胶体金法联合酶联免疫吸附测定检测血清乙肝表面抗原

屈方政

胶体金法联合酶联免疫吸附测定检测血清乙肝表面抗原

屈方政

目的 分析胶体金法（GIA）与酶联免疫吸附测定（ELISA）联合用于血清乙肝表面抗原（HBsAg）检测中的价值。方法 选取血清标本12576份，均行胶体金法和酶联免疫法检测HBsAg，对结果进行分析。结果 胶体金法检测HBsAg阳性率为2.03%（255/12576），ELISA法检测HBsAg阳性率为2.09%(263/12576)。2例血标本胶体金法检测为阳性，ELISA法检测为阴性；10例血标本胶体金法检测为阴性，ELISA检测为阳性。12例标本中11例经中和确认或HBV-DNA检测后确定为阳性。结论 胶体金法与酶联免疫法检测血清HBsAg均有较高的特异性，二者联合应用可进一步提高阳性率。

胶体金法；酶联免疫吸附测定；血清乙肝表面抗原

目前血清乙肝表面抗原（HBsAg）检测方法有较多种，其中酶联免疫吸附测定（ELISA）最为常用，胶体金法（GIA）作为一种快速应急的检测方法也逐渐受到重视，但受检测方法的限制，易出现假阴性和假阳性现象[1]。本研究主要探讨胶体金法与ELISA两种方法在血清HBsAg检测中的联合应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源 本研究标本来源于2013年1月～2013年12月在广西桂林阳朔县葡萄镇卫生院行健康体检者的血液标本，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)抗凝处理后待检，血清标本质量均良好、无溶血、脂血或长菌现象，共收集12576份血标本。

1.2 方法

1.2.1 试剂 HBsAg胶体金法试剂购自杭州艾康生物技术公司，HBsAg酶联免疫法试剂购自蓝十字生物药物（北京）生物有限公司，质控血清由卫生部临检中心提供。

1.2.2 仪器 使用进口YT-WASH 1自动洗板机，TECAN-EVLYZER全自动酶联免疫分析仪，国产恒温水浴箱。所有仪器性能均稳定，实验前进行校准。

1.2.3 检测方法 严格按照说明书操作要求，先采用胶体金法对12576份血清标本进行检测，再使用ELISA复检。（1）胶体金法：以微量移液器吸取80μL血清滴入各个监测孔中，室温下放置15～30min，观察显示结果，以检测线和质控线各出现红线为阳性，仅质控线出现红线为阴性，仅检测线出现红线为检测结果无效；（2）酶联免疫法：在相应孔中分别加入阴性和阳性对照血清、质控品和待检标本，在各个孔中加入酶标抗体，混匀后在37℃下孵育60min，洗板、加底物，37℃下避光反应15min，在实验管理软件中按照说明书编写程序，自动判读结果以S/CO值＞1.0为阳性。对于胶体金法判读为阳性的标本，以ELISA复检，若ELISA检测S/CO值＞1.0，则则报告为阳性结果；若ELISA为阴性，则选两种不同厂家ELISA试剂做双孔复检，两种试剂重复阳性则报告为阳性，反之做HBV-DAN或中和确认确定结果；ELISA检测S/CO值介于0.5～1.0的标本，使用两种ELISA试剂做双孔复检，两种试剂重复阳性则报告为阳性，反之做HBV-DAN或中和确认确定结果；胶体金法为阴性和ELISA检测S/CO值＜0.5的标本，直接报告为阴性。

1.3 观察指标 观察比较两种方法检测HBsAg阳性率；对两种方法阳性结果不同的标本乙型肝炎表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎E抗原（HBeAg）、乙型肝炎E抗体（HBeAb）、乙型肝炎核心抗体（HBcAb）和乙型肝炎病毒基因（HBV-DNA）检测结果进行分析。

2 结果

12576份血清标本中，GIA法检测HBsAg阳性率为2.03%（255/12576），ELISA法检测HBsAg阳性率为2.09%(263/12576)。2例血标本GIA检测为阳性，ELISA法检测为阴性，10例血标本GIA法检测为阴性，ELISA检测为阳性。见表1。此12例标本HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb和HBVDNA检测结果见表2。

表1 GIA法和ELISA法检测血清HBsAg阳性结果（n）

表2 12例GIA法和ELISA法阳性结果不同的标本检测结果

3 讨论

乙型肝炎目前已成为威胁人类健康的世界性疾病，也是我国当前流行最广泛、危害性最严重的一种疾病，HBsAg是已感染乙型肝炎病毒的标志，其检测结果是诊断乙型肝炎感染的重要依据[2-3]。ELISA是目前检测HBsAg最为常用的方法之一[4]，在HBsAg检测中的特异性、敏感性均较高，但操作过程较为繁琐，操作过程中影响检测结果的因素多，不适用于单份样本检测检测中，同时对检测设备及检测人员操作技术有较高的要求[5]。 GIA法上世纪80年代末发展起来的一种免疫标记技术，可用于HBsAg、HCG及抗双链DNA抗体等的快速检测中[6]，无冲洗过程，操作简单，且可用于单份标本检测中，具有快速、简便、无污染等多个优点，但其灵敏度稍差，本研究中GIA法的阳性率即稍低于ELISA法，与同类研究报道结果一致[7-8]。由于两种方法各具优缺点，本院在检测血清HBsAg时将两种方法联合使用，结果发现，2例GIA法为阳性而ELISA法为阴性和10例GIA法为阴性而ELISA法为阳性的标本，经中和确认或HBV-DNA检测后11例判定为阳性，表明二者联合应用对于降低假阴性和假阳性有着重要作用。

综上所述，血清HBsAg检测中，ELISA法和GIA法各有优缺点，临床中联合应用两种方法，以GIA法为参考，以ELISA法作为最终检测结果，发挥二者的协同作用，可进一步提高血清HBsAg检测准确性，对于降低检验结果误差有着重要意义。

[1] 张晓飞.胶体金法与酶联免疫法联合检测HBsAg的结果比较[J].中国当代医药，2013，20(18):94-95.

[2] 王克成，周国芳，常秋月，等.酶联免疫法和胶体金法测定HBsAg的比较[J].中国现代医生，2010，48(5):94，103.

[3] 祝撷英，张宏星.儿童乙肝前S1抗原与血清标志物及HBV-DNA检测结果分析[J].当代医学，2009，15(28):44-45

[4] 徐祥莲，杨南，张晓丽，等.用胶体金法快速筛查无偿献血者HBSAg结果分析[J].实验与检验医学，2011，29(5):558，554.

[5] 董韶伟.ELISA法与胶体金试纸条检测HBsAg差异分析[J].中国医师杂志，2011，2(z2):124.

[6] 易巧明.2004～2008年攸县食品和公共场所从业人员健康检查HBV感染情况分析[J].当代医学，2010，16(9):153-154.

[7] 张小丽，王贝晗，张景，等.胶体金法检测乙肝病毒血清标志物的实验研究[J].武警医学，2011，22(5):404-405.

[8] 蔡木发，吴显劲，李静.300例HBV前S1抗原与HBV标志物及HBVDNA检测结果分析[J].临床医学与临床，2011，8（10）：1177-1178.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.4.109

广西 541903 广西桂林阳朔县葡萄镇卫生院（屈方政）