应，这就提示我们玉屏风散加味治疗过敏性性鼻炎正是针对变应性鼻炎发病的基本环节进行治疗。临床上，玉屏风散能明显改善变态反应性疾病患者的高敏状态，玉屏风散能抑制血清中IgE的产生，抑制变应性鼻炎肥大细胞脱颗粒，抑制变态反应的迟发相反应的作用，以抑制其过敏症状[11]，调节机体免疫功能、改善过敏体质、增强机体的抗病能力[2]，从而减轻呼吸道炎症，降低呼吸道高反应性，显著缓解临床症状，提高患者生活质量。

表2 变应性鼻炎大鼠模型评分及血清IgE水平(x±s，ng/mL)

[1] 章如新,江德胜,周水淼,等.P物质能神经阻滞剂治疗变应性鼻炎的实验研究[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1994,29(5):282-285.

[2] 花丽.玉屏风颗粒联合氯雷他定片对过敏性鼻炎患者症状及免疫功能的改善作用研究[J].现代中西医结合杂志,2013,22(12),1278-1280.

[3] 王慧珠,洪敏,桂黎黎,等.玉屏风散抗OVA致小鼠过敏性哮喘的作用研究[J].中国中药杂志,2013,38(7):1052-1055.

[4] 李雪嫣.玉屏风散和复芪止汗颗粒对免疫抑制小鼠免疫功能的影响[D].兰州大学，2013.

[5] 刘道猴,崔恩海.玉屏风散加减联合匹多莫德对反复呼吸道感染患者的临床疗效及免疫功能的影响[J].中华中医药学刊,2014, 32(5):1101-1103.

[6] 高彩虹.玉屏苍耳散加味治疗过敏性鼻炎的实验研究及临床疗效观察[D].北京中医药大学,2013.

[7] 段懿洲,肖丹,彭衡阳,等.玉屏风制剂免疫调节作用研究进展[J].亚太传统医药,2012,8(9):200-202.

[8] 杨立新,赵伍西,周宁.联合玉屏风颗粒治疗变应性鼻炎的疗效观察[J].医学理论与实践,2013,26(20):2665-2666.

[9] 刘志严.论玉屏风散对小鼠免疫功能的影响[J].辽宁中医药大学学报,2011,13(12):196-198.

[10] 王妍,石学魁.玉屏风散增强小鼠免疫功能的研究[J].牡丹江医学院学报,2010,31(3):2010-2012.

[11] 张仲林,钟玲,袁明勇,等.玉屏风散对变应性鼻炎肥大细胞活性的抑制作用[J].中药药理与临床,2014,30(1):1-4.

Objective To study the effects of Modified Yuping Feng San on Immunoglobulin E (IgE) of rat model with allergic rhinitis (AR). Methods Rat model of allergic rhinitis was produced by using ovalbumin on SD female rats. ELISA was used to detect heart blood immunoglobulin E after the model rats were given orally Modified Yuping Feng San. Results When compared between these four groups, the proportion of IgE in model group was significantly higher than normal group (P＜0.01). The counts of IgE in two treatment groups were less than model group, the difference was statistically significant (P＜0.01). Conclusion Modified Yuping Feng San can reduce IgE counts in the AR rat model, may play a role in anti-allergic.

Rhinitis; Allergy; Yu Ping Feng san; IgE

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.25.009

四川 611730 四川郫县人民医院眼科耳鼻咽喉科（田翠玲 雷小平楚红梅 税民鸿 王定松 李维 钟毅） 川北医学院耳鼻咽喉头颈外科 （唐嗣泉）