脑脊液单核细胞内结核抗原检测对结核性脑膜炎早期诊断的意义

李青 夏明万 雷源标

脑脊液单核细胞内结核抗原检测对结核性脑膜炎早期诊断的意义

李青 夏明万 雷源标

目的 研究脑脊液单核细胞内结核抗原检测对于结核性脑膜炎的早期诊断价值。方法 选择58例结核性脑膜炎患者作为观察组，选择本院同期非结核性脑膜炎患者58例作为对照组，取2组的脑脊液标本进行脑脊液细胞学检查，比较2组的检查结果。结果 观察组的中性粒细胞、激活单核细胞以及淋巴样细胞均较对照组显著升高（P＜0.05）；观察组的脑脊液单核细胞中具有结核菌素抗原，检查阳性率为82.8%（48/58），显著高于对照组的1.7%（1/58）（P＜0.05）。结论 脑脊液单核细胞中结核抗原的检测有利于早期诊断结核性脑膜炎。

脑脊液；结核性脑膜炎；结核菌素抗原；诊断

结核性脑膜炎是一种常见结核病，占所有结核病的7%～10%。结核性脑膜炎主要是由于结核杆菌所致中枢神经系统感染性疾病，以脑膜感染最为常见[1]。本病具有较高的致残率以及致死率，早期诊断和治疗直接影响患者临床预后。但由于结核性脑膜炎患者脑脊液（CSF）中的结核杆菌数量比较少，应用脑脊液涂片抗酸染色检查的阳性率仅为10%左右[2]，且培养结核菌的时间较长，阳性率仅为20%～30%，临床诊断尤其是早期诊断难度较大。因此，寻找一种准确可靠的早期诊断方法至关重要。本研究分析了脑脊液单核细胞中结核抗原检测对于早期诊断结核性脑膜炎的价值，旨在为临床诊断提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年1月～2014年5月郴州市第一人民医院收治的结核性脑膜炎患者58例作为观察组，均符合Ahuja等[3]的诊断标准。其中，男34例，女24例，年龄3～80岁，平均（33.5±15.6）岁；48例单纯结核性脑膜炎，10例结核性脑膜炎合并颅外结核，细胞数在（30～1200）×106/L。经脑部CT检查显示，9例CT异常，其中，3例为脑积水，2例为脑梗死，3例脑膜增厚强化，1例基底池渗出；经MRI平扫显示，20例异常。经革兰染色以及墨汁染色均呈阴性。选择本院同期住院的非结核性脑膜炎患者58例作为对照组，其中，男32例，女26例，年龄5～82岁，平均（33.7±15.9）岁。其中，15例为化脓性脑膜炎，33例为病毒性脑膜炎，6例为新型隐球菌性脑膜炎，4例为单纯疱疹病毒性脑炎。经MRI平扫显示8例异常，其中，5例为炎症改变，3例为脑膜增厚强化。2组的年龄、性别比较差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法 留取脑脊液标本进行常规脑脊液检查、生化检查以及细胞学检查，同时进行墨汁染色以及革兰染色。取脑脊液3mL，常规沉淀后，向每个脑脊液沉淀器中滴入脑脊液0.5mL，待水分完全吸干以后，取出其中一玻片作瑞氏染色，在显微镜下作有核细胞技术以及分类。对2张玻片作荧光染色，另1张作为阴性对照。取存在沉淀细胞的玻片放置到含有4℃冷丙酮中进行固定处理10min，然后采用0.05mol/L TBS-T缓冲液进行冲洗，5min/次，连续冲洗3次。然后将其转移至含有3%羊血清的TBS中进行孵育处理30min，然后再次采用TBS-T缓冲液进行冲洗3次。完成冲洗后将其冲洗，然后滴加1∶200稀释的抗兔结核抗体IgG，在4℃冰箱中进行孵育过夜。然后以滤纸将多余一抗体吸干，予以滴加经荧光素标记以后的1∶200稀释羊抗兔IgG，在37℃条件下孵育30min。将玻片取出，然后以TBS-T缓冲液进行冲洗3次，5min/次，将水分吸干以后，以50%的缓冲甘油进行封片，在荧光显微镜下进行观察。采用TBS缓冲液代替一抗作为阴性对照，以单核细胞胞浆染色表示阳性。

1.3 观察指标 脑脊液细胞学检查指标主要包括中性粒细胞、激活单核细胞、淋巴样细胞、单核细胞以及嗜酸性粒细胞等；动态检测脑脊液单核细胞内结核抗原。

1.4 统计学方法 应用统计学软件SPSS18.0分析数据。正态计量资料以“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数（n）表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组脑脊液异常检出率比较 观察组的中性粒细胞、转移淋细胞、淋巴样细胞以及激活单细胞检出率均显著高于对照组（P＜0.05），2组的单核细胞以及嗜酸细胞检出率差异无统计学应用。见表1。

表1 2组脑膜炎患者脑脊液异常检出率比较[n(%)]

2.2 2组脑脊液单核细胞中结核抗原的检测结果比较 2组58例患者首次均接受检查，观察组第1次检查有48例阳性，对照组仅1例阳性；观察组56例接受第2次检查，对照组43例阴性，第2次检查后观察组47例阳性，对照组无阳性病例；观察组29例接受第3次检查，对照组24例阴性，第3次检查观察组23例阳性。2组比较差异无统计学意义。见表2。以及特异性并不高[7]。本研究以免疫荧光法进行脑脊液单核细胞中结核抗原的检测，结果显示，在结核性脑膜炎患者中，早期检查脑脊液即可检出单核细胞中的结核抗原，且单核细胞多表现出较强的胞质染色，经多次检测后仍然持续阳性，表明结核菌能够进入到单核细胞内并且存活[8]。当结核菌进入到细胞中后，在发生抗原呈递以及体液、细胞免疫之前可完成早期诊断[9]。本研究结果显示，结核性脑膜炎病患者的中性粒细胞、转移淋细胞、淋巴样细胞以及激活单细胞检出率均较对照组显著提高（P＜0.05）。脑脊液单核细胞中结核抗原检测结果显示，观察组首次检测阳性率为82.8%，较对照组的1.7%显著提高（P＜0.05）。随着时间的推移，对照组无阳性病例，而观察组仍持续表现为较高的阳性率。认为脑脊液单核细胞中的结核抗原检测对于结核性脑膜炎的早期诊断具有重要意义，且可多作为结核性脑膜炎的动态监测指标。

表2 2组脑膜炎患者脑脊液单核细胞中结核抗原的检测结果比较（n）

综上所述，脑脊液单核细胞内结核抗原检测对于结核性脑膜炎的早期诊断与鉴别具有重要意义。

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[2] 杨笑，郭旻，谢鹏，等.脑脊液单核细胞内ESAT-6对结核性脑膜炎的诊断价值[J].中国神经精神疾病杂志，2012，38(6):330-333.

[3] Ahuja GK，Mohan KK，Prasad K，et al.Dexamethasone for the treatment of tuberculous meningitis in adolescent and adults[J].N Engl J Med，2004，35l（17）：1741-1751.

[4] 宋孚霞，孙旭文，王晓彤，等.结核性脑膜炎患者脑脊液T淋巴细胞的动态变化[J].中国老年学杂志，2011，31(9):1516-1517.

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[6] 呼建民，黄庆生，何俊瑛，等.脑脊液检测对结核性脑膜炎诊断的意义[J].武警医学，2010，21(7):581-582，585.

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[8] 吴晓牧，刘丽娟，许志强，等.早期诊断结核性脑膜炎的新方法:检测浓缩脑脊液中CFP-10和ESAT-6[J].中国免疫学杂志，2012，28(4):347-350.

[9] 邹洪智.脑脊液检测结核性脑膜炎190例诊断分析[J].按摩与康复医学（下旬刊），2010，1(12):83.

3 讨论

结核性脑膜炎是一种非化脓性慢性脑膜炎，临床诊断鉴别难度较大，直接影响临床治疗决策与预后[4]。临床对于结核性脑膜炎的诊断方法较多，其中，聚合酶链反应（PCR）技术被广泛应用于病原微生物的诊断。该技术诊断具有早期、快速和敏感等优势，但对于结核性脑膜炎的诊断目前尚缺乏较为完善的评价，且其假阳性率较高，对实验室条件要求较高[5]。监测抗体无法鉴别既往结核菌感染与急性结核感染，临床应用限制。

临床研究发现，脑脊液结核杆菌抗原检测与培养具有密切相关性，可作为结核菌诊断的直接证据[6]。既往研究多采用ELISA法进行脑脊液中循环抗原或者抗原抗体复合物的检测，但敏感性

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.4.034

湖南 423000 郴州市第一人民医院 （李青 夏明万 雷源标）