舒心片薄层色谱鉴别及木香烃内酯和去木香烃内酯的含量测定

刘恬佳，雷明明，关晓清，于秀华*

（1.长春中医药大学，长春130117；2.解放军第208医院，长春130061）

舒心片薄层色谱鉴别及木香烃内酯和去木香烃内酯的含量测定

刘恬佳1，雷明明1，关晓清2，于秀华1*

（1.长春中医药大学，长春130117；2.解放军第208医院，长春130061）

目的制定舒心片质量标准方案，控制制剂成品质量。方法采用薄层色谱法对舒心片中的沉香、莪术等进行鉴别。采用HPLC法测定木香中木香烃内酯和去氢木香烃内酯总含量。色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（58∶42）为流动相；检测波长为225 nm。结果TLC法对制剂中鉴别药材专属性强、斑点分离清晰、重现性好，阴性无干扰；HPLC测定木香烃内酯在0.023 7～0.237 0μg范围内呈良好的线性关系，去氢木香烃内酯在0.158 8～1.588 0μg范围内呈良好的线性关系，回收率为96.27%，RSD为1.17%。结论TLC操作方便、分辨力高；HPLC法专属性强，重复性好，可作为舒心片制剂的质量控制标准。

舒心片；色谱法，薄层；色谱法，高效液相；去氢木香烃内酯；木香烃内酯

中医学认为，冠心病属于心脏与营养心脏之络脉的疾病。由于年老体衰，脏腑功能虚损，阴阳气血失调，加上七情内伤、饮食不节、寒冷刺激、劳逸失度等因素的影响，导致气滞血瘀，胸阳不振，痰浊内生，使心脉痹阻而致病。因此，冠心病主要呈现本虚标实的病理状态。本虚责之于气、血、阴、阳，标实主要涉及血瘀、气滞、痰浊、寒凝、火热等病理产物或因素［1］。舒心片中含有沉香、木香、莪术、佛手、当归、茯苓、香附、姜黄、枳实、麦芽、香橼、三棱、丹参等二十几味中药。其功能主治为解肝郁，行气滞，祛胸痹。用于气滞血瘀症冠心病，心绞痛，心律不齐，气短腹胀，胸闷心悸。制剂中姜黄的主要成分姜黄素可以抑制黄嘌呤脱氢酶向氧化酶转化，减少氧自由基的生成，提高超氧化物歧化酶的活性，清除氧化物，有较强的抗脂质过氧化和稳定细胞膜的作用，对心肌缺血起保护作用［2-3］。丹参具有扩张冠脉、增加冠脉血流量、防止心肌缺血和心肌梗死、改善微循环、保护心脏的作用［4-6］。当归可能通过促进体内NO的生成、抑制巨噬细胞在非梗死区的浸润和聚积，阻断炎症反应和反应性纤维化的发生，从而起到防治和逆转左室重构、改善心脏功能的作用［7］。

1 实验材料

1.1 仪器LC-2010A型高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-10AVP检测器，C18柱（4 mm×25 cm，5μm），Lambda25型紫外分光光度计（美国PE分析仪器厂），CP225D型双量程电子分析天平（德国Sartoris），AMW220D型电子分析天平（日本岛津），JH2102电子天平（上海精密科学仪器有限公司），CAMAG型薄层色谱成像仪（瑞士CAMAG公司），101-1A型数显式电热恒温干燥箱（上海阳光实验仪器有限公司），KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），薄层板（青岛海洋化工厂分厂）。

1.2 药品沉香对照药材（121222-201203），木香对照药材（120921-201204），姜黄对照药材（121188-200502），丹参对照药材（120923-201113），莪术醇对照品（0185-9703），姜黄素对照品（110823-9802），木香烃内酯对照品（111524-201107），去氢木香烃内酯对照品（111525-201008），以上对照药材及对照品均购于中国药品生物检定所，所用试剂为分析纯、色谱纯。

2 实验方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 沉香薄层色谱鉴别［8-9］沉香对照药材0.5 g，加乙醚30 mL，超声处理60 min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作为对照药材溶液。取本品20片，除去包衣，研细，加乙醚50 mL，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版1部附录ⅥB）试验，吸取上述2种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚（10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.1.2 莪术薄层色谱鉴别［10-11］取莪术醇对照品，加石油醚（60～90℃）制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取本品10片，除去包衣，研细，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液阴性对照品溶液5μL、上述对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（58∶42）为流动相；检测波长为225 nm。理论板数按木香烃内酯峰计算应不低于3 000。

2.2.2 对照品溶液的制备取木香烃内酯及去氢木香烃内酯对照品，精密称定，分别为11.85和15.88 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取木香烃内酯对照品溶液1 mL、去氢木香烃内酯对照品溶液5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得（每1 mL含木香烃内酯11.85μg、去氢木香烃内酯79.4μg）。

2.2.3 供试品溶液的制备［12-13］取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约5.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，放置过夜，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 专属性考查为进一步确定方法的可行性，取不含木香的阴性对照液，依法测定，结果阴性对照液色谱在与对照品峰相应的保留时间处无色谱峰，表明无干扰，方法可行。

2.2.5 检测波长的确定根据对照品的紫外吸收图，最大吸收峰为225 nm，故确定检测波长为225 nm。

2.2.6 系统适用性验证比较优选后色谱条件的理论板数、分离度及保留时间等参数，确定含量测定的色谱条件，结果见表1。

表1 系统适用性试验结果

2.2.7 方法学考察

2.2.7.1 标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液2.0、4.0、8.0、10.0、15.0、20.0μL，注入液相色谱仪，测定，以峰面积积分值为纵坐标，以对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线。木香烃内酯回归方程：Y＝2.01×106X+2.53×103，r＝0.999 6，线性范围：0.023 7～0.237 0μg。去氢木香烃内酯回归方程：Y＝1.33×106X+7.37×103，r＝0.999 6。线性范围：0.158 8～1.588 0μg。

2.2.7.2 中间精密度试验取同一对照品溶液，于不同时间、不同仪器、不同人员分布测定，进样量10μL，结果RSD分别为0.57%、0.54%。试验结果表明：精密度较好。

2.2.7.3 稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24 h进样，进样量10μL，依法测定，RSD分别为0.55%、0.21%。

2.2.7.4 重现性试验取样品，独立依正文方法测定6次，结果每片中木香烃内酯与去氢木香烃内酯的总量分别为0.23、0.24、0.24、0.23、0.23、0.24 mg，RSD为2.47%。

2.2.7.5 回收率试验［14-16］取已知含量的样品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约3.0 g，精密称定，加入对照品溶液15 mL（浓度为18.4μg／mL与145.1μg／mL），按2.2.3方法进行测定，计算回收率，结果见表2。

表2 回收率测定结果

试验结果表明：回收率平均值为96.27%，RSD值为1.17%，证明此方法可行。

3 结论

本实验以药典为依据，根据所含药物成分极性的特点及各成分之间的相互作用来选择合适的提取方法及良好的展开剂。如沉香主要化学成分为挥发油，包括沉香醇、沉香螺醇、二氢沉香呋喃、去甲沉香呋喃酮等，因此采用乙醚浸泡的方法，也可提取挥发油。佛手的主要含有各种黄酮类成分，如橙皮苷、柠檬油素等。易溶于甲醇、乙醚等有机溶剂，故采用甲醇超声后，乙醚提取的方法。莪术的薄层鉴别在中国药典2010年版1部中以吉玛酮为对照进行鉴别，但因本处方中含有姜黄，来源相同，入药部位不同，含有相同的成分姜黄素、吉玛酮。所以本制剂中莪术以莪术醇为对照品来进行薄层鉴别试验，采用石油醚提取的方法。

在薄层鉴别中，沉香、木香、莪术、佛手等的斑点分离清晰，阴性无干扰，重现性好。在薄层鉴别的方法学的考察中，对不同的温度、湿度，以及不同的厂家、不同的点样方式的情况下的展开条件进行测定，结果表明，所鉴别的成分的展开条件不受温度、湿度等影响，该方法可行，故以该标准可列入本制剂的质量标准。

本制剂处方由于陈皮、青皮、枳壳、枳实等均含有相同的成分，专属性差。木香在处方中粉末入药，为中国药典1部收载品种，采用高效液相色谱法测定木香烃内酯、去氢木香烃内酯的总和，方法成熟，故我们采用高效液相色谱法测定木香中木香烃内酯、去氢木香烃内酯总和的含量，以控制制剂的内在质量。

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Shuxin Tablets by TLC and RP-HPLC of quantitative determination of costunolide and dehydrocostuslactone

LIU Tianjia1，LEI Mingming1，GUAN Xiaoqing2，YU Xiuhua1*
（1.Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，China；2.NO.208 Hospital of Chinese People's Liberation Army，Changchun 130061，China）

ObjectiveTo draft the quality standard of Shuxin Tablets.MethodsTo study the Aucklandiae Radix and Curcumae Rhizoma by TLC；To establish a RP-HPLC method for the determination of costunolide and Dehydrocostuslactone in Shuxin Tablets.The chromatographic column was C18，the mobile phase was Acetonitrile-water（58：42）at a flow velocity of 1.0 mL／min，and the detection wave length was 225 nm.ResultsThe linear concentration range of costunolide was within 0.023 7μg～0.237 0μg，Dehydrocostuslactone was within 0.158 8μg～1.588 0μg；The average recovery rate was 96.27%（RSD＝1.17%）.ConclusionTLC and HPLC procedures are simple，rapid and accurate，and they can be used for the quality control of Shuxin Tablets.

Shuxin Tablets；TLC；RP-HPLC；；dehydrocostuslactone；costunolide

R285.5

A

1003-5699（2015）09-0948-04

：张瑞彬

2015-07-28）

10.13463／j.cnki.jlzyy.2015.09.025

吉林省科技发展计划项目（2014020427yy）。

刘恬佳（1991-），女，硕士研究生，主要从事中药学研究。

*通信作者：于秀华，电子信箱-zyh1955＠163.com