穴位埋线疗法对佐剂性关节炎大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α水平的影响

李淑娟，刘 宁

(1.河北省张家口市万全县中医院，河北 万全 076250；2.河北省秦皇岛市港口医院，河北 秦皇岛 066000)

穴位埋线疗法对佐剂性关节炎大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α水平的影响

李淑娟1，刘 宁2

(1.河北省张家口市万全县中医院，河北 万全 076250；2.河北省秦皇岛市港口医院，河北 秦皇岛 066000)

目的 建立佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型，观察穴位埋线疗法对AA大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α水平的影响。方法 45只大鼠随机分为空白对照组、模型对照组和穴位埋线疗法治疗组，d 28处死各组大鼠并分离血清，检测血清IL-1β、IL-2和TNF-α含量。结果 模型组致炎后血清IL-1β、IL-2及TNF-α含量与空白组间差异有统计学意义(P<0.01)；穴位埋线疗法治疗组血清IL-1β、IL-2及TNF-α含量与模型组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论 穴位埋线疗法能明显抑制细胞因子IL-1β、IL-2及TNF-α的分泌，从而产生抗风湿作用。

穴位埋线疗法；类风湿关节炎；IL-1β；IL-2；TNF-α

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种常见慢性进行性多关节病变为主的自身免疫性疾病，其关节病变多呈现对称性发病。RA最常见的侵犯部位为双手、腕、肘、膝、踝和足关节，如治疗不及时可波及心、肺、眼等结缔组织或软骨和骨组织致使关节强直及功能障碍，是目前主要致残性疾病之一[1]。

RA在中医学中称“痹”、“历节风”或“顽痹”，“痹”最早见于《内经》，在《金匮要略》亦有记载：“历节痛、不可屈伸”、“其痛如掣”及“诸肢节疼痛”等皆言之“历节风”。RA发病机制最先见《素问》：“风寒湿三气杂至，合而为痹也”。“穴位埋线疗法”遵从《灵枢》：“久病者，邪气深，刺此病者，深内而久留之”之意，将羊肠线等埋入穴位以提高机体应激能力的同时对穴位起到持续性刺激作用。

本研究通过建立佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠模型观察穴位埋线疗法对大鼠血清白细胞介素-1(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平表达的影响，探讨穴位埋线疗法治疗RA的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 清洁级Wistar雄性大鼠45只，体质量200～250 g。河北医科大学动物实验中心提供[许可证号：SCXK(冀)2003-1-003]。不限食水。

1.1.2 主要试剂 弗氏完全佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)，美国Sigma公司生产；卡介苗(10 mg/支)购自上海生物制品研究所；肿瘤坏死因子放射免疫试剂盒为北京北方生物技术研究所产品；大鼠IL-1β ELISA试剂盒、IL-2 ELISA试剂盒及TNF-α试剂盒均为武汉博士德生物工程有限公司产品。

1.1.3 埋线用具 穴位埋线针，止血钳，羊肠线，一次性注射器，酒精棉球，碘伏，胶布，利多卡因等。

1.2 试验方法

1.2.1 动物分组 Wistar大鼠45只，随机分为空白对照组15只，注射0.1 mL生理盐水；模型对照组15只，注射0.1mL弗氏完全佐剂；穴位埋线治疗组15只，注射0.1mL弗氏完全佐剂。RA大鼠模型造模方法[2]：弗氏完全佐剂(卡介苗10 mg·mL-1)每日(0.1 mL/只)注射于大鼠左后足跖皮内。致炎当日开始穴位埋线治疗，共计27 d。

1.2.2 埋线穴位 主穴：命门、肾俞、肝俞、脾俞、足三里；配穴：环跳、委中、三阴交。穴位选取参照上海科技出版社出版的《实验针灸学》。

1.2.3 操作方法 “00”号羊肠线生理盐水冲洗后剪段(0.3～0.7 cm)消毒备用。乙醚麻醉穴位埋线治疗组大鼠后消毒相应穴位，专用埋线针将羊肠线埋植入穴位0.5～0.8 cm深度，穴位无须特殊处理。每9 d重复穴位埋线一次，连续3次，共计27 d。

1.2.4 检测方法 在d 28处死各组大鼠，取血5 mL分离血清，酶联免疫吸附法测定血清IL-1β、IL-2水平，放射免疫法测定血清TNF-α水平。

1.3 统计学方法

2 结 果

模型组致炎后血清IL-1β、IL-2、TNF-α含量与空白组间差异有统计学意义(t=39.756，P<0.01；t=65.818，P<0.01；t=38.676，P<0.01)；治疗组血清IL-1β、IL-2、TNF-α含量与空白组、模型组间差异有统计学意义(t=30.433，P<0.01；t=41.139，P<0.01；t=27.697，P<0.01)(表1)。

表1 各组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-2含量比较

注：与空白组比较*P<0.01；与模型组比较△P<0.01

3 讨 论

RA是以关节滑膜炎为主要特征的慢性自身免疫性疾病[3]，RA滑膜炎持续性反复发作可导致关节内软骨和骨的破坏，进而出现关节功能障碍甚至残疾，血管病变可累计全身各个器官，多种免疫活性细胞及细胞因子、炎症介质共同参与RA致病过程，IL-1、IL-2及TNF都可作为炎症因子参与机体免疫应答。有研究认为，大鼠AA模型可以引起迟发性超敏反应，常小荣等[4]发现针灸可以降低RA及AA大鼠外周单核细胞和滑膜巨噬细胞分泌IL-1、IL-2及TNF的能力。

穴位埋线疗法的主要作用有协调脏腑、平衡阴阳、疏通经络、调和气血、补虚泻实、扶正祛邪，穴位埋线疗法对机体功能减退、免疫力低下者治疗效果明显，具有提高机体免疫功能的作用。高德荣等[5]以穴位埋线法为主要方法治疗RA 2 039例疗效明显，总有效率为98%。

本研究通过建立AA大鼠模型观察穴位埋线疗法对AA大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α含量的影响，探讨穴位埋线疗法对RA的作用机制，研究结果表明，穴位埋线疗法能够明显降低AA大鼠血清IL-1β、IL-2及TNF-α的水平而产生抗类风湿样作用。

[1]刘春荣,周世友,何国栋.中西药治疗类风湿性关节炎研究进展[J].右江医学,2013,3:437-441.

[2]黄国均,黄勤挽.医药实验动物模型制作与运用[M].北京:化学工业出版社，2007:482-485.

[3]沈杰,杨晓玲,许荣.致炎性细胞因子与类风湿关节炎的相关性研究[J].浙江预防医学,2002.14(7):12.

[4]常小荣,刘梨,艾坤,刘美荣.电针足三里、关元对佐剂性关节炎大鼠IL-1,IL-2,IL-10,TNF-α的影响[J].中国骨质疏松杂志,2009,02:107-110.

[5]高德荣,高德贵,高露,等.穴位埋线治疗类风湿性关节炎2039例[A].世界针灸学会联合会、世界卫生组织、中国中医科学院、北京市中医管理局.世界针灸学会联合会成立20周年暨世界针灸学术大会论文摘要汇编[C].世界针灸学会联合会、世界卫生组织、中国中医科学院、北京市中医管理局,2007:2.

[责任编辑：李蓟龙]

李淑娟(1963-)，女，北京顺义人，副主任护师。

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10.3969/j.issn.1673-1492.2015.04.020

来稿日期：2015-05-11