水飞蓟宾磷脂酰胆碱复合物与水飞蓟宾对四氯化碳所致的小鼠肝损伤的保护作用比较

王煜,张爱芸,张旭,吕凌

(1.宁夏医科大学总医院 感染疾病科，宁夏 银川 750004；2.南京医科大学 医学科学部，江苏 南京 210029)



水飞蓟宾磷脂酰胆碱复合物与水飞蓟宾对四氯化碳所致的小鼠肝损伤的保护作用比较

王煜1,张爱芸1,张旭1,吕凌2

(1.宁夏医科大学总医院 感染疾病科，宁夏 银川 750004；2.南京医科大学 医学科学部，江苏 南京 210029)

目的 研究水飞蓟宾磷脂酰胆碱复合物(SPC)与水飞蓟宾对四氯化碳所致小鼠肝损伤的保护作用。方法 选择100只健康成年的昆明小鼠，按照随机数表法分为5组，每组20只，分别为水飞蓟宾组、SPC-A组、SPC-B组、CCl4模型组以及正常对照组。5组小鼠通过测5组小鼠血清中的AST和ALT，对病理学切片进行比较。结果 水飞蓟宾组小鼠血清ALT及AST的含量与CCl4模型组相比较明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；SPC-A组、SPC-B组小鼠的血清ALT及AST的含量也显著低于CCl4模型组差异有统计学意义(P<0.05)；SPC-A组、SPC-B组小鼠的血清ALT及AST的含量显著低于水飞蓟宾组(P<0.05)；SPC-B组的小鼠的血清ALT及AST的含量低于SPC-A组差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏的病理学切片比较，正常对照组的切片是完全正常的；水飞蓟宾组、SPC-A组、SPC-B组均能够减轻小鼠的肝脏病理学的变化，其病理学变化小于CCl4模型组，且病理学变化幅度由小到大排序为正常对照组、SPC-B组、SPC-A组、水飞蓟宾组、CCl4模型组。结论 SPC和水飞蓟宾都对四氯化碳所致的小鼠肝损伤的保护作用明显，但是SPC功效更好，值得临床进一步研究。

水飞蓟宾磷脂酰胆碱复合物；水飞蓟宾；四氯化碳；肝损伤

水飞蓟宾是水飞蓟素中具有生物功效和活性的最为主要的组成成分。水飞蓟宾是经典的肝损伤修复药物,其脂溶性和水溶性都很差，几乎不溶于油脂和水。因此，在患者体内的生物利用度很低,机体对其的吸收量也不稳定,从而降低了水飞蓟宾的临床疗效[3]。为进一步提高水飞蓟宾在应用过程中的生物效能和利用度，水飞蓟宾和磷脂酰胆碱的复合物应运而生，水飞蓟宾磷脂酰胆碱复合物(silibinin phosphatidylcholine complex,SPC)是在水飞蓟宾的基础上合成的复合物[1-2]。其增大了水溶性和脂溶性，增强了人体的吸收。本文研究了(磷脂酰胆碱复合物)SPC和水飞蓟宾对四氯化碳所致的小鼠肝损伤的保护作用。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选择100只健康成年的雌性，昆明小白鼠，平均分为5组，每组20只，分别为水飞蓟宾组、SPC-A组、SPC-B组、CCl4模型组以及正常对照组。所有小鼠体质量均为(22.5±2.5)g，均来自宁夏医科大学总医院的实验动物中心(动物许可证号:医动字432115)。水飞蓟宾(购自哈药六厂)；SPC(由南京制药厂有限公司制备，纯度98%)；将SPC以及水飞蓟宾用0.5%的羧甲基纤维素钠(即CMC-Na)(购自南京制药厂有限公司)混匀配成10mg/mL及20 mg/mL的悬液作为备用。DATE BEHRING RXL的分析仪(飞利浦公司)。CCl4(购自重庆市化学试剂厂，分析纯)。

1.2 方法

1.2.1 建立模型：先将四氯化碳(CCl4)溶在大豆色拉油当中，制得浓度为0.1%的溶液。在建立动物模型时，将四氯化碳(CCl4)溶液按照10 mL/kg对小鼠进行腹腔注射，建立肝损伤的模型。

1.2.2 动物分组以及分组后的给药方法：选择100只昆明小鼠，5组小鼠同时按照以下方法连续进行灌胃5 d，频率1次/天，水飞蓟宾组15 mg/mL的剂量,使用其混悬液进行灌胃，10 mL/kg，SPC-A组和SPC-B组分别使用15 mg/mL、30 mg/mL的SPC的混悬液按照10 mL/kg的剂量进行灌胃；正常对照组与CCl4组使用0.5%CMC-Na 10 mL/kg进行灌胃。在第6天时，水飞蓟宾组，SPC-A组，SPC-B组与模型组采用腹腔注射浓度为0.1%CCl4的溶液，具体的剂量设定参照10 mL/kg进行，而正常对照组则采用大豆色拉油进行腹腔注射。在注射药物24 h以后(期间小鼠注药后需先禁食12 h，可以自由饮水)，然后摘除小鼠的眼球。进行采血2 mL，然后将所采血液按照10000 r/min进行5 min的离心，然后分离所采血清，再使用生化分析仪对血清中的ALT和AST的活性进行测定。肝脏活检方法为：取每只小鼠大致相同位置的一小块(大小约为0.5 cm×0.5 cm左右)肝组织，并将该肝组织通过石蜡包埋、切片，然后进行HE染色的步骤，并在光学显微镜下对肝细胞中出现的详细损伤程度以及肝小叶的结构进行观察，从而判定肝组织的损伤程度。

2 结果

2.1 各组ALT和AST值比较 水飞蓟宾组的小鼠的血清ALT及AST的含量与CCl4模型组相比较，水飞蓟宾组显著低于CCl4模型组，差异有统计学意义(P<0.05)；SPC-A组、SPC-B组小鼠的血清ALT及AST的含量也显著低于CCl4模型组，差异有统计学意义(P<0.05)；SPC-A组、SPC-B组小鼠的血清ALT及AST的含量显著低于水飞蓟宾组，差异有统计学意义(P<0.05)；SPC-B组的小鼠的血清ALT及AST的含量低于SPC-A组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 各组ALT和AST值比较

▲P<0.05，与正常对照组相比，compared with control group；*P<0.05，与CCl4组相比，compared with CCl4group；#P<0.05，与水飞蓟宾组相比，compared with silibinin group；△P<0.05，SPC-B组与 SPC-A组相比，SPC-B group compared with SPC-A group

2.2 肝组织的病理组织学的结果分析 制片成功后，采用光学显微镜进行病理组织结果的观察，发现正常对照组小鼠肝组织的结构完全正常，肝小叶的结构完整，肝细胞有序排列，肝细胞的肿胀及脂肪未出现异常变性等情况；CCl4设定的模型组的小鼠的肝组织发生的改变最明显，很大部分的肝小叶结构不正常，小叶结构不完整，相互之间分界不明显，有犬牙交错的态势，肝细胞内部结构排列较为紊乱，肝细胞索出现了扭曲变形，肝细胞存在水肿，而且肝细胞其体积明显增大，出现较为明显的气球样变，并伴有炎症细胞的浸润(主要为中性粒细胞浸润)，并伴有局部肝细胞的坏死等；水飞蓟宾组，SPC-A组及SPC-B组的肝小叶均有轻度改变，肝细胞索的排列不够整齐，肝细胞有部分发水肿，有少量的炎细胞浸润，但其结果较CCl4模型组的情况改变程度小，尤以SPC-B组的病变程度为最轻，SPC-A组次之。见图1。

图1 各组肝组织病理学比较Fig.1 Comparison of liver tissue pathology in each group

3 讨论

CCl4进入动物的体内之后，肝脏细胞色素P450会将其激活，生成三氯甲基自由基(CCl3·)[4-5]。CCl3·可以通过氢的吸附作用对内质网膜进行攻击，将生物细胞膜上的磷脂分子破坏，导致生物膜出现脂质过氧化，CCl3·继而可与生物膜脂以及蛋白质分子发生紧密的共价结合。这种结合进而会导致生物膜结构以及生物膜功能的完整性遭到破坏[6-7]。与此同时，CCl3·的产生还会抑制细胞膜以及微粒体膜上的钙泵的活性，进而导致Ca2+离子内流增加，进一步引起细胞中毒死亡[8-9]。水飞蓟宾减少CCl4的代谢将所生成的相应的氧自由基激活，此外，还可对这些活性的自由基产生清除的作用[10-11]。从而导致CCl4对于脂质的共价结合作用明显的下降，减轻生物膜的损伤，从而减轻肝细胞的损伤程度[12]。水飞蓟宾既能预防和治疗病变，还能加速新的合成，从而减少了肝细胞的损伤和促进了肝细胞修复与再生。

SPC是水飞蓟宾的衍生物，由于其水溶性和脂溶性更大，因而生物利用度也更高[13]。SPC可以对CCl4所引起的急性肝损伤预防和治疗,其作用机制是通过发挥抗脂质过氧化的生物活性作用对肝细胞的膜结构进行保护，从而稳定和保护肝细胞的生物膜，保护膜结构的完整性,保持细胞膜的生物活性与效能。SPC是近年来新兴的一种合成药物，是由水飞蓟宾和磷脂酰胆碱组成的复合物,其既继承了水飞蓟宾预防和治疗病变作用，还能加速新的细胞膜合成，从而减少肝细胞的损伤和促进肝细胞修复与再生的效用，又增大了在体内的水溶性和脂溶性，增加了生物利用度[14]。因此，水飞蓟宾和磷脂酰胆碱的复合,对于药物的抗自由基活性、抗脂质过氧化活性的效用变得更强,因此SPC对于预防以及治疗CCL4所引起的急性肝损伤效能更为明显。

本研究显示，预先采用SPC和水飞蓟宾对小鼠进行前期灌胃的相应保护，可以明显减轻小鼠在受到CCl4的毒性刺激后，出现的血清ALT、AST的活性升高，明显降低活性提示小鼠的肝功能损伤较小。肝组织的病理组织检查结果显示，SPC和水飞蓟宾均能减轻小鼠肝脏组织的损伤程度。表明SPC与水飞蓟宾的应用均对CCl4毒性刺激所导致的小鼠急性肝损伤具有较为显著的保护作用。相关研究也显示，其临床机理可能是通过抗脂质过氧化作用实现的，从而保护肝细胞的膜结构和功能的完整性。此外，水飞蓟宾还能促进肝脏组织细胞的DNA与其结构蛋白质的合成，进而促进肝细胞的修复与再生[7]。

综上所述，SPC和水飞蓟宾都对四氯化碳所致的小鼠肝损伤的保护作用明显，但是SPC功效更好，值得临床进一步研究。

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(编校：谭玲)

Comparison of the protective effect of silibinin phosphatidylcholine complex and silibinin on mice liver injury by CCl4

WANG Yu1,ZHANG Ai-yun1,ZHANG Xu1,LV Ling2

(1.Department of Infectious Diseases, Ningxia Medical University General Hospital, Yinchuan 750004，China；2.Department of Medical Science, Nanjing Medical University, Nanjing 210029, China)

ObjectiveTo study the protective effect of silibinin phosphatidylcholine complex (SPC)and silibinin on mice liver injury by CCl4.Methods100 Kunming mice were randomly divided into five groups, 20 in each group, and they were divided into silibinin group, SPC-A group, SPC-B group, CCl4model group and normal control group.Their liver function (serum ALT and AST,comparison of liver pathology slice)were recorded and compared.ResultsCompared with the CCl4model group, serum ALT and AST of silibinin group were significantly lower than CCl4group, there were significant differences (P<0.05);serum ALT and AST of SPC-A group and SPC-B group were also significantly lower than CCl4model group,there were significantly different (P<0.05);serum ALT and AST of SPC-A group and SPC-B group were also significantly lower than silibinin group,there were significantly different (P<0.05); serum ALT and AST in SPC-B group of mice were less than SPC-A group, there were significant differences (P<0.05).Liver pathology slice were compared, slice of the normal control group was completely normal; in silibinin group, SPC-A group, SPC-B group the pathological changes in the liver of mice reduced, pathological changes in the above groups were less than CCl4model group, and the pathological changes extent were sorted the list by ascending counts,the order was the normal control group, SPC-B group, SPC-A group, silibinin group, CCl4model group. ConclusionThe protective effect of silibinin phosphatidylcholine complex (SPC)and silibinin are good mice with liver injury by CCl4,while SPC is better, it is worthy of further clinical study.

silibinin phosphatidylcholine complex; silibinin; carbon tetrachloride; liver injury

国家自然科学基金(81100270)

王煜，男，硕士，副主任医师，研究方向：慢性肝病的诊治，E-mail：qch1821460054@163.com。

R285

A

1005-1678(2015)01-0071-03