RP-HPLC 法测定那如八味丸中没食子酸的含量分析

贾福群

(内蒙古医科大学附属医院药剂部，呼和浩特市 010059)

那如八味丸(那如-8)收载于《卫生部药品标准》蒙药分册［1］。由诃子、制草乌、荜茇、芒果核、莲子、白豆蔻、苦石莲、石决明组方。诃子为方中君药。该药主要具祛寒功效，临床上用于治疗胃寒食积、消化不良、肾虚、肾寒、腰腿酸痛。据文献报道［2］，诃子主要含挥发油、多烯炔衍生物类、黄酮类、萜类化合物、香豆精类、生物碱类等化学成分，没食子酸为其主要活性成分。原质量标准无内在质量监控指标，我们参照《中国药典》2005年版一部［3］相关品种项下的方法与条件进行了含量测定的分析研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器：美国Alltech 高效液相色谱仪，M626 输液泵，UVIS-201 型检测器;美国Alltech 高效液相色谱仪;Alltech UVIS 200 Detector 检测器;Alltech 426 HPLC Pump 泵;Alltech Chromstation 色谱工作站;岛津UV-250 型紫外可见分光光度仪;KQ3200DB 型数控超声波清洗器。

1.2 试剂：甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

1.3 对照品：没食子酸为中国药品生物制品检定所提供(批号：953 -200611)。

1.4 样品：批号：080611、080620、080625 内蒙古库伦蒙药厂。

1.5 色谱条件：Alltech RP - C18 色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5m)，ODS 预柱;检测波长273nm;流动相：甲醇-0.2磷酸溶液(15∶ 85);流速：1.0mL/min;柱温∶ 30℃;进样量：10μL。

1.6 检测波长的选择：参照《中国药典》2005年版一部"五倍子"项下方法，制备没食子酸对照品溶液，在240 ～320nm波长范围内进行光谱扫描，没食子酸在273nm 有最大吸收，故确定检测波长为273nm。

1.7 对照品溶液的制备：取没食子酸对照品适量，加50%甲醇制成每1mL 含50μg 的溶液，即得。

1.8 供试品溶液的制备：取重量差异项下本品3g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入4mol/L 盐酸溶液甲醇100mL，称定重量，加热回流4h，放冷，滤过，精密量取续滤液25mL，置100mL 量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得。

2 方法学考察

2.1 线性关系考察：精密称取没食子酸对照品3.0452mg，置25mL 量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL 置10mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以10μL 进样，注入液相色谱仪，记录色谱图，以没食子酸进样量(μg)对峰面积积分值(A)进行线性回归，结果没食子酸在μg 范围内呈良好线性关系。回归方程：Y=92030X+36125，r=0.9998(Y 为峰面积积分值，X 为对照品进样量)，结果见表1。

表1 标准曲线测定结果

2.2 精密度试验：取供试品溶液，连续重复进样6 次，测得供试品中没食子酸的峰面积积分值，RSD ＜2%。试验表明，精密度良好，结果见表2。

表2 精密度试验结果

2.3 稳定性试验：取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12h 进样10μL，供试品中没食子酸的峰面积积分值基本不变，RSD ＜2%。试验结果表明，供试品在12h 内稳定性良好，结果见表3。

表3 稳定性试验结果

2.4 重复性试验：取样品(批号：080611)按上述供试品溶液制备方法平行制备5 份，每份进样2 针，测得峰面积积分值，含量平均值的RSD ＜2%，结果见表4。

表4 重复性试验结果

2.5 加样回收试验：取已知没食子酸含量的样品5 份，每份1.5g，精密称定，分别精密加入1mL 对照品溶液(9.25mg/mL)，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定，计算回收率。结果平均回收率为99.35%，RSD ＜2%。试验结果表明，加样回收良好，结果见表5。

表5 回收率试验结果

3 样品含量测定

分别取3 批样品，按上述拟定的含量测定方法制备供试品溶液测定，结果见表6。

表6 样品中没食子酸含量测定结果

3 结果

3.1 试验结果表明，组方中其他药材所含成分对没食子酸无干扰，样品峰形良好，平均回收率为99.78%，前处理较简单，结果准确，专属性良好。见图1。

图1 A 阴性 B 标准品没食子酸 C 样品

3.2 该含量测定方法具有分离效果理想、灵敏度高、准确、稳定、重现性好特点，可以作为诃子的含量测定方法。

［1］卫生部药典委员会.卫生部药品标准蒙药分册［S］.1998：97.

［2］四川医学院.中草药学［M］.北京：人民卫生出版社，367.

［3］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.化学工业出版社，2005：45.