针刺风池穴预处理对脑梗死大鼠的缺血耐受现象研究

秦彦强，孙忠人，魏庆双，姜 凡，刘尚策，张亚娟

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨150040)

随着社会的发展，老龄化的进一步加重，脑血管疾病逐渐成为目前我国三大致死性疾病之一［1］。而在脑血管疾病谱中，脑血栓形成发病率占到1/3。由于中枢神经元损伤的不可逆性，无法自然恢复，往往形成残疾，重则危机生命。因此，积极开展脑梗死的预防工作，对于降低缺血性脑血管疾病尤其是脑梗死的发病率、致残率、致死率等显得尤为重要。

临床中发现，针刺风池穴可以改善脑供血不足所引发的各种症状，包括眩晕、一过性黑蒙等，尤其对椎-基底动脉系统TIA 具有良好的改善作用。而有研究表明TIA 可诱发脑缺血耐受，并且有学者证实针刺风池穴对椎-基底动脉系统血流速度具有“双相、良性”调节作用［2］。笔者临床中总结发现，曾经因后循环缺血而采用针刺风池穴治疗的患者，发生脑血栓形成性脑梗死的病灶面积通常较小，经康复训练后，后遗症较少。因此，推测针刺风池穴可能存在激活大脑的缺血耐受现象。为进一步证实此推断，设计实验研究，探讨针刺风池穴预处理对缺血性脑血管疾病的预防及治疗作用。

1 材料及方法

1.1 实验动物

选用健康成年的Wistar 雄性大鼠32 只，由黑龙江中医药大学内的实验动物中心提供，所有实验大鼠体重约为(330 ±10)g。

1.2 分组方法

所有实验用Wistar 大鼠，应用随机数字表法，分为4 个小组，各组大鼠分布情况如下:正常组8 只，脑梗死组8 只，缺血预处理组8 只，针刺预处理组8 只。

1.3 模型制备

线拴法制备大鼠大脑中动脉闭塞的动物模型:采用改良Zea Longa［3］方法制备左侧大脑中动脉闭塞脑梗死模型。

1.4 缺血预处理方法

动物麻醉，经颈外动脉插入自制尼龙线栓，栓塞大脑中动脉后，间断缺血30 min(3 次10 min，每个10 min后将线栓退至颈内动脉内恢复血流10 min)，术后拔出线栓，结扎颈外动脉的残端。常规饲养24 h后，采用改良Zea Longa 法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)动物模型。

1.5 针刺方法

针刺大鼠双侧风池穴，每日针刺l 次，每次30 min。连续针刺7 天。针刺结束后行MCAO 动物模型制备。

1.6 指标检测及方法

指标检测由不了解实验分组及治疗情况的研究人员负责，并进行指标评估与记录。

1.6.1 神经功能评定 实验动物麻醉清醒后，将其放回鼠笼，自由饮食，分别于MCAO 后24 h、72 h 和7 天分别进行神经功能评分。评分采用Longar5 分制标准。评分标准如表1。

表1 大鼠神经功能评分标准

1.6.2 平衡试验(Beam Balanee Test) 各组大鼠分别于实验周期的第24 h、72 h 和7 天3 个时间点分别进行平衡功能评测。评分方法:将一根宽1.5 cm、长150 cm 的木条一端悬空，另一端固定。观察1 min 内大鼠的行为反应，按表2 标准进行评分。在每个评测日进行4 次测试，两次间歇2 min。4 次测试结果取平均值进行统计分析。

表2 大鼠平衡实验评测标准

1.6. 3 Morris 水迷宫试验 定位航行实验(Place Navigation Test):定位航行实验是用来测量大鼠对水迷宫学习和记忆的获得能力。将4 组大鼠于实验周期开始后第4 天开始进行学习训练。历时4 天。每天进行4 次训练，每次训练间隔为30 s。

空间探索实验:于定位航行实验第7 天下午撤除平台，大鼠于原平台对侧象限放入水池，观察实验大鼠在120 s 内在原平台所在象限巡游时间的总和，记录为空间探索时间。

1.7 统计分析

2 实验结果

2.1 各组大鼠的神经功能学评分

正常组神经功能评分为0 分，脑梗死组、缺血预处理组和针刺预处理组神经功能评分均有不同程度的缺损，重复测量数据分析显示，各组间存在差异，有统计学意义，P ＜0.05。各组不同时间点神经功能评分差异有统计学意义，P ＜0.05。其中缺血预处理组和针刺预处理组神经功能评分改善情况优于脑梗死组，差异有统计学意义，P ＜0.05。而针刺预处理组和缺血预处理组比较，差异无统计学意义，P ＞0.05。4 组大鼠神经功能评分结果见表3。

表3 各组大鼠神经功能学评分比较 (±s)

表3 各组大鼠神经功能学评分比较 (±s)

注:与脑梗死组比较，▲P ＜0.05;与缺血预处理组比较，★P ＞0.05。

组 别 n 1 天 3 天 7天正常组8 0.00 ±0.00 0.00 ±0.00 0.00 ±0.00脑梗死组 8 2.63 ±0.74 2.38 ±0.52 1.63 ±0.52缺血预处理组 8 2.75 ±0.71 1.50 ±0.54 0.75 ±0.71▲针刺预处理组 8 2.50 ±0.93 1.38 ±0.52 0.88 ±0.99▲★

2.2 各组大鼠平衡试验结果

各组大鼠分别于实验周期的第24 h、72 h 和7 天3 个时间点进行平衡功能评测。采用重复测量数据方差分析显示，各组间总体差异有统计学意义，P ＜0.05，缺血预处理组和针刺预处理组平衡功能改善情况优于脑梗死组，差异有统计学意义，P ＜0.05。而针刺预处理组和缺血预处理组比较，差异无统计学意义，P ＞0.05。各组平衡实验结果见表4。

表4 各组大鼠平衡试验结果比较 (±s)

表4 各组大鼠平衡试验结果比较 (±s)

注:与脑梗死组比较，▲P ＜0.05;与缺血预处理组比较，★P ＞0.05。

组 别 1 天 3 天 7天正常组1.28 ±0.21 1.25 ±0.13 1.31 ±0.11脑梗死组 4.38 ±0.74 3.75 ±0.71 3.13 ±0.99缺血预处理组 4.25 ±0.89 3.13 ±0.84 2.00 ±0.76▲针刺预处理组 4.13 ±0.84 2.75 ±0.71 2.25 ±1.04▲★

2.3 Morris 水迷宫学习记忆能力比较

2.3.1 定位航行试验结果 4 组大鼠于实验周期开始后第4 天开始学习训练，记录第7 天4 次训练所用时间的平均值作为逃避潜伏期指标。采用单因素方差分析显示，各组间差异有统计学意义，P ＜0.05。脑梗死组、缺血预处理组和针刺预处理组潜伏期时间明显延长，与正常组比较差异有统计学意义，P ＜0.05。而缺血预处理组和针刺预处理组与脑梗死组比较，潜伏期时间减小，差异有统计学意义P ＜0.01。针刺预处理组和缺血预处理组比较，差异无统计学意义，P ＞0.05。各组定位航行逃避潜伏期时间见表5。

表5 各组大鼠定位航行逃避潜伏期时间比较 (s，±s)

表5 各组大鼠定位航行逃避潜伏期时间比较 (s，±s)

注:与脑梗死组比较，△P ＜0.01;与缺血预处理组比较，★P ＞0.05。

组 别 7天正常组22.38 ±3.02脑梗死组 41.63 ±11.08缺血预处理组 25.00 ±5.61△针刺预处理组 27.75 ±7.57△★

2.3.2 空间探索试验结果 4 组大鼠空间探索试验评定结果采用单因素方差分析，结果显示各组间差异有统计学意义，P ＜0.05。脑梗死组、缺血预处理组和针刺预处理组大鼠120 s 内在原平台所在象限巡游时间明显少于正常组，差异有统计学意义，P ＜0.05。提示记忆功能存在缺损。而缺血预处理组和针刺预处理组与脑梗死组比较，空间探索时间增加，差异有统计学意义，P ＜0.01。针刺预处理组和缺血预处理组比较，差异无统计学意义，P ＞0.05。各组空间探索时间见表6。

表6 各组大鼠空间探索时间比较 (±s)

表6 各组大鼠空间探索时间比较 (±s)

注:与脑梗死组比较，△P ＜0.01;与缺血预处理组比较，★P ＞0.05。

组 别 时间(s)正常组60.25 ±6.84脑梗死组 34.63 ±5.40缺血预处理组 46.88 ±5.97△针刺预处理组 45.63 ±4.37△★

3 讨论

缺血性脑血管疾病是一组以动脉硬化为基础，以脑组织发生缺血缺氧性损伤为主要病理改变的疾病。在损伤早期，存在多种机制包括局部炎症反应［4-5］、血脑屏障破坏［6］、自由基损伤［7］、兴奋性氨基酸毒性反应［8］、细胞内钙超载［9］、细胞凋亡［10］等。因损伤区域不同，临床变现通常不一。

Kitagawa 等［11］于1990 年报导在沙土鼠大脑内存在缺血耐受现象。缺血耐受现象的发现为脑梗死的防治提供了新的思路，开辟了新途径，最近实验研究发现除缺血之外，包括低氧［12］、高氧［13-14］、低温［15］、药物［16］、艾灸［17-18］等其他多种预处理方式均可以引起大脑对再次缺血的耐受。并且实验证实针刺预处理也可诱导脑缺血耐受，从而对脑组织起保护作用［19-20］。

文献研究发现，针刺风池穴可以调节椎基底动脉血流［21］，临床中也发现，针刺风池穴可以改善脑供血情况，改善脑血流，擅长治疗因脑供血不足引起的眩晕。《铜人腧穴针灸图经》中指出:风池主“目眩，苦头痛，颈项痛不得回顾，目泪出，欠气多。”风池穴位于斜方肌两侧与胸锁乳突肌上端汇合处，上项线直下凹陷处发际内。与颈交感神经联系密切。临床中笔者发现，针刺风池穴，可以起到降低交感神经紧张度、兴奋迷走神经的作用。所以，笔者采用风池穴预处理，实验结果证实，缺血预处理组、针刺预处理组与梗死组神经功能学评分、平衡实验评分比较，均有显著性差异(P ＜0.05)，针刺预处理组定位航行试验逃避潜伏期(27.75 ±7.57)s，空间探索时间(45.63 ±4.37)s，与脑梗死组比较有显著性差异(P ＜0.05)。提示针刺风池穴预处理，可以改善脑梗死大鼠神经功能，恢复平衡功能，提高学习、记忆能力，可以导致缺血性脑卒中的缺血性耐受。由于针刺无毒副作用、简单易行、安全可靠、患者易于接受，值得在临床中推广使用。

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