气相色谱法对药品中残留溶剂的检测分析

蓝明玉

[摘要] 目的 探讨苯磺酸氨氯地平中残留溶剂采用顶空气相色谱法测定的应用价值。 方法 采用顶空气相色谱法对苯磺酸氨氯地平中的残留溶剂N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇进行测定。 结果 N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇在考察范围内线性良好，线性范围分别为124.76～396.55mg/L、500.36～1500.55mg/L、50.32～150.17mg/L和500.54～1500.88mg/L；r分别为0.9987、0.9996、0.9998、0.9999；平均回收率分别为101.5%、102.9%、103.3%和102.1%；RSD分别为5.8%、5.1%、5.9%、5.4%；检测限分别为12.9mg/L、10.6mg/L、6.41mg/L和19.8mg/L。 结论 采用顶空气相色谱法测定苯磺酸氨氯地平中残留溶剂含量具有准确度好、灵敏度高、操作简单、重现性好等优点，是苯磺酸氨氯地平实际生产中残留溶剂含量测定的有效方法。

[关键词] 顶空气相色谱法；苯磺酸氨氯地平；残留溶剂；含量测定

[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）11-38-04

[Abstract] Objective To explore application value of headspace gas chromatography in determination of amlodipine besylate residual solvents. Methods Amlodipine besylate residual solvents N， N-dimethylacetamide，ethyl acetate，toluene，isopropanol were determinated by headspace gas chromatography. Results N，N-dimethylacetamide，ethyl acetate，toluene and isopropanol were all in good linearity in the scope of the study and the linear ranges were 124.76-396.55mg/L，500.36-1500.55mg/L，50.32-150.17mg/L and 500.54-1500.88mg/L respectively；r were 0.9987，0.9996，0.9998 and 0.9999 respectively.Average recoveries were 101.5%，102.9%，103.3% and 102.1% respectively.RSD were 5.8%，5.1%，5.9% and 5.4 % respectively.The detection limits were 12.9mg/L，10.6mg/L， 6.41mg/L and 19.8mg/L respectively. Conclusion Headspace gas chromatography in determination of amlodipine besylate residual solvents has some advantages including good accuracy，high sensitivity，simple operation and good reproducibility etc.And it is an effective method of the determination of amlodipine besylate residual solvents in actual production.

[Key words] Headspace gas chromatography；Amlodipine besylate；Residual solvent；Determination

苯磺酸氨氯地平是临床常用的高血压及心绞痛治疗药物，属第三代二氢吡啶类钙离子通道阻断剂，具有吸收好（吸收不受饮食影响），口服生物利用度高，清除半衰期长（一次给药可维持有效血药浓度24h），不良反应少等优点[1-2]。在苯磺酸氨氯地平合成过程中会使用到N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇等二类和三类溶剂，如果这些溶剂残留超标将会对使用人员的身体造成一定的损害，因此，根据2010版《中华人民共和国药典》[3]，本研究旨在建立顶空气相色谱法测定苯磺酸氨氯地平中残留溶剂含量的方法，为苯磺酸氨氯地平实际生产中残留溶剂含量测定的提供借鉴和指导。

1 仪器与试剂

美国安捷伦7890A型气相色谱仪、安捷伦7694E型顶空进样器、瑞士梅特勒-托利多ME104E型电子天平、苯磺酸氨氯地平（北京赛科药业有限责任公司，批号20141015、20141018、20141021）、N-甲基吡咯烷酮（色谱纯，上海晶纯试剂有限公司），乙酸乙酯、N，N-二甲基乙酰胺、异丙醇、甲苯（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 N，N-二甲基乙酰胺的含量测定

2.1.1 色谱条件的选择 选择DB-624（30m× 0.25mm，1.4μm）毛细管色谱柱作为气相色谱柱，以氮气为载气，设置载气流速为1mL/min；采取程序升温的方式，设置起始温度130℃，保持8min，之后以50℃/min快速升温至230℃，保持5min；进样口温度设置为210℃，分流比设定为1︰8；设置氢火焰离子化检测器（FID）温度为250℃；顶空进样平衡温度设置为120℃，平衡30min，顶空进样环温度设定为150℃，体积1mL，传输线温度150℃。

2.1.2 配制溶液 供试溶液的配制：精密称量苯磺酸氨氯地平1.0g，加入到20mL顶空瓶中，之后，精确量取N-甲基吡咯烷酮2mL加入到顶空瓶中，待密封妥善后摇匀，作为供试溶液Ⅰ。

标准储备液的配制：精密称量N，N-二甲基乙酰胺0.6266g，加入到25mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度，充分振摇得标准储备液Ⅰ。精密量取5mL标准储备液Ⅰ，加入到10mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度，充分振摇得标准储备液Ⅱ。

对照溶液的配制：精密量取1mL标准储备液Ⅱ，加入到50mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度，充分振摇得对照溶液Ⅰ[4]，对照溶液浓度为250.64mg/L。

2.1.3 系统适用性试验 取供试溶液Ⅰ和对照溶液Ⅰ，按照“2.1.1”中设定的色谱条件对供试溶液Ⅰ和对照溶液Ⅰ进样分析，，记录色谱图，见图1。结果显示，N，N-二甲基乙酰胺峰形良好，分离度>1.5，理论塔板数>45000。

2.1.4 线性考察 精密量取标准储备液Ⅱ0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL，分别加入到50mL容量瓶中，加入N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度，充分振摇得5个梯度的标准溶液，S1～S5。分别取2mL的标准溶液加入到顶空瓶中[5]，按照“2.1.1”中描述的色谱条件对5个梯度的标准溶液进样分析。选择溶液质量浓度（ρ）为横坐标，另选峰面积（A）为纵坐标，线性拟合得到A=3.146×10-2ρ+1.135（r=0.9987），即为N，N-二甲基乙酰胺的回归方程，其线性范围为124.76～396.55mg/L。

2.1.5 精密度实验 精密量取2mL对照溶液Ⅰ，共5个样本，分别加入到顶空进样瓶中，按照“2.1.1”中描述的色谱条件进样分析，结果显示，N，N-二甲基乙酰胺峰面积的RSD为5.1%，说明仪器精密度良好。

取20141015批苯磺酸氨氯地平，按照“2.1.2”中供试溶液的配制方法配制供试溶液Ⅰ，共配制6个样本[6]，之后按照“2.1.1”中描述的色谱条件进样分析，结果显示，未检出N，N-二甲基乙酰胺。

2.1.6 加样回收试验 精密称取1.0g未检出N，N-二甲基乙酰胺的20141015批苯磺酸氨氯地平，共9个样本，分别加入到20mL顶空瓶中，分别精密加入2.0mL“2.1.4”中标准溶液S2～S4，每个标准溶液3份，密封后充分振摇[7]。按照“2.1.1”中描述的色谱条件进样分析，计算其平均回收率为101.5%，RSD为5.8%。

2.1.7 检测限与定量限 对于定量限与检测限试验可参考文献[8]，采取逐步稀释法进行试验，最终得到N，N-二甲基乙酰胺的定量限为43.4mg/L，检测限为12.9mg/L。

2.1.8 样品含量测定 按照“2.1.2”中操作条件及“2.1.1”描述的色谱条件分别对20141015、20141018、20141021共3批苯磺酸氨氯地平样品进样分析，结果显示N，N-二甲基乙酰胺未检出。

2.2 乙酸乙酯、异丙醇、甲苯的含量测定

2.2.1 色谱条件的选择 气相色谱柱选择DB-WAX毛细管柱（30m×0.32mm，0.25μm）；以氮气为载气，设置载气流速为1mL/min；采取程序升温的方式，设置起始温度60℃，保持5min，之后以50℃/min的速度升温至220℃，维持3min；设置进样口温度为210℃，分流比为6∶1；设置氢火焰离子化检测器（FID）温度为250℃；顶空进样平衡温度设置为90℃，平衡30min，顶空进样环温度设定为120℃，体积1mL，传输线温度100℃。

2.2.2 配制溶液 供试溶液的配制：精密称量苯磺酸氨氯地平0.4g，加入到20mL顶空瓶中，精确加入2mL N，N-二甲基甲酰胺，密封后充分振摇溶解，作为供试溶液Ⅱ。

标准储备液的配制：精密称量乙酸乙酯5.0016g，甲苯0.50013g，异丙醇5.0025g，一起加入到25mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，充分振摇得标准储备液Ⅲ。精密量取5mL标准储备液Ⅲ，加入到10mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，充分振摇得标准储备液Ⅳ。

对照溶液的配制：取标准储备液Ⅳ1mL，精密量取，加入到50mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，充分振摇得对照溶液Ⅱ，最终得到的乙酸乙酯、异丙醇、甲苯3种对照溶液浓度依次为1000.26、1000.29、100.36mg/L。

2.2.3 系统适用性试验 取供试溶液Ⅱ和对照溶液Ⅱ，按照“2.2.1”中色谱条件对供试溶液Ⅱ和对照溶液Ⅱ进样分析，记录色谱图，见图1。结果显示，乙酸乙酯、异丙醇和甲苯峰形良好，分离度>1.5，理论塔板数>45000。

2.2.4 线性考察 精密量取标准储备液Ⅳ0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL，分别加入到50mL容量瓶中，加入N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，充分振摇得5个梯度的标准溶液，S6～S10。分别取2mL的标准溶液加入到顶空瓶中，按照“2.2.1”中色谱条件对5个梯度的标准溶液进样分析。选择溶液质量浓度（ρ）为横坐标，另选峰面积（A）为纵坐标，线性拟合得到A=9.387×10-2ρ-1.602（r=0.9996），即为乙酸乙酯的回归方程，其线性范围为500.36～1500.55mg/L；异丙醇的回归方程为A=4.925×10-2ρ-0.556（r=0.9999），线性范围为500.54～1500.88mg/L；甲苯的回归方程为A=0.112×10-2ρ-7.786（r=0.9998），线性范围为50.32～150.17mg/L。

2.2.5 精密度实验 精密量取2mL对照溶液Ⅱ，共5个样本，分别加入到顶空进样瓶中，按照“2.2.1”中色谱条件对5个样本进样分析，分析结果显示，乙酸乙酯、异丙醇、甲苯峰面积的RSD分别为3.3%、3.4%、3.5%，说明仪器精密度良好。

取20141018批苯磺酸氨氯地平，按照“2.2.2”中供试溶液的配制方法配制供试溶液Ⅱ，共配制6个样本，之后按照“2.2.1”中色谱条件对供试溶液Ⅱ 6个样本分别进行进样分析，结果未检出乙酸乙酯和异丙醇，检出样品中甲苯含量低于定量限。

2.2.6 加样回收试验 精密称取0.4g 20141018批苯磺酸氨氯地平，共9个样本，分别加入到20mL顶空瓶中，分别精密加入2.0mL“2.2.4”中标准溶液S7～S9，每个标准溶液3份，密封后充分振摇。按照“2.2.1”中描述的色谱条件进样分析，乙酸乙酯、甲苯、异丙醇的平均回收率分别为102.9%、103.3%和102.1%，RSD分别为5.1%、5.9%、5.4%。

2.2.7 检测限与定量限 采取逐步稀释法进行定量限与检测限试验，得到乙酸乙酯、甲苯、异丙醇的定量限分别为3.48、1.88和5.97mg/L，检测限分别为10.6、6.41和19.8mg/L。

2.2.8 样品含量测定 按照“2.2.2”中操作条件及“2.2.1”中色谱条件分别对20141015、20141018、20141021共3批苯磺酸氨氯地平样品进样分析，结果未检出乙酸乙酯和异丙醇，检出三批样品中均含有甲苯，但甲苯含量均低于定量限。

3 讨论

顶空气相色谱法具有灵敏、准确度高、重现性好、简单、自动化程度高等优点，在药品实际生产中可用于残留有机溶剂的质量控制。临床常用的高血压及心绞痛治疗药物苯磺酸氨氯地平合成过程中会使用到N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇等二类和三类溶剂，这些溶剂如果残留超标将会对患者的身体造成一定的损害，影响患者的治疗和健康，因此，可采用顶空气相色谱法对苯磺酸氨氯地平中残留溶剂含量进行测定，保证药品的质量安全。

3.1 色谱条件的选择

3.1.1 色谱柱的选择 苯磺酸氨氯地平中N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇均为极性溶剂，根据相似相溶原理，分别对DB-1、DB-624、DB-1701以及DB-WAX[8]进行考察，发现DB-624对N，N-二甲基乙酰胺的分离效果最好，DB-WAX对乙酸乙酯、甲苯、异丙醇的分离效果较好。

3.1.2 进样方式的选择 由于采用溶液直接进样时氨氯地平的峰会对溶剂峰产生干扰，且会在色谱柱上出现死吸附，对色谱柱造成很大的伤害，因此，采取自动静态顶空进样，不仅可以避免药物的影响，而且还能够保护色谱柱，效果较好[9]。

3.1.3 顶空平衡温度的选择 分别考察N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇的60～120℃下的色谱响应值[10]，最终选择120℃和90℃。此外，由于DMF为高沸点组分，应适当提高取样针与传输线的温度，避免DMF在传输过程中冷凝，因此选择150℃。

3.1.4 顶空平衡时间的选择 分别考察N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇4种溶剂在平衡时间10、20、30、40、60min时的色谱响应值，得到最佳平衡时间为30min。实验结果表明：平衡时间>30min时，各组分峰面积基本不再增加，这说明各组分在30min时已在气液两相间达到平衡，故选择平衡时间为30min。

3.1.5 稀释剂的选择 顶空气相色谱法测定残留溶剂的一个关键是选择合适的稀释剂，尝试选择二甲基亚砜，N，N-二甲基甲酰胺、水、正丁醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮做稀释剂，但二甲基亚砜，水、正丁醇、乙二醇分离效果均不好，而采用N-甲基吡咯烷酮和N，N-二甲基甲酰胺作为稀释剂具有溶解能力强、沸点高干干扰含量测定、毒性小等优点，而且还有助于提高顶空进样的灵敏度[11-12]。

3.2 实验结果的讨论

本研究中，N，N-二甲基乙酰胺、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇在考察范围内线性良好，r为0.9987～0.9999；平均回收率为101.5%～103.3%，RSD分别为5.1%～5.9%，检测限分别为12.9、10.6、6.41和19.8mg/L。

综上所述，采用顶空气相色谱法测定苯磺酸氨氯地平中残留溶剂含量具有准确度好、灵敏度高、操作简单、重现性好等优点，是苯磺酸氨氯地平实际生产中残留溶剂含量测定的有效方法。

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（收稿日期：2015-03-23）