鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中PCNA和C-erbB-2的表达及临床意义研究

陆鸿略,米洋,梁媛,康菲

(1.承德医学院附属医院 耳鼻咽喉科，河北 承德 067000;2.承德医学院附属医院 体检科，河北 承德 067000)



鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中PCNA和C-erbB-2的表达及临床意义研究

陆鸿略1,米洋1,梁媛1,康菲2

(1.承德医学院附属医院 耳鼻咽喉科，河北 承德 067000;2.承德医学院附属医院 体检科，河北 承德 067000)

目的 探讨鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和原癌基因蛋白质(oncogene protein,C-erbB-2)的表达情况及临床意义。方法 利用免疫组织化学方法检测45例鼻腔鼻窦鳞癌的PCNA和C-erbB-2的表达情况，并选择15例正常鼻腔黏膜作为正常对照。结果 各级鼻腔鼻窦鳞癌之中，PCNA和C-erbB-2均有表达，与正常对照鼻腔黏膜相比，差异均有统计学意义(P<0.05)，且有随鳞癌分级升高表达不断增强的趋势。但在鳞癌中的表达，PCNA和C-erbB-2不存在显著的相关性。结论 PCNA和C-erbB-2的表达均能够反映出鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的增殖活性，且其表达强度可以反映出鳞癌细胞的增殖活性高低。

鼻腔鼻窦鳞状细胞癌；增殖细胞核抗原；原癌基因蛋白质

鼻腔及鼻窦恶性肿瘤是一种临床较为常见的疾病，且最为常见的是鳞状细胞癌[1]。鼻腔鼻窦恶性肿瘤的发病可能与外伤以及长期接触各种致癌物质，还有反复炎症刺激等因素有关[2]。恶性肿瘤的发生机制十分复杂，涉及到多种因素和多基因突变的长期、分阶段过程[3]。但就目前的研究情况来看，关于鼻腔鼻窦恶性肿瘤的分子生物学发病机制尚不够清楚。本研究中，笔者利用免疫组织化学方法检测45例鼻腔鼻窦鳞癌的增殖细胞(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和原癌基因蛋白质(oncogene protein,C-erbB-2)，探讨鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中PCNA和C-erbB-2的表达情况及临床意义。现将本研究相关结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 45例鼻腔鼻窦鳞癌标本均为承德医学院附属医院手术切除或活检的存档标本，所有标本均经甲醛固定，石蜡包埋。标本来源患者中，男34例，女11例，年龄22～78岁，平均年龄(51.1±2.3 )岁。所有入选标本均再作常规切片，行苏木精(hematoxylin，HE)染色，与原始切片对照诊断无误。并选择15例正常鼻腔粘膜作为正常对照，男9例，女6例，年龄23～79岁，平均年龄(52.8±1.37)岁。

1.2 方法

1.2.1 试剂：鼠抗人PCNA单克隆抗体(PCIO)(北京中杉金桥生物技术有限公司)、兔抗人C-erbB-2多克隆抗体(上海领成生物科技有限公司)和LSAB试剂盒(北京拜尔迪生物技术有限公司)。兔抗鼠和猪抗兔生物素抗体(上海齐瑞生物技术有限公司)；链霉亲和素(streptavidim,SA)购自广州天宝顷原生物科技开发有限公司。

1.2.2 检测方法：所有标本均切片，常规脱蜡至水化。利用蒸馏水进行冲洗，并加缓冲液浸泡。滴加正常血清。于室温下放置0.5 h后取出多余血清，并分别加兔抗人c-erbB-2多克隆抗体和鼠抗人PCNA单克隆抗体(PCIO)，于室温下放置0.5 h后加缓冲液冲洗并浸泡。分别加1:100兔抗鼠和猪抗兔生物素化抗体，于室温下孵育0.5 h后加缓冲液冲洗并浸泡。然后加1:400 SA于室温下孵育0.5 h后加缓冲液冲洗并浸泡，利用DAB进行显色处理。利用流动水进行冲洗后使用苏木素进行复染，再次流水冲洗，并逐级进行乙醇脱水，二甲苯透明。最终，利用中性树胶进行封片处理。正常对照标本利用TBS来代替一抗。

1.3 结果判定标准 利用低倍镜于肿瘤细胞密集处进行观察，选择5～8个高倍视野，每个视野计数100个细胞，取均数。按照阳性细胞在视野细胞总数中所占的比例进行结果判定，其中C-erbB-2：-：阳性细胞数为0；+：阳性细胞数≤25%；++：阳性细胞数为26%～50%；+++：阳性细胞数>51%。PCNA：+：阳性细胞数≤25%；++：阳性细胞数为26%～50%；+++：阳性细胞数51%～75%；++++：阳性细胞数>75%。

1.4 统计学方法 采用SPSS 16.0统计学软件进行统计分析，

2 结果

2.1 PCNA和C-erbB-2在鼻腔鼻窦鳞癌和正常鼻腔黏膜中的表达情况比较 经检验，C-erbB-2在鼻鳞状细胞癌中的表达，PCNA阳性细胞核染成棕色颗粒。Ⅰ级鳞癌中，阳性细胞主要分布在癌巢周围的基底细胞区，癌巢中的棘细胞数量较少，且随着组织学分级的升高，PCNA阳性细胞数比例更高。Ⅲ级鳞癌时，PCNA阳性细胞遍布于整个癌细胞团块中、条索中(见图1)。

图1 C-erbB-2在鼻鳞状细胞癌中的表达 (×400)Fig.1 Expression of C-erbB-2 in nasal squarmous cell carcinoma(×400)

C-erbB-2在不同级别鳞癌中的表达率分别为53.5%、60.0%、67.7%。正常对照组未出现着色现象，经χ2检验P<0.05，且趋势χ2检验P<0.05。在鳞癌Ⅰ级中，阳性细胞主要分布在癌巢周围的基底细胞区，癌巢中的棘细胞数量较少。随着组织学分级的升高，PCNA阳性细胞数比例更高。Ⅲ级时，PCNA阳性细胞遍布在整个癌细胞团块中、条索中(见图2)。

图2 PCNA在鼻鳞状细胞癌中的表达 (×400)Fig.2 Expression of PCNA in nasal squamous cell carcinoma(×400)

按照PCNA染色阳性细胞数进行分组，分为低表达(+、++)和高表达(+++、++++)2组，并将正常黏膜均视为低表达，则鳞癌不同级别中的高表达分别为46.7%、73.3%、86.7%，正常对照组未出现着色现象，经χ2检验P<0.05，且趋势χ2检验P<0.05。见表1。

表1 PCNA和C-erbB-2在鼻腔鼻窦鳞癌和正常鼻腔黏膜中的表达情况比较(n=15)

2.2 PCNA和C-erbB-2表达的相互关系分析 在鳞癌中的表达，PCNA和C-erbB-2均过度表达，且与鳞癌的分化程度有一定关系。但2者在鼻腔鼻窦鳞癌中的表达经χ2检验不存在显著的相关性，表达强度亦无明显的联系(r=0.51，P>0.05)，见表2。

表2 PCNA和C-erbB-2表达的相关性分析

3 讨论

鼻腔及鼻窦鳞状细胞癌的发生机制十分复杂，可能与反复炎症刺激、长期接触致癌物质、良性肿瘤恶变、外伤等因素有关。而且，恶性肿瘤的发生受到多种因素影响、多基因突变导致的长期的、分阶段的过程。

对不同的细胞而言，细胞增殖是其生命的基本特征，并与机体的生长、生理性再生、创伤修复、细胞程序性死亡以及各种恶性肿瘤的发生之间存在十分密切的关系。肿瘤的增殖活动会对其生物学行为、临床过程和对治疗的反应等多方面产生影响，因此，通过对各种肿瘤细胞增殖期标志物的检测可以准确客观反映肿瘤的增殖潜能。目前关于鼻腔鼻窦恶性肿瘤的分子生物学发病机制目前尚不清楚，而PCNA和C-erbB-2和重要的反应细胞增值活性的标志物，可以用来对疾病情况进行评估等，因此被广泛应用于对鼻腔及鼻窦鳞状细胞癌的临床检测之中[4-5]。C-erbB-2原癌蛋白又被称为neu或者HER-2基因，原本是细胞正常生命活动的必要蛋白，然而其发生结构变异或过度表达时则往往导致癌变[6]。C-erbB-2过度表达见于多种恶性肿瘤，具有较强的免疫原性，并定位于细胞膜表面的特性。C-erbB-2基因所编码的蛋白是分子量为185kDa的穿膜蛋白，可以抑制酪氨酸激酶活性，该基因的过度表达和扩增可见于多种肿瘤，与肿瘤的分化程度和分级有密切关系。在机体处于正常状态的时候，C-erbB-2原癌蛋白处于非激活状态，并参与到机体的多种活动之中，例如细胞生长和细胞分化调节等[7-8]。在正常的组织中，C-erbB-2原癌蛋白表达大多发生在上皮细胞膜。但如果人体出现异常，便会出现C-erbB-2异常表达的情况[9]。有学者通过研究发现[10]，如果采用免疫组化SP法检测乳腺癌组织中C-erbB-2表达情况，并结合临床病理特征进行相关性分析，可以发现C-erbB-2表达与淋巴结转移、雌激素受体、孕激素受体相关，并认为，C-erbB-2检测对判断乳腺癌预后有重要意义。本次研究结果显示，各级鼻腔鼻窦鳞癌之中C-erbB-2均有表达，较之正常对照鼻腔黏膜差异均有统计学意义，且有随鳞癌分级升高表达不断增强的趋势。即说明，C-erbB-2参与到了细胞增殖过程，在促进细胞增殖方面发挥出重要的作用，其反常表达可能与鳞癌细胞的恶性发展之间存在一定的关系。PCNA是一种细胞周期调控蛋白，参与到了DNA的合成过程。PCNA在核中的水平从G1，后期开始上升，先于DNA的合成，S期达到高峰，G2期开始下降，M期和静止期维持最低水平。PCNA 被认为是多种细胞内过程的联系点，包括细胞周期控制、DNA复制、核苷酸切除修复、复制后错配修复、碱基切除修复和至少一种凋亡途径等[11-12]。PCNA的表达程度可以较为直观的反应出不同肿瘤的增殖活性。赵醒[13]等应用免疫组织化学SP法分别检测150例食管鳞癌组织和35例正常食管黏膜组织(距离癌灶边缘5 cm以上经病理证实)中PCNA蛋白的表达情况。结果发现，PCNA蛋白在正常食管黏膜组织中的表达明显低于食管鳞癌组织(P<0.05)。并认为，PCNA蛋白过表达可能与食管鳞癌的发生、发展以及浸润转移有关。本次研究结果显示，各级鼻腔鼻窦鳞癌之中，PCNA均有表达，较之正常对照鼻腔黏膜差异均有统计学意义，且有随鳞癌分级升高表达不断增强的趋势。即说明，肿瘤细胞分裂、增殖十分活跃，PCNA蛋白的表达也随之出现显著增强的情况，表明PCNA可能与鳞癌细胞的恶性发展之间存在一定的关系，提示临床可以将PCNA作为对鼻腔鼻窦鳞癌恶性程度进行判定的生物学指标之一。本次研究结果还显示，在鳞癌中的表达，PCNA和C-erbB-2经χ2检验不存在显著的相关性。但2者均出现过度表达的情况，且与鼻腔鼻窦鳞癌的分化程度之间存在一定的关系。即说明，PCNA和C-erbB-2可能通过不同的信号传导途径对细胞增殖产生影响，并积极的参与到鼻腔鼻窦鳞癌的发生发展过程中。另外，本研究利用免疫组织化学法进行PCNA和C-erbB-2表达情况的检测，获得了良好的研究结果。但是，所使用的病理标本可能受到存档蜡块时间的影响而出现肿瘤细胞表面抗原丢失的情况[14]。因此可能存在抗原分布不均的现象，导致一定研究误差的出现。因此，本研究还存在一些缺陷和不足，还需要在今后的研究中予以不断完善。

综上所述，PCNA和C-erbB-2的表达均能够反映出鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的增殖活性，且其表达强度可以反映出鳞癌细胞的增殖活性高低。提示PCNA和C-erbB-2在鼻腔鼻窦鳞状细胞癌的发生发展中起到了一定的作用，可以用来对临床治疗和预后等提供一定的参考依据。

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(编校：谭玲)

Study on the expression of PCNA and C-erbB-2 in nasal cavity paranasal sinus squamous cell carcinoma and it clinical significance

LU Hong-lue1,MI Yang1,LIANG Yuan1,KANG Fei2

(1.Department of Otorhinoloaryngology, Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Chengde 067000, China;2.Department of physical Examination,Affiliated Hospital of Chengde Medical College,Chengde 067000,China)

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of proliferating cell nuclear antigen (PCNA)and oncogene protein (C-erbB-2)in the nasal cavity paranasal sinus squamous cell carcinoma.MethodExpression of PCNA and C-erbB-2 were tested in 45 cases of the nasal cavity paranasal sinus squamous cell carcinoma by the immunohistochemical method, and 15 cases of normal nasal mucosa were selected as the normal control.ResultsAll levels of sinonasal squamous cell carcinoma, PCNA and C-erbB-2 expressed in nasal mucosa, and compared with the normal control group, the differences were statistically significant (P<0.05), and with the increasing grade of squamous, cell carcinoma expression increased.But expression in squamous cell carcinoma, PCNA and C-erbB-2 had no significant correlation. ConclusionExpression of PCNA and C-erbB-2 can reflect the sinonasal squamous cell carcinoma proliferation activity, and the expression can reflect the proliferation activity of squamous cell carcinoma.

sinus nasal squamous cell carcinoma; proliferating cell nuclear antigen;oncogene protein

陆鸿略，男，硕士，主治医师，研究方向：鼻部肿瘤的研究，E-mail:luhonglue@126.com。

R739.6

A

1005-1678(2015)01-0094-03